【技术实现步骤摘要】
一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法
本专利技术属于细胞工程
，具体来说是一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法。
技术介绍
糖尿病(DiabetesMellitus，DM)是一种以血糖增高为临床特征的代谢障碍性疾病，其主要发病机制为胰岛素的分泌减少及其利用障碍。目前，糖尿病已成为继肿瘤、心脑血管后的第三大威胁人类健康和影响人们生活质量的疾病。世界卫生组织(WHO)在2016年的最新报告显示，全球已有4.22亿人患有糖尿病，而中国糖尿病患者数量超过1亿人，居全球之首。糖尿病有两种类型：一型糖尿病(T1D)，占疾病数量的5～10％，是一种胰岛β细胞被选择性破坏而导致的自身免疫疾病；二型糖尿病(T2D)，占疾病数量的90％以上，是由于外周器官包括肝脏、脂肪和肌肉对胰岛素抵抗而产生的疾病。糖尿病人表现为体内胰岛素产生细胞--胰岛β细胞的缺失或胰岛素的利用降低，目前治疗手段皆为外源注射胰岛素以控制体内血糖平衡。虽然这种方法可以有效地控制疾病发展，但长期注射胰岛素不能稳定的维持体内血糖生理平衡而...
【技术保护点】
1.一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于，具体包括如下步骤：/nS100、制备诱导多功能细胞球；/nS200、一次分化，使用培养液A对诱导多功能细胞球进行定向分化培养获得定型内胚层细胞；/nS300、二次分化，使用培养液B对定型内胚层细胞诱导分化获得胰腺前体细胞；/nS400、三次分化，使用培养液C对胰腺前体细胞进行诱导分化获得胰腺内分泌祖细胞；/nS500、四次分化，使用培养液D对胰腺内分泌祖细胞进行诱导分化获得所需胰岛β细胞。/n
【技术特征摘要】
1.一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
S100、制备诱导多功能细胞球；
S200、一次分化，使用培养液A对诱导多功能细胞球进行定向分化培养获得定型内胚层细胞；
S300、二次分化，使用培养液B对定型内胚层细胞诱导分化获得胰腺前体细胞；
S400、三次分化，使用培养液C对胰腺前体细胞进行诱导分化获得胰腺内分泌祖细胞；
S500、四次分化，使用培养液D对胰腺内分泌祖细胞进行诱导分化获得所需胰岛β细胞。
2.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S100中制备诱导多功能细胞球具体为将贴壁培养的诱导多功能干细胞消化成细胞小块后，使用含ROCK1抑制剂的mTeSR-1完全培养基重悬，以0.2×106/cm2的密度接种于超低吸附六孔板，在温度为37℃、5％氧气条件下培养24h至细胞成为规则的小球，然后进行3D悬浮培养2-3天，得到所述诱导多功能细胞球。
3.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S200具体为将诱导多功能细胞球使用培养液A进行培养，于37℃、5％CO2条件下继续培养3天获得定型内胚层细胞，培养期间每隔1天更换一次培养液A，所述定型内胚层细胞诱导培养基主要成分为培养液A。
4.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S300具体为将定型内胚层细胞使用培养液B进行培养，于37℃、5％CO2条件下继续培养5天获得胰腺前体细胞，培养期间每隔1天更换一次培养液B，所述胰腺前体细胞诱导培养基的主要成分为培养液B。
5.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S400具体为将胰腺前体细胞使用培养液C进行培养，于37℃、5％CO2条件下继续培养7天获得胰腺内分泌祖细胞，培养期间每隔1天更换一次培养液C，所述胰腺内分泌祖细胞诱导培养基的主要成分为培养液C。
6.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞定向分化制备胰岛β细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S500具体为将胰腺内分泌祖细胞使用培养液D进行培养，于37℃、5％C...
【专利技术属性】
技术研发人员：高歌，周安宇，
申请(专利权)人：上海爱萨尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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