FFPE样本建库的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种FFPE建库的方法及其应用。该方法包括：通过利用内切酶进行酶切片段化，对片段化DNA依次进行末端修复加A及接头连接，对连上接头的DNA片段进行PCR扩增，得到测序文库，其中内切酶具有如下功能：a)在DNA缺口处切割；b)保留双链末端突出碱基部分。由于FFPE在固定的过程中和固定之前都有带来降级和部分碱基的脱落，该方法充分利用FFPE的本身的缺口问题，能够在缺口处断裂DNA片段的酶打断DNA后结合正常的补平加A、连接接头和PCR扩增的方式进行建库，解决了由于FFPE本身的损伤和打断损伤不兼容导致的建库效率低的问题，从而解决了降解比较严重的样本难以建库的问题。

【技术实现步骤摘要】
FFPE样本建库的方法及其应用
本专利技术涉及高通量测序文库构建领域，具体而言，涉及一种FFPE样本建库的方法及其应用。
技术介绍
福尔马林固定石蜡包埋(FormalinFixedandParaffinEmbedde，FFPE)是病理学、法医病理学等进行样本保存的最主要手段。对组织样本进行FFPE的保存，有助于研究人员更加全面地了解经多年保存后的病理标本中所包含的遗传机制和病理成因。目前，全球约有2-4亿FFPE组织样本，这些组织样本是疾病诊断和科学研究的最为宝贵的的生物学资源之一。基因组学检测技术的快速发展，尤其是主流的二代测序技术(NGS)的飞速发展，在细胞分子水平上提供了前所未有的检测能力。研究人员可以使用这一技术手段，重新开启FFPE样本宝藏的大门，寻找疾病与基因关系，进而去解开疾病的未解之谜。然而，FFPE样本十分珍贵且不可替代，在FFPE组织标本的制备和贮存过程中，组织经福尔马林固定、石蜡包埋后很容易引起DNA的交联和降解，研究人员很难获得足量的高质量的DNA样本，这对二代测序中的文库制备技术提出新的要求。在实际的F本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种FFPE样本建库的方法，其特征在于，所述方法包括：/n采用内切酶将FFPE样本DNA片段化，其中，所述内切酶具有如下功能：a)在DNA缺口处切割；b)保留双链末端突出碱基部分；/n对片段化DNA依次进行末端修复加A及接头连接；/n对连上接头的DNA片段进行PCR扩增，得到测序文库。/n

【技术特征摘要】
1.一种FFPE样本建库的方法，其特征在于，所述方法包括：
采用内切酶将FFPE样本DNA片段化，其中，所述内切酶具有如下功能：a)在DNA缺口处切割；b)保留双链末端突出碱基部分；
对片段化DNA依次进行末端修复加A及接头连接；
对连上接头的DNA片段进行PCR扩增，得到测序文库。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内切酶选自T7内切酶。

【专利技术属性】
技术研发人员：胡玉刚，汪彪，郑文莉，吴强，
申请(专利权)人：纳昂达南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32