【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因检测，具体地，涉及一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合及其应用。
技术介绍
1、地中海贫血（地贫）是由于珠蛋白基因发生缺陷，致使珠蛋白链合成减少或缺失，使形成血红蛋白的α、β-珠蛋白肽链合成速率比例失衡，而导致的一种常染色体隐性遗传溶血性疾病，轻者可无临床表现，重者以溶血性贫血为主要特征。根据珠蛋白肽链合成受到抑制的类型，地中海贫血可以分为α-地中海贫血、β-地中海贫血、δ-地中海贫血、γ-地中海贫血、δβ-地中海贫血和εγδβ-地中海贫血等。另外，临床上，该病又分轻型（地中海贫血基因携带者）、中间型和重型3个类型。
2、β-地贫是由于血红蛋白的β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺如(β°)或合成不足(β+)，从而引起的遗传性溶血性贫血病。β珠蛋白基因位于11号染色体短臂（11p15），基因排列顺序为5‘-ε-gγ-aγ-ψβ-δ-β-3’，长度约60kb。绝大多数β地贫是由于点突变所致，少数为基因缺失所致。β0珠蛋白生成障碍性贫血，突变导致β链的合成完全受抑制，无β链生成；β+珠蛋白生成障碍性贫血，突变导致β链的合成部分受抑制，有少量β链合成；非典型β珠蛋白生成障碍性贫血，分子缺陷位于β珠蛋白基因启动区或位点控制区（lcr），导致β珠蛋白表达受影响。全世界已报道170种左右β珠蛋白基因的突变型，这些不同的β地贫基因在不同地区的发生率也有所不同。
3、因β-珠蛋白完全不能合成或仅能部分合成引起α、β链合成比例失衡，导致不稳定的游离型α-珠蛋白堆积、变性及降解，从而产生
4、β-地贫传统的临床血液学检测方法如常规参数检测分析、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白稳定性试验等特异性不高，较易产生假阴性；而肽链分析、hplc、elisa等检测方法由于检测单一和操作繁琐等原因正被技术日益成熟的基因检测所替代。传统基因诊断技术主要采用southern印迹杂交方法，灵敏度高、准确率高，但操作时间长、要求dna量多、需要同位素等原因使其只用于研究，不能进行大规模筛查；而普通pcr电泳技术，其方法与传统的southern分子杂交相比操作简易、快速、准确、经济且易推广，为β-地贫基因诊断提供了较为有效的方法，但普通pcr电泳技术的特异性较低，容易出现假阴性或假阳性阴性结果；杂交法能提升dna分析的特异性，但是大多数杂交方法耗时耗力，无法达到临床快速检测的要求。
5、因此目前急需一种不仅操作简单，而且具备优异灵敏度和准确度的β-地中海贫血突变基因的检测方法，用于快速检测β-地中海贫血。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合及其应用。
2、本专利技术的第一目的是提供一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合。
3、本专利技术的第二目的是提供上述引物探针组合在制备用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的检测产品中的应用。
4、本专利技术的第三目的是提供一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的试剂盒。
5、本专利技术的第四目的是提供一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的检测体系。
6、本专利技术的第五目的是提供上述试剂盒和/或上述检测体系在非诊断目的检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失中的应用。
7、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
8、一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合，所述引物探针组合包括19条引物和58条探针；
9、所述19条引物的核苷酸序列如seq id no：1～19所示；所述58条探针的核苷酸序列如seq id no：20～77所示。
10、优选地，所述19条引物的5’端标记有生物素。
11、更优选地，所述19条引物形成10个引物对，引物对1含有核苷酸序列如seq id no：1所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：2所示的下游引物；引物对2含有核苷酸序列如seq id no：3所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：4所示的下游引物；引物对3含有核苷酸序列如seq id no：5所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：6所示的下游引物；引物对4含有核苷酸序列如seq id no：7所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：8所示的下游引物；引物对5含有核苷酸序列如seq id no：9所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：10所示的下游引物；引物对6含有核苷酸序列如seq id no：11所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：12所示的下游引物；引物对7含有核苷酸序列如seq id no：13所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：14所示的下游引物；引物对8含有核苷酸序列如seq id no：15所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：16所示的下游引物；引物对9含有核苷酸序列如seq id no：17所示的上游引物和核苷酸序列如seq id no：18所示的下游引物；引物对10含有核苷酸序列如seq id no：19所示的上游引物和核苷酸序列如seq idno：16所示的下游引物。
12、优选地，所述58条探针的5‘端有氨基化修饰。
13、本专利技术还请求保护上述任一所述的引物探针组合在制备用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的检测产品中的应用。
14、优选地，所述β-地中海贫血基因突变包括27种突变型β-地中海贫血基因；所述27种突变型β-地中海贫血基因为：-88(c>t)、-86(c>g)、-31(a>t)、-29(a>g)、-28(a>g)、cap+1(a>c)、int(t>g)、cd8/9(+g)、cd6(g>a)、cd6(a>t)、cd15(g>a)、cd16(-c)、cd17(a>t)、cd19(a>g)、βe (g>a)、cd27-28(+c)、ivs-і-1(g>a)、ivs-і-5(g>c)、cd35(-c) 、cd41-42(-ttct)、cd43(g>t)、cd71-72(+a)、cd95(+a)、ivs-ii-1(g>a)、ivs-ii-654(c>t)、cd121(g>c)和polya(aataaaa→aatagaa)。
15、优选地，所述β-地中海贫血基因缺失包括8种缺失型β-地中海贫血基因；所述8种缺失型β-地中海贫血基因本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括19条引物和58条探针；
2.权利要求1所述的引物探针组合在制备用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的检测产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测产品为试剂盒和/或基因芯片。
4.一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有扩增引物和基因芯片；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、聚丙烯膜和/或磁珠。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有PCR Buffer、dNTPs、氯化镁和/或Taq酶。
7.一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的检测体系，其特征在于，含有：
8.根据权利要求7所述的检测体系，其特征在于，所述引物探针组合中的19条引物在检测体系中的工作浓度为0.1～0.5μM；所述引物探针组合中的58条探针在检测体系中的工作浓度为
9.根据权利要求8所述的检测体系，其特征在于，所述Taq酶在检测体系中的工作浓度为0.05U/μL。
10.权利要求4～6任一所述的试剂盒和/或权利要求7～9任一所述的检测体系在非诊断目的检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括19条引物和58条探针；
2.权利要求1所述的引物探针组合在制备用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的检测产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测产品为试剂盒和/或基因芯片。
4.一种用于检测β-地中海贫血基因突变和/或缺失的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有扩增引物和基因芯片；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、聚丙烯膜和/或磁珠。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有pcr buffer、dntps、...
【专利技术属性】
技术研发人员：马晓敏，陈燕兰，邓文奡，葛毅媛，陈紫若，
申请(专利权)人：广州凯普医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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