一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒、磁珠及其制备方法技术

本申请公开了一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒、磁珠及其制备方法。本申请的磁珠法核酸提取试剂盒包括细胞裂解液、磁珠和洗涤液，其中，细胞裂解液中含有异硫氰酸胍、Triton X‑100、3‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨基]‑1‑丙磺酸和N‑月桂酰肌氨酸钠。本申请的磁珠法核酸提取试剂盒，通过对裂解缓冲液的组分进行优化，可以快速、充分的裂解细胞、变性蛋白质、使蛋白质与核酸有效分离，释放出核酸；提高了细胞裂解液的工作效率，缩短了核酸提取的时间。

【技术实现步骤摘要】
一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒、磁珠及其制备方法
本申请涉及核酸提取领域，特别是涉及一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒、磁珠及其制备方法。
技术介绍
核酸是细胞内携带遗传信息的物质，在生物体的遗传、变异和蛋白质的生物合成中具有极其重要的作用。随着分子生物学检测技术的飞速发展，基于核酸信息的分子诊断技术成为有效的疾病诊断的新型临床手段和思路，特别是在感染性疾病、肿瘤和遗传性疾病领域。新发展的感染性疾病分子诊断技术不仅有效的弥补了传统方法的不足，还为临床医生提供了细菌、真菌或病毒的感染信息以及病原体的耐药基因结果，甚至病原体的同源性分析。基于核酸信息的分子诊断技术的发展也对核酸提取和纯化有了更高的要求，临床上病原体分子检测的有效进行除了需要得到高质量的核酸分子外，快速高效也是分子检测在临床应用的一个重要因素。比如临床上对于一些急性感染患者，快速准确的确定病原是治疗最关键的环节。此外，对于一些急性病毒引起的疫情，有时需要现场检测；对于一些特殊的部门和岗位也需要快速准确的诊断，比如海关执法人员需要快速诊断出发热旅客是否由特定的病毒或者病菌引起，这个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒，包括细胞裂解液、磁珠和洗涤液，其特征在于：所述细胞裂解液中含有异硫氰酸胍、Triton X-100、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸和N-月桂酰肌氨酸钠。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒，包括细胞裂解液、磁珠和洗涤液，其特征在于：所述细胞裂解液中含有异硫氰酸胍、TritonX-100、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸和N-月桂酰肌氨酸钠。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞裂解液中，异硫氰酸胍浓度为2mol/L～4mol/L，TritonX-100含量为1vol％～5vol％，3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸含量为5～50g/L，N-月桂酰肌氨酸钠含量为1～10g/L；
优选的，所述细胞裂解液还含有聚乙二醇；
优选的，所述细胞裂解液中，聚乙二醇含量为50～200g/L；
优选的，所述聚乙二醇为PEG4000、PEG6000或PEG8000；
优选的，所述细胞裂解液还含有裂解缓冲液、金属离子螯合剂、负电荷中和剂和消泡剂；
优选的，所述裂解缓冲液为Tris-HCL，Tris-HCL在细胞裂解液中的浓度为10mmol/L～100mmol/L；
优选的，所述金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸，乙二胺四乙酸在细胞裂解液中的浓度为5mmol/L～50mmol/L、pH8.0；
优选的，所述负电荷中和剂为NaCl，NaCl在细胞裂解液中的浓度为0.28mol/L～0.5mol/L；
优选的，所述消泡剂为Antifoam204，Antifoam204在细胞裂解液中的浓度为0.01vol％～0.1vol％。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞裂解液由10mmol/L～100mmol/LTris-HCL、5mmol/L～50mmol/LpH8.0的乙二胺四乙酸、2mol/L～4mol/L异硫氰酸胍、1vol％～5vol％的TritonX-100、5～50g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸、1～10g/L的N-月桂酰肌氨酸钠、0.28mol/L～0.5mol/LNaCl、0.01vol％～0.1vol％的Antifoam204、50～200g/L聚乙二醇组成；
优选的，所述细胞裂解液由20mmol/L～50mmol/LTris-HCL、10mmol/L～20mmol/LpH8.0的乙二胺四乙酸、3mol/L～4mol/L异硫氰酸胍、2vol％～5vol％的TritonX-100、10～50g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸、2～10g/L的N-月桂酰肌氨酸钠、0.28mol/L～0.3mol/LNaCl、0.05vol％～0.1vol％的Antifoam204、50～100g/L的聚乙二醇组成；
优选的，所述细胞裂解液由25mmol/LTris-HCL、10mmol/LpH8.0的乙二胺四乙酸、4mol/L异硫氰酸胍、2vol％的TritonX-100、50g/L的3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸、5g/L的N-月桂酰肌氨酸钠、0.28mol/LNaCl、0.1vol％的Antifoam204、100g/L的聚乙二醇组成。


4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液不含乙醇或异丙醇，所述洗涤液中含有NaCl和聚乙二醇；
优选的，所述洗涤液中，NaCl的浓度为0.14mol/L～2mol/L，聚乙二醇的含量为50～200g/L；
优选的，所述聚乙二醇为PEG4000、PEG6000或PEG8000；
优选的，所述洗涤液还含有洗涤缓冲液；
优选的，所述洗涤缓冲液为Tris-HCL，Tris-HCL在所述洗涤液中的浓度为10mmol/L～100mmol/L；
优选的，所述洗涤液由10mmol/L～100mmol/L的Tris-HCL、0.14mol/L～2mol/L的NaCl、50～200g/L的聚乙二醇组成；
优选的，所述洗涤液由20mmol/L～50mmol/L的Tris-HCL、0.3mol/L～0.6mol/L的NaCl、80～120g/L的聚乙二醇组成；
优选的，所述洗涤液由20mmol/L的Tris-HCL、0.5mol/L的NaCl、100g/L的聚乙二醇组成。


5.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述磁珠内核为具有超顺磁性的纳米微球，外部包被树脂和硅羟基修饰材料，所述磁珠的粒径为200～350nm，磁响应时间为1～2分钟。


6.一种用于磁珠法核酸提取的细胞裂解液，其特征在于：所述细胞裂解液中含有异硫氰酸胍、TritonX-100、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸和N-月桂酰肌氨酸钠；
优选的，所述细胞裂解液中，异硫氰酸胍浓度为2mol/L～4mol/L，TritonX-100含量为1vol％～5vol％，3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸含量为5～50g/L，N-月桂酰肌氨酸钠含量为1～10g/L；
优选的，所述细胞裂解液还含有聚乙二醇；
优选的，所述细胞裂解液中，聚乙二醇含量为50～200g/L；
优选的，所述聚乙二醇为PEG4000、PEG6000或PEG80...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄超杰，鲁津津，黄硕，路通，耿春雨，陈芳，蒋慧，
申请(专利权)人：深圳华大智造科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44