一种靶标基因富集建库方法技术

一种靶标基因富集建库方法，包括：磷酸化步骤，包括在模板分子的5

【技术实现步骤摘要】
一种靶标基因富集建库方法


[0001]本专利技术涉及基因测序
，具体涉及一种靶标基因富集建库方法。

技术介绍

[0002]高通量测序靶标基因测序文库的制备流程一般分为两套流程，主流的捕获建库方法需要经历文库构建(包括新型建库方法单链建库)、捕获前扩增、杂交捕获、捕获后扩增四个必需步骤，全流程一般长达2到3天。另一种常见方法称为扩增子建库，一般先做多重PCR，后对PCR产物建库，有的商业化试剂盒会在做多重PCR时，在引物的5
′
端外侧加上对应NGS平台的接头序列，以将上述两步整合为一步(即一步法多重PCR试剂盒)。
[0003]第一种主流技术路线必须将文库构建和杂交捕获严格分开，步骤繁多周期长，各模块之间衔接有一定技术难度，且杂交捕获所需试剂和捕获专用探针合成严重依赖进口。第二种技术路线虽然流程较前者更简洁，但因其基于多重PCR，有如下诸多问题：1、因其基于PCR扩增，使文库中存在大量扩增所得同样的拷贝分子，导致测序所得结果的冗余率高，浪费测序数据量，且使有效数据率降低，导致超低频的基因突变难以检出或无法准确检出；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶标基因富集建库方法，其特征在于，包括：磷酸化步骤，包括在模板分子的5
’
端修饰磷酸基团；延伸步骤，包括加入含与靶标基因互补配对序列的第一引物，所述第一引物的5
’
端修饰有标记分子，在模板分子的靶标区域退火并延伸，获得双链靶核苷酸分子，所述双链靶核苷酸含有由5
’
端修饰有标记分子的第一引物延伸得到的延伸链；第一测序接头连接步骤，包括将第一测序接头连接至前一步骤延伸处理后的双链靶核苷酸分子；解链步骤，包括将前一步骤所得产物解链处理，去除5
’
端修饰有标记分子的第一引物延伸链，得到连接有第一测序接头的原始模板分子，即为单链靶核苷酸分子；第二测序接头连接步骤，包括加入发夹式第二测序接头，使单链靶核苷酸分子连接所述发夹式第二测序接头；扩增步骤，包括加入含与第一测序接头反向链互补配对序列的第二引物、含与第二测序接头反向链互补配对序列的第三引物，PCR反应，得到完整文库。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，磷酸化步骤中，所述模板分子为单链核苷酸分子和/或由双链核苷酸分子解链处理得到的单链核苷酸分子；和/或，所述模板分子为亚硫酸氢盐转化处理后的DNA分子；和/或，所述模板分子为单链DNA分子或由RNA转录得到的单链DNA分子。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，磷酸化步骤中，使用的酶选自T4多聚核苷酸激酶。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，延伸步骤中，所述第一引物的5
’
端修饰的标记分子选自生物素；和/或，延伸步骤中，在DNA聚合酶作用下，第一引物在模板分子的靶标区域退火并延伸。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第一测序接头连接步骤中，所述第一测序接头选自于Illumina测序平台的P7端测序接头、MGI测序平台的P1端测序接头中的任意一种。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一测序接头为双链测序接头，所述第一测序接头串联有可串联至模板分子的分子标签；和/或，所述分子标签为随机核苷酸序列；和/或，所述分子标签的长度为4
‑
19bp；和/或，所述第一测序...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔品，
申请(专利权)人：深圳市睿法生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：