一种新型肝成纤维细胞株的建立方法技术

本发明专利技术涉及结肠癌肝转移发生机制研究的技术领域，特别是涉及一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，本发明专利技术提供了来源于同一结肠癌肝转移患者的肝肿瘤相关成纤维细胞和肝正常成纤维细胞，用于结肠癌肝转移的发生发展机制的研究，既能够相互配对，又能排除因个体差异引起的组织异质性；包括以下步骤：S1、无菌培养基准备；S2、分离组织；S3、组织清洗；S4、组织处理；S5、组织培养；S6、鉴定细胞株；S7、细胞株命名，本方法客观性强、直观性强、快速、准确，能够为结肠癌患者肝转移的发生、进展的基础研究提供新型的细胞模型。

【技术实现步骤摘要】
一种新型肝成纤维细胞株的建立方法
本专利技术涉及结肠癌肝转移发生机制研究的
，具体涉及一种新型肝成纤维细胞株的建立方法。
技术介绍
遗传和细胞生物学研究表明，肿瘤生长不仅仅是由肿瘤细胞决定的，也由肿瘤基质决定。肿瘤相关成纤维细胞，是多种肿瘤基质成分中最主要的细胞类型，也是肿瘤生长和进展的重要促进因子[1.MuellerMM,FusenigNE.Friendsorfoes-bipolareffectsofthetumourstromaincancer.NaturereviewsCancer,2004,4,(11):839-849.；2.TlstyTD,HeinPW.Knowthyneighbor:stromalcellscancontributeoncogenicsignals.Currentopinioningenetics&development,2001,11,(1):54-59.]。例如，在小鼠体内建立来自人乳腺癌细胞的移植瘤模型依赖于人肿瘤源性成纤维细胞的存在[3.KuperwasserC,Chavarria,WuM,Ma本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、无菌培养基准备：准备两管DMEM/F12无菌培养基，密封冰上预冷后备用；/nS2、分离组织：选择结肠癌肝转移患者的肝转移瘤组织和距离肿瘤边缘＞5.0cm的肝正常组织，分别放入事先准备好的两管DMEM/F12培养基中，在组织离体20分钟内由实验室人员带回实验室；/nS3、组织清洗：在超净台中，用1xPBS清洗立体组织3次，清除其中的坏死组织及其他杂质；/nS4、组织处理：将组织剪碎成1.0～2.0mm

【技术特征摘要】
1.一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、无菌培养基准备：准备两管DMEM/F12无菌培养基，密封冰上预冷后备用；
S2、分离组织：选择结肠癌肝转移患者的肝转移瘤组织和距离肿瘤边缘＞5.0cm的肝正常组织，分别放入事先准备好的两管DMEM/F12培养基中，在组织离体20分钟内由实验室人员带回实验室；
S3、组织清洗：在超净台中，用1xPBS清洗立体组织3次，清除其中的坏死组织及其他杂质；
S4、组织处理：将组织剪碎成1.0～2.0mm3大小的碎块，离心5分钟,弃去上清液，取得组织碎块，并用DMEM/F12培养基重悬组织碎块；
S5、组织培养：将重悬的组织碎块均匀铺在细胞培养瓶中，并放入37℃培养箱培养1小时后，倒置培养瓶，继续培养24小时；再用DMEM/F12无菌培养基进行正置培养，每3～4天换液一次，长至80％时进行细胞传代；
S6、鉴定细胞株：选用第三代指数生长期的细胞，进行细胞免疫荧光实验和流式细胞术鉴定细胞株；
S7、细胞株命名：细胞鉴定完毕后，将来源于肝转移瘤组织建立的细胞株和肿瘤周围组织建立的细胞株分别命名。


2.如权利要求1所述的一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，其特征在于，所述S1中的DMEM/F12无菌培养基中含有10％的胎牛血清和1％的青链霉素，即在DMEM/F12无菌培养基中加入10％的胎牛血清、100u/ml青霉素钠和100u/ml硫酸链霉素。


3.如权利要求1所述的一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，其特征在于，所述S3中所使用的1xPBS中含有1％的青-链霉素溶液。


4.如权利要求1所述的一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，其特征在于，所述S4中的DMEM/F12培养基中含有20％的胎牛血清和1％的青链霉素，即在DMEM/F12培养基中加入20％的胎牛血清、100u/ml青霉素钠和100u/ml硫酸链霉素。


5.如权利要求1所述的一种新型肝成纤维细胞株的建立方法，其特征在于，所述S5中的DMEM/F12无菌培养基中含有10％的胎牛血清、1％的青链霉素和10ng/ml的表皮生长因子，即在DMEM/F12无菌培...

【专利技术属性】
技术研发人员：李景武，刘艳坤，李玉凤，郑璇，马龙斌，
申请(专利权)人：刘艳坤，
类型：发明
国别省市：河北;13