工程化的调节性T细胞制造技术

本发明专利技术涉及工程化的调节性T细胞(Treg)，其包含能够在髓鞘碱性蛋白(MBP)肽由主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递时，与该肽或其变体或片段特异性结合的T细胞受体(TCR)。本发明专利技术还涉及提供工程化的Treg的方法并涉及所述工程化Treg和编码所述Treg的载体和载体套件的方法和用途。方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化的调节性T细胞
专利

[0001]本专利技术涉及工程化的调节性T细胞(Treg)。特别地，本专利技术涉及包含T细胞受体(TCR)的Treg，所述T细胞受体能够与髓鞘碱性蛋白(MBP)特异性结合。本专利技术还涉及提供工程化Treg的方法并涉及所述工程化Treg的方法和用途。

技术介绍

[0002]许多自身免疫性和炎性中枢神经系统(CNS)疾病涉及自身反应性T细胞。例如，多发性硬化(MS)，其是中枢神经系统的自身免疫性炎性脱髓鞘性疾病并且是青年当中最常见的神经系统疾病。
[0003]自身免疫性和炎性CNS疾病的现有治疗通常抑制免疫系统。例如，一种治疗包括移植骨髓连同施用细胞抑制剂和免疫抑制药物。自体造血干细胞移植可能对一些患者具有持久有益效果，但该程序需要与巨大毒性和风险相关的激进清髓预处理(myelo
‑
ablative conditioning)。
[0004]尽管已经批准了几种降低临床复发频率的病情改善疗法(DMT)，但按照现行治疗方案，大部分患者继续在临床上加重。DMT或干细胞移植均不能介导对于自身免疫性疾病和炎性CNS疾病的免疫病理的CNS特异性抑制。
[0005]目前，不存在有效的自身免疫性疾病和炎性CNS疾病疗法。治疗仅致力于减少其症状，通常借助于免疫系统的总体抑制。需要特异性靶向与CNS疾病的发作和进展相关的局部免疫应答的疗法。
[0006]专利技术概述
[0007]本专利技术至少部分地基于专利技术人确定：T细胞受体基因转移技术可以用来产生抗原特异性Tregs。已经显示，人抗原特异性Tregs可以抑制活化的T细胞。
[0008]特别地，专利技术人已经生产例如MBP特异性Tregs，通过将MBP
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TCR基因经逆转录病毒转入纯化的Tregs和通过将MBP
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TCR和叉头框P3(FOXP3)基因经逆转录病毒转入常规的CD4
+
T细胞来产生。不希望受理论约束，具有MBP特异性TCR的这些工程化的Tregs可以用于抑制例如自身免疫性疾病的疾病，其中，在中枢神经系统(CNS)内MBP特异性Tregs的局部活化可以抑制如MS和其他CNS炎性病症中所见的CNS病理。
[0009]此外，大量的TCR不能作为外源性TCR成功表达。无法预测哪些TCR可以作为外源TCR有效表达，特别是在Treg中。
[0010]本专利技术具体涉及一种工程化的调节性T细胞(Treg)，其包含的T细胞受体具有有利特性，例如在效应细胞因子的表达方面。
[0011]因此，本专利技术提供工程化的调节性T细胞(Treg)，其包含T细胞受体，其中TCR包含α链和β链，
[0012]其中α链和β链各自包含三个互补决定区(CDR)并且每个CDR3的序列如下：
[0013]CDR3α
‑
ATDTTSGTYKYI(SEQ ID NO:1)
[0014]CDR3β
‑
SARDLTSGANNEQF(SEQ ID NO:2)
[0015]或这些序列的具有多达三个氨基酸变化的变体。
[0016]当多肽由主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递时，TCR可以与多肽特异性结合，该多肽与MBP 82
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102(SEQ ID NO:12)或其片段有至少90％的一致性。
[0017]MBP82
‑
102多肽与HLA
‑
DR15(DRB1*1501)结合。
[0018]TCR的α链可以包含三个具有以下氨基酸序列的CDR：
[0019]CDR1α
‑
TSINN(SEQ ID NO:3)
[0020]CDR2α
‑
IRSNERE(SEQ ID NO:4)
[0021]CDR3α
‑
ATDTTSGTYKYI(SEQ ID NO:1)
[0022]或这些序列的具有多达三个氨基酸变化的变体；
[0023]并且TCR的β链可以包含三个具有以下氨基酸序列的CDR：
[0024]CDR1β
‑
DFQATT(SEQ ID NO:5)
[0025]CDR2β
‑
SNEGSKA(SEQ ID NO:6)
[0026]CDR3β
‑
SARDLTSGANNEQF(SEQ ID NO:2)
[0027]或这些序列的具有多达三个氨基酸变化的变体。
[0028]TCR的α链的可变区可以包含与SEQ ID NO:7具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中序列同一性不包含CDR序列；并且
[0029]TCR的β链的可变区可以包含与SEQ ID NO:8具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中序列同一性不包含CDR序列。
[0030]TCR的α链的可变区可以包含与SEQ ID NO:7具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且
[0031]TCR的β链的可变区可以包含与SEQ ID NO:8具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
[0032]TCR的α链和β链的恒定区结构域可以各自包含额外的半胱氨酸残基，从而使得在α链和β链之间形成额外二硫键成为可能。适当地，额外的二硫键减少与内源TCR链的错误配对。
[0033]TCR的α链可以包含与SEQ ID NO:9具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且
[0034]TCR的β链可以包含与SEQ ID NO:10具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
[0035]在一个方面，Treg衍生自从受试者分离的T细胞。
[0036]在另一个方面，本专利技术提供包含根据本专利技术的工程化Treg的药物组合物。
[0037]在一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物用于治疗疾病。
[0038]在另一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物在制备药物中的用途。
[0039]在一个方面，提供了一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病的方法，所述方法包括步骤：向受试者施用本专利技术的工程化Treg或药物组合物。
[0040]在另一个方面，提供了根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物用法、或用途或方法，其中疾病是多发性硬化。
[0041]在另一个方面，提供根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物用法、或用途或方法，其中受试者为DRB1*1501阳性受试者。
[0042]在另一个方面，提供一种载体，其包含了编码如本文定义的TCR的核酸序列和编码
FOXP3的核酸序列。
[0043]在一个方面，提供一种多核苷酸套件或载体套件，所述套件包含第一多核苷酸或载体和第二多核苷酸或载体，所述第一多核苷酸或载体包含了编码如本文定义的TCR的核酸序列，所述第二多核苷酸或载体包含了编码FOXP3的核酸序列。适当地，第一和第二多核苷酸或载体是分离的。
[004本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.工程化的Treg，其包含T细胞受体(TCR)，其中TCR包含α链和aβ链，其中α链和β链各自包含三个互补决定区(CDR)并且各自的CDR3的序列如下：CDR3α
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ATDTTSGTYKYI(SEQ ID NO:1)CDR3β
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SARDLTSGANNEQF(SEQ ID NO:2)或这些序列的具有多达三个氨基酸变化的变体。2.根据权利要求1所述的工程化Treg，其中TCR的α链包含三个具有以下氨基酸序列的CDR：CDR1α
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TSINN(SEQ ID NO:3)CDR2α
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IRSNERE(SEQ ID NO:4)CDR3α
‑
ATDTTSGTYKYI(SEQ ID NO:1)或这些序列的具有多达三个氨基酸变化的变体；并且其中TCR的β链包含三个具有以下氨基酸序列的CDR：CDR1β
‑
DFQATT(SEQ ID NO:5)CDR2β
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SNEGSKA(SEQ ID NO:6)CDR3β
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SARDLTSGANNEQF(SEQ ID NO:2)或这些序列的具有多达三个氨基酸变化的变体。3.根据权利要求2所述的工程化Treg，其中：a)TCR的α链的可变区包含与SEQ ID NO:7具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中序列同一性不包含如权利要求4中限定的CDR序列；并且(b)TCR的β链的可变区包含与SEQ ID NO:8具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中序列同一性不包含如权利要求4中限定的CDR序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化Treg，其中：(a)TCR的α链的可变区包含与SEQ ID NO:7具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且(b)TCR的β链的可变区包含与SEQ ID NO:8具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。5.根据任一前述权利要求所述的工程化Treg，其中TCR的α链和β链的恒定区结构域各自包含额外的半胱氨酸残基，从而使得在α链和β链之间形成额外二硫键成为可能。6.根据任一前述权利要求所述的工程化Treg，...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：UCL商业有限公司，
类型：发明
国别省市：