一种猪毛乳头细胞的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种猪毛乳头细胞的培养方法，所述猪毛乳头细胞取自猪耳皮肤组织，采用Ⅰ型胶原酶、胰酶进行消化分离，采用胎牛血清培养基加入鼠尾胶原进行细胞培养。采用本发明专利技术提供的方法，表皮与真皮结构易于区分，毛囊结构清晰分明，易于分离，缩短了细胞传代时间13小时左右，并且贴壁更牢。本发明专利技术提供的方法可以使猪毛乳头细胞在7代以内保持毛乳头细胞特性且纯度高，因此可批量获得高纯度且传代一致性较好的猪毛乳头细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种猪毛乳头细胞的培养方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种猪毛乳头细胞的培养方法。
技术介绍
毛囊是皮肤最为重要的附属器官，其发育涉及外胚层和中胚层的相互作用。毛囊的周期性循环再生长(生长期、退化期和静止期的周期性循环)的特性导致新毛发的生长与旧毛发的脱落。当毛囊的周期性再生功能发生异常时，会导致脱发、多毛症和毛干疾病等毛囊疾病。随着社会的发展，人们对影响生活与工作的毛发越来越重视，对毛囊周期性发育的研究变得越来越重要。目前，对于脱发问题有效的解决方法是进行毛发移植手术，由于毛发移植是对原有毛囊的重新分配和布局，并没有产生新的毛囊，所以不适于较大面积毛发缺失的治疗。如果能够诱导出新的毛囊，尤其能够在体外构建出毛囊的话，那么这一问题将迎刃而解。其中，毛乳头是毛囊的重要组成部分，在毛囊的形成、发育和毛囊周期的调控当中是不可或缺的，其分泌的多种细胞因子、生长因子可通过异种移植等手段，在体外条件下进行诱导毛囊的重建过程。因此，在体外对毛乳头细胞进行培养对研究脱发问题具有重要意义。在人类毛囊问题的研究上，最理想的材料为人毛乳头细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪毛乳头细胞的培养方法，其特征在于，所述猪毛乳头细胞取自猪耳皮肤组织，所述猪耳皮肤组织来自屠宰后半小时内猪只耳朵较薄部位的皮肤组织，在不卷曲的情况下置于离心管中，并用生理盐水浸没，8-10小时内完成猪毛乳头细胞分离培养操作；/n有关毛乳头细胞的培养方法具体包括如下步骤：所述猪毛乳头细胞取自上述耳样，具体包括如下步骤：/nS1、将耳样从生理盐水中取出，将耳样皮肤剪成1.5cm*4cm状长条，在生理盐水中清洗，刮去表面脏物，随后放到碘伏溶液中清洗2min；再放到生理盐水中清洗，然后放到75％酒精溶液中进行清洗2min；再一次将耳样放到生理盐水中清洗，然后放到PBS中进行清洗2min，最后放...

【技术特征摘要】
1.一种猪毛乳头细胞的培养方法，其特征在于，所述猪毛乳头细胞取自猪耳皮肤组织，所述猪耳皮肤组织来自屠宰后半小时内猪只耳朵较薄部位的皮肤组织，在不卷曲的情况下置于离心管中，并用生理盐水浸没，8-10小时内完成猪毛乳头细胞分离培养操作；
有关毛乳头细胞的培养方法具体包括如下步骤：所述猪毛乳头细胞取自上述耳样，具体包括如下步骤：
S1、将耳样从生理盐水中取出，将耳样皮肤剪成1.5cm*4cm状长条，在生理盐水中清洗，刮去表面脏物，随后放到碘伏溶液中清洗2min；再放到生理盐水中清洗，然后放到75％酒精溶液中进行清洗2min；再一次将耳样放到生理盐水中清洗，然后放到PBS中进行清洗2min，最后放到生理盐水中清洗干净；
S2、将S1处理好的耳样边缘部分剪掉弃之，先去掉表皮长毛的部分，再去掉表皮层和软骨，将剩余组织剪成米粒大小的组织颗粒；
S3、将S2获得的组织颗粒置于离心管中，加入Ⅰ型胶原酶，使其浸没上述组织颗粒，37℃消化4-5h，每间隔10-15min吹打，并摇晃样品；
S4、消化4-5小时后，加入胎牛血清培养基培养基终止消化，1200r/min离心5min，弃掉上层液体；
S5、在S4步骤获得的离心管中加入0.25％胰酶进行消化10-20min，加入胎牛血清培养基终止消化；
S6、将上述混合物转移到培养皿中，并放到显微镜下观察，挑选完整的毛乳头，放...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁向东，秦晋，邹全，蒋尧，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11