将外周血单个核细胞重编程为诱导多能干细胞的系统和方法技术方案

本发明专利技术公开了一种由外周血单核细胞（PBMC）重编程为人诱导性多能干细胞的重编程系统及培养方法。所述重编程系统包含重编程诱导培养液和一个或多个载体，所述一个或多个载体能够表达人转录因子OCT4、p53基因表达抑制剂和Cohesin基因表达抑制剂；其中所述重编程诱导培养液包含IX

【技术实现步骤摘要】
将外周血单个核细胞重编程为诱导多能干细胞的系统和方法


[0001]本专利技术属于诱导性多能干细胞培养
，具体涉及将外周血单个核细胞重编程为诱导多能干细胞的系统和方法。

技术介绍

[0002]胚胎干细胞是一种多能干细胞，有潜力分化成各种组织器官的多种类型细胞，能够应用于临床上器官组织移植和细胞治疗，也可以用来为研究疾病提供细胞模型。但因为其来源于胚胎发育早期囊胚的内细胞团，建系时不可避免要对卵细胞进行操作，所以涉及到很多伦理问题，一直以来饱受争议。
[0003]2006年日本京都大学的Yamanaka实验室利用Oct3/4、Sox2、Klf4、c
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Myc 4 四种转录因子将鼠成纤维细胞重编程为诱导多功能干细胞，标志着一种新型类胚胎干细胞的问世。诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)几乎可以从所有的成体组织细胞制备获得，使得制备病人自体的多能干细胞成为可能，且可有效避免胚胎干细胞临床应用的局限性。因此，iPS细胞在新药筛选，体外疾病模型的建立，细胞替代性治疗以及再生医本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于将外周血单个核细胞（PBMC）重编程为人诱导性多能干细胞的重编程系统，其特征在于，所述重编程系统包含重编程诱导培养液和一个或多个载体，所述一个或多个载体能够表达人转录因子OCT4、p53基因表达抑制剂和Cohesin基因表达抑制剂；其中所述重编程诱导培养液包含IX
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PSC基础培养基以及GSK
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3抑制剂、去乙酰化酶抑制剂、MEK抑制剂、ROCK抑制剂和4
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羟乙基哌嗪乙磺酸；其中IX
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PSC基础培养基是以DMEM/F12为基础培养基，添加抗坏血酸、FGF2、TGFβ1、神经调节蛋白1、IGF
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1、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、人血清白蛋白、转铁蛋白和亚硒酸钠。2.如权利要求1所述的重编程系统，其中所述p53基因表达抑制剂和/或Cohesin基因表达抑制剂是抑制性RNA分子。3.如权利要求2所述的重编程系统，其中所述抑制性RNA分子是反义RNA、miRNA、siRNA或shRNA。4.如权利要求3所述的重编程系统，其中所述抑制性RNA分子是shRNA。5.如权利要求1
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4任一项所述的重编程系统，其中所述一个或多个载体是非基因组整合的载体。6.如权利要求5所述的重编程系统，其中所述一个或多个载体是质粒。7.如权利要求1
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4任一项所述的重编程系统，其中所述GSK
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3抑制剂为CHIR99021，所述去乙酰化酶抑制剂为VPA，所述MEK抑制剂为 PD0325901和/或所述ROCK抑制剂为Thiazovivin。8.如权利要求1
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4任一项所述的重编程系统，其中在所述重编程诱导培养液中，所述人血清白蛋白浓度为1
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10mg/mL，所述GSK
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3抑制剂浓度为0.5
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3μM，所述去乙酰化酶抑制剂浓度为0.3
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3μM，所述MEK抑制剂浓度为10
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100nM，所述ROCK抑制剂浓度为0.5
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5μM，和/或所述4
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羟乙基哌嗪乙磺酸浓度为1
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10mM。9.如权利要求8所述的重编程系统，其中在所述重编程诱导培养液中，所述人血清白蛋白浓度为5mg/mL，所述GSK
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3抑制剂浓度为2μM，所述去乙酰化酶抑制剂浓度为2μM，所述MEK抑制剂浓度为50nM，所述ROCK抑制剂浓度为2.5μM，和/或所述4
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羟乙基哌嗪乙磺酸浓度为5mM 。10.一种将外周血单个核细胞（PBMC）重编程为诱导性多能干细胞的方法，所述方法包括：i）用一个或多个载体转染外周血单个核细胞，所述一个或多个载体能够表达人转录因子OCT4、p53基因表达抑制剂和Cohesin基因表达抑制剂，获得表达人转录因子OCT4、p53基因表达抑制剂和Cohesin基因表达抑制剂的外周血单个核细胞；ii）在重编程诱导培养液中培养所述外周血单个核细胞，获得诱导性多能干细胞；其中所述重编程诱导培养液包含IX
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PSC基础培养基、GSK
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3抑制剂、去乙酰化酶抑制剂、MEK抑制剂、ROCK抑制剂以及4
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羟乙基哌嗪乙磺酸；其中IX
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PSC基础培养基是以DMEM/F12为基础培养基，添加抗坏血酸、FGF2、TGFβ1、神经调节蛋白1、IGF
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1、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、人血清白蛋白、转铁蛋白和亚硒酸钠。11.如权利要求10所述的方法，其中所述p53基因表达抑制剂和/或Cohesin基因表达抑制剂是抑制性RNA分子。12.如权利要求11所述的方法，其中所述抑制性RNA分子是反义RNA、miRNA、siRNA或
shRNA。13.如权利要求12所述的方法，其中所述抑制性RNA分子是shRNA。14.如权利要求10
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13任一项所述的方法，其中所述一个或多个载体是非基因组整合的载体。15.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：高歌，周安宇，
申请(专利权)人：上海爱萨尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：