【技术实现步骤摘要】
一种表达CD38靶向抑制因子的多能干细胞及其衍生物与应用
[0001]本专利技术属于基因工程
,具体涉及一种表达CD38靶向抑制因子的多能干细胞及其衍生物与应用。
技术介绍
[0002]CD38是45kD的II型跨膜糖蛋白,也是一种双功能胞外酶。CD38分子在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞表面呈现一致性的高表达,而在其他淋巴细胞或者髓系细胞上则呈现低表达,而且,CD38分子也可以同时在部分非血液细胞上表达。CD38还具有细胞粘附作用,因此,通过靶向CD38来治疗MM,并以此为基础开发单抗、抗体偶联药物、双特异性抗体、CAR
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T等疗法都具有重要意义。现有研究显示,通过靶向CD38分子可以有效杀伤骨髓瘤细胞,而靶向CD38的抗体Daratumumab已被FDA批准用于多发骨髓瘤的治疗,但现有的治疗方法都不可避免的会导致白细胞减少从而产生比较严重的不良反应,因此,靶向CD38的抗体实际应用受到了极大的限制了。
[0003]外泌体是指直径在40
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100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。目前已经尝试用外泌体携带siRNA、化学小分子药物等进行基因治疗和肿瘤治疗等研究。
[0004]另一方面,在细胞治疗领域,同种异体的免 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物的基因组中导入有CD38抑制因子的表达序列;所述CD38抑制因子为靶向CD38的shRNA和shRNA
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miR中的至少一种。2.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述靶向CD38的shRNA和shRNA
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miR的序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物基因组的B2M基因和/或CIITA基因被敲除。4.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于:所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入有第一核酸分子;且,所述多能干细胞或其衍生物中的免疫应答相关基因的3
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UTR区域还导入有第二核酸分子;所述第一核酸分子编码介导RNA干扰的小核酸分子,所述小核酸分子特异性靶向第二核酸分子的转录产物,且所述小核酸分子不靶向所述多能干细胞或其衍生物的任何其他的mRNA或lncRNA。5.根据权利要求4所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述小核酸分子包括短干扰核酸、短干扰RNA、双链RNA,优选为miRNA、shRNA、shRNA
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miR中的至少一种。6.根据权利5所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物来源于人类;所述小核酸分子的序列为来源于不靶向人类任何mRNA或lncRNA的非人类物种的随机序列。7.根据权利要求4所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述第二核酸分子包括至少3个重复的小核酸分子序列的反向互补序列,优选为6~10个重复的小核酸分子序列的反向互补序列。8.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入至少一种免疫兼容分子的表达序列,所述免疫兼容分子用于调控多能干细胞细胞或其衍生物中与免疫应答相关的基因的表达。9.根据权利要求4或8所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述与免疫应答相关的基因包括:(1)主要组织相容性复合体基因,包括HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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DRA、HLA
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DRB1、HLA
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DRB3、HLA
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DRB4、HLA
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DRB5、HLA
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DQA1、HLA
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DQB1、HLA
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DPA1和HLA
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DPB1中的至少一种;(2)主要组织相容性复合体相关基因,包括B2M和CIITA中的至少一种。10.根据权利要求8所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述免疫兼容分子包括以下的至少一种:(1)免疫耐受相关基因,包括CD47和HLA
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G中的至少一种;(2)HLA
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C类分子,包括人群中比例合计超过90%的HLA
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C复等位基因,或者超过90%的HLA
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C复等位基因与B2M构成的融合蛋白基因;(3)靶向主要组织相容性复合体基因的shRNA和/或shRNA
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miR,所述主要组织相容性复合体基因包括HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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DRA、HLA
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DRB1、HLA
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DRB3、HLA
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DRB4、HLA
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DRB5、HLA
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DQA1、HLA
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DQB1、HLA
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DPA1和HLA
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DPB1中的至少一种;(4)靶向主要组织相容性复合体相关基因的shRNA和/或shRNA
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miR,所述主要组织相容
性复合体相关基因包括B2M和CIITA中的至少一种。11.根据权利要求10所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于:靶向B2M的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.9~SEQ ID NO.11中的一种;靶向CIITA的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.12~SEQ ID NO.14中的一种;靶向HLA
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A的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.15~SEQ ID NO.17中的一种;靶向HLA
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B的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.18~SEQ ID NO.20中的一种;靶向HLA
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C的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.21~SEQ ID NO.23中的一种;靶向HLA
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DRA的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.24~SEQ ID NO.26中的一种;靶向HLA
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DRB1的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.27~SEQ ID NO.29中的一种;靶向HLA
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DRB3的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.30~SEQ ID NO.31中的一种;靶向HLA
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DRB4的shRNA和/...
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