【技术实现步骤摘要】
用于构建人单细胞TCR测序文库的试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及一种试剂盒,具体涉及一种人源单细胞TCR(T细胞受体)测序文库的构建方法、用于构建人源单细胞TCR测序文库的试剂盒及人源TCR测序方法,属于分子生物学领域。
技术介绍
[0002]免疫组库(immune repertoire,IR)是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性T细胞和T细胞的总和。传统的免疫组库研究技术往往只能检测TCR(T细胞受体)和TCR一条链的序列信息,而单细胞免疫组库测序可以同时获取TCRα链和β链、TCR的重链和轻链以及一个细胞内的组合信息。
[0003]单细胞免疫组库测序技术是一种在单个细胞水平同时对适应性免疫受体库进行高通量测序的新技术,为免疫组学研究提供更具扩展性的平台。
[0004]传统的一些单细胞测序技术各有不足,例如,基于流式细胞仪的测序方法样本需求量大,需要精准控制,对细胞有损伤,对于后续建库要求高;基于C1系统(Fluidigm公司)的测序技术使用微阀分离单细胞,通量较低,最多只能做938个细胞,且成本高;基于Microwell(微孔板)方式的测序技术细胞捕获率低,污染高;基于现有的其他微流控平台的测序技术操作繁琐,时间长。
[0005]目前,单细胞免疫组库测序一般是基于10X Genomics平台进行的,其一次性能够分离500~10000个单细胞,并可以同时获取5
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基因表达的数据和TCR/TCR的V(D)J全长序列。然而,10X Genomics平 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于构建人单细胞TCR测序文库的试剂盒,其特征在于包括:微流控芯片,至少用于捕获人源T细胞单细胞并进行包装,从而生成油包水反应液滴,所述油包水反应液滴包括油相和被油相包裹的细胞液相,并且所述油包水反应液滴中包含有RNA反转录组件和细胞裂解试剂;用于形成所述油相的油、细胞裂解试剂;细胞标签,包括可变形微珠和连接在可变形微珠上的分子标签,所述分子标签用于标识细胞;RNA反转录组件,包含SEQ ID NO:5所示反转录引物、RNA反转录酶、RNA反转录酶抑制剂和RNA反转录缓冲液;cDNA预扩增组件,包含SEQ ID NO:6所示cDNA预扩增引物、DNA聚合酶和扩增缓冲液;第一扩增组件,包含SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:2所示引物、DNA聚合酶和扩增缓冲液;第二扩增组件,包含SEQ ID NO:3~SEQ ID NO:4所示引物、DNA聚合酶和扩增缓冲液;转座片段化组件,包含转座酶、转座酶反应缓冲液和转座反应终止液;第三扩增组件,包含两个测序接头、DNA聚合酶和扩增缓冲液。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述微流控芯片包括细胞微流道、细胞隔离介质微流道、细胞标签微流道和单细胞样本收集口,所述细胞微流道具有细胞悬液入口和单细胞悬液出口,所述细胞隔离介质微流道具有细胞标签悬液入口和细胞标签悬液出口,并且所述单细胞悬液出口与细胞标签悬液出口交会,使所述细胞微流道输出的单细胞悬液能够与所述细胞标签微流道输出的细胞标签悬液混合形成细胞载液,所述细胞载液的流动路径与所述细胞隔离介质微流道交叉,从而使在所述细胞隔离介质微流道内流动的细胞隔离介质能够剪切并包裹细胞载液,从而形成包含单细胞的油包水反应液滴,所述包含单细胞的油包水反应液滴由单细胞样本收集口输出。3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述细胞微流道的尾部区域设置为单细胞通道,所述单细胞通道的宽度等于或稍大于单细胞直径,所述单细胞通道的出口与细胞标签微流道的出口交会,使得从所述细胞微流道输出的单细胞悬液与从所述凝胶微珠分子标签微流道输出的凝胶微珠分子标签悬液混合形成细胞载液,所述细胞载液的连续流动路径与所述细胞隔离介质微流道交叉,使得流经所述细胞隔离介质微流道的细胞隔离介质能够将连续的细胞载液剪切为离散液滴状的细胞液相并使每一细胞液相包含单细胞和单个细胞标签,同时使所述细胞隔离介质作为油相对所述细胞液相进行包裹,从而形成所述油包水反应液滴。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于:所述微流控芯片还包括分别与所述细胞微流道、细胞隔离介质微流道、细胞标签微流道连通的细胞悬液加样杯、细胞隔离介质加样杯、细胞标签加样杯。5.根据权利要求3或4所述的试剂盒,其特征在于:所述单细胞样本收集口处设置有负压动力生成装置,所述负压动力生成装置用于在微流控芯片内产生负压,从而驱使各微流道中的流体流动。6.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述油相包含油和细胞裂解试剂,所述细胞液相包含RNA反转录组件;...
【专利技术属性】
技术研发人员:张惠丹,赵洪玉,
申请(专利权)人:苏州绘真生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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