一种拭子样本核酸释放剂制造技术

本发明专利技术公开了一种拭子样本核酸释放剂。其成分中添加了非离子表面活性剂异山梨醇二甲醚和渗透剂N‑正烷基苯并异噻酮唑酮。本发明专利技术的核酸释放剂既可快速释放核酸，无需进行核酸的提取纯化步骤，而且兼具样本保存功能。拭子样本采集后置于核酸释放剂中，室温静置2～30min即可直接用于PCR等分子生物学实验，且对后续核酸检测不产生影响，采集的样本可常温保存14天核酸不降解，另外最低检测限可达100copies/mL。产品安全可靠，操作简单、快速，适用于急诊、发热门诊、现场大量快速筛查等核酸检测场景。

【技术实现步骤摘要】
一种拭子样本核酸释放剂
本专利技术属于核酸检测
更具体地，涉及一种拭子样本核酸释放剂。
技术介绍
常规病原微生物的核酸检测需经过核酸提取步骤，这使得核酸检测过程耗时较长，不能满足快速检测需要。核酸释放剂可用于快速裂解各类常见样本，无需核酸的提取纯化步骤，样本裂解物可直接作为模板进行扩增反应，目前已在病原微生物检测领域普遍使用。但现有核酸释放剂存在操作不够简便，或不能同时满足样本保存的需要，以及核酸释放仍不够快速等问题。中国专利CN109402240A公开了一种核酸释放剂、核酸PCR扩增方法和PCR扩增试剂盒，该核酸释放剂可在室温下直接释放出RNA并满足后续检测，但不能同时满足保存样本的需要。中国专利CN111925941A公开了一种能够免提取的病毒核酸样本保存液，但其在检测前病毒需经56℃以上孵育30分钟灭活，仍不够简便。因此，尤其在当前新冠防疫背景下，持续开发和优化核酸释放剂对病原微生物的实际检测工作有重要意义。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是为克服上述现有核酸释放剂产品的不足，提供一种能快速释放拭子样本DNA或RNA的核酸释放剂，当样本采集后，立即将样本与核酸释放剂混合，室温静置2-30min，即可吸取样本进行核酸检测，且不影响后续PCR检测反应，操作简便，特别适合一些在急诊、发热门诊等情景的核酸检测。同时本专利技术所提供的核酸释放剂也可作为鼻咽拭子样本的保存液，可常温保存14天保护核酸不被降解。本专利技术的目的是提供一种拭子样本核酸释放剂。>本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：常规核酸提取试剂中的主要成分为细胞裂解剂，常用的细胞裂解剂如尿素、SDS等的残留会对后续PCR反应产生明显的抑制，不能满足核酸释放剂的使用要求，除上述试剂外，一些较为温和的表面活性剂也可满足细胞裂解的需要，因此本专利技术所述核酸释放剂中复配了多种表面活性剂。在尝试了多种配方后，最终确定了本专利技术所述核酸释放剂的主要成分：异山梨醇二甲醚和N-正烷基苯并异噻酮唑酮。试验结果显示，本专利技术所述核酸释放剂能达到快速释放核酸但不影响后续PCR反应的要求，同时也能满足样本保存的需要。优选地，所述核酸释放剂中异山梨醇二甲醚的浓度为0.05～2g/L。优选地，所述核酸释放剂中N-正烷基苯并异噻酮唑酮的浓度为0.05～2g/L。优选地，所述核酸释放剂的pH值为7～9。进一步优选地，所述核酸释放剂的pH值为7.5～8.5。优选地，所述核酸释放剂中还含有阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、酶保护剂、变性剂、酶稳定剂、Mg离子、pH调节剂。进一步优选地，所述阳离子表面活性剂可以是CTAB、十六烷基溴化吡啶或聚氧乙烯脂肪胺中的一种或几种；所述非离子表面活性剂可以是NP40、蔗糖脂肪酸酯、曲拉通、十二烷基醇聚氧乙烯醚硫酸钠或十二烷基硫酸铵中的一种或几种；所述酶保护剂可以是明胶、亚精胺或甜菜碱中的一种或几种；所述变性剂可以是chaps、叠氮钠或盐酸胍中的一种或几种；所述酶稳定剂可以是PVP、DMSO或PEG6000中的一种或几种；所述Mg离子可以是MgCl2、MgSO4、或C4H6O4Mg·4H2O等；所述pH调节剂可以是NaOH或Na2CO3等。优选地，所述核酸释放剂中各组分浓度为：所述阳离子表面活性剂0.05～2g/L、非离子表面活性剂0.05～6g/L、酶保护剂0.05～2g/L、变性剂0.05～2g/L、酶稳定剂0.05～4g/L、Mg离子0.1～3g/L。更优选地，所述核酸释放剂中各组分浓度为：所述阳离子表面活性剂0.05～0.5g/L、非离子表面活性剂0.05～1.5g/L、酶保护剂0.05～0.5g/L、变性剂0.05～0.5g/L、酶稳定剂0.05～1g/L、Mg离子0.1～0.5g/L。最优选地，所述核酸释放剂中各组分浓度为：所述阳离子表面活性剂0.1g/L、非离子表面活性剂0.3g/L、酶保护剂0.1g/L、变性剂0.1g/L、酶稳定剂0.2g/L、Mg离子0.2g/L。作为一种优选的实施方案，更优选地，本专利技术所述核酸释放剂由异山梨醇二甲醚、N-正烷基苯并异噻酮唑酮、CTAB、NP40、蔗糖脂肪酸酯、曲拉通、chaps、明胶、PVP、DMSO、MgCl2、NaOH和水组成。优选地，所述核酸释放剂中各组分的可选浓度范围：异山梨醇二甲醚为0.05～2g/L，N-正烷基苯并异噻酮唑酮为0.05～2g/L，CTAB为0.05～2g/L，NP40为0.05～2g/L，蔗糖脂肪酸酯为0.05～2g/L，曲拉通为0.05～2g/L，chaps为0.05～2g/L，明胶为0.05～2g/L，PVP为0.05～2g/L，DMSO为0.05～2g/L，MgCl2为0.1～3g/L，NaOH为0.05～2g/L。更优选地，所述核酸释放剂中各组分的优选浓度范围：异山梨醇二甲醚为0.05～0.5g/L，N-正烷基苯并异噻酮唑酮为0.05～0.5g/L，CTAB为0.05～0.5g/L，NP40为0.05～0.5g/L，蔗糖脂肪酸酯为0.05～0.5g/L，曲拉通为0.05～0.5g/L，chaps为0.05～0.5g/L，明胶为0.05～0.5g/L，PVP为0.05～0.5g/L，DMSO为0.05～0.5g/L，MgCl2为0.1～0.5g/L，NaOH为0.05～0.5g/L。最优选地，所述核酸释放剂中各组分的最佳浓度：异山梨醇二甲醚为0.1g/L，N-正烷基苯并异噻酮唑酮为0.1g/L，CTAB为0.1g/L，NP40为0.1g/L，蔗糖脂肪酸酯为0.1g/L，曲拉通为0.1g/L，chaps为0.1g/L，明胶为0.1g/L，PVP为0.1g/L，DMSO为0.1g/L，MgCl2为0.2g/L，NaOH为0.1g/L。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术所述核酸释放剂可以对保存的样本进行核酸的快速释放。当样本采集后，可立刻将样本与所述核酸释放剂混合，室温静置2～30min，即可吸取样本裂解物进行核酸检测，操作方便快捷，且不会对后续PCR反应造成影响，检测限可以达到100copies/mL。同时本专利技术所述核酸释放剂又可作为拭子样本的保存剂，可常温保存14天保护核酸不被降解。附图说明图1为本专利技术核酸释放剂检测新冠N基因的检测效果(单位：copies/mL)。图2为本专利技术核酸释放剂检测新冠ORF1ab基因的检测效果(单位：copies/mL)。图3为对比组检测新冠N基因的检测效果(单位：copies/mL)。图4为对比组检测新冠ORF1ab基因的检测效果(单位：copies/mL)具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。...

【技术保护点】
1.一种核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂内含有异山梨醇二甲醚和N-正烷基苯并异噻酮唑酮。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂内含有异山梨醇二甲醚和N-正烷基苯并异噻酮唑酮。


2.根据权利要求1所述核酸释放剂，其特征在于，异山梨醇二甲醚的浓度为0.05～2g/L。


3.根据权利要求1所述核酸释放剂，其特征在于，N-正烷基苯并异噻酮唑酮的浓度为0.05～2g/L。


4.根据权利要求1-3任一所述核酸释放剂，其特征在于，pH值为7～9。


5.根据权利要求1-3任一所述核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂内还含有阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、酶保护剂、变性剂、酶稳定剂、Mg离子、pH调节剂。


6.根据权利要求5所述核酸释放剂，其特征在于，所述阳离子表面活性剂是CTAB、十六烷基溴化吡啶或聚氧乙烯脂肪胺中的一种或几种，所述非离子表面活性剂是NP40、蔗糖脂肪酸酯、曲拉通、十二烷基醇聚氧乙烯醚硫酸钠或十二烷基硫酸铵中的一种或几种，所述酶保护剂是明胶、亚精胺或甜菜碱中的一种或几种，所述变性剂是chaps、叠氮钠或盐酸胍中的一种或几种，所述酶稳定剂是PVP、DMSO或PEG6000中的一种或几种，所述Mg离子是MgCl2、MgSO4、或C4H6O4Mg·4H2O，所述pH调节剂是NaOH或Na2CO3。


7.根据权利要求6所述核酸释放剂，其特征在于，所述阳离子表面活性剂浓度为0.05～2g/L、非离子表面活性剂浓度为0.05～6g/L、酶保护剂浓度为0.05～2g/L、变性剂浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱兴彪，葛毅媛，王博，谢龙旭，李菲，郭津津，
申请(专利权)人：广州凯普医药科技有限公司，潮州凯普生物化学有限公司，北京凯普医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44