本实用新型专利技术涉及一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，包括激发光源、第一二向色镜、光电倍增管、物镜和微流控芯片。第一二向色镜用以将激发光源发出的激发光束反射到微流控芯片上，激发光源发出的激发光束依次经过第一二向色镜和物镜后到达微流控芯片上，微流控芯片上的荧光信号依次经过物镜和第一二向色镜后到达光电倍增管上，光电倍增管收到荧光信号后转化为电信号发送给控制器，控制器发送信号用以控制微流控芯片进行细胞分选。激发光源、滤光片和光电倍增管均有三个，装置可同时识别细胞中的三种荧光信号，并完成对同时具有三种荧光信号的目标细胞的筛选工作，筛选目标细胞的速度更快，效率更高。效率更高。效率更高。
【技术实现步骤摘要】
一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置
[0001]本技术涉及细胞分选
，具体地，涉及一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置。
技术介绍
[0002]随着细胞治疗和基因治疗技术的不断发展，细胞的相关研究已经逐渐成为当前医学乃至整个生命科学领域中的研究热点，细胞培养已经成为科研中一个很重要的技术，而要获得较纯的目的细胞，细胞分选、纯化已成为关键的问题。为了能够顺利的完成细胞分选，采用了多种技术手段，如公开号为CN109097244A 的供一种激光辅助细胞分选装置，包括工作站、与工作站电连接的激光器、三维移动平台、激发光源和PMT组件，三维移动平台上设有接收件，接收件的上方由下往上依次设有微阵列芯片、物镜、半反半透镜、同轴模块和滤光模块，激光器的位置满足激光器发出的激光经半反半透镜反射后，再经物镜聚焦在芯片微阵列芯片上；激发光源的位置满足激发光源发出的光经过同轴模块后，透过半反半透镜，再经物镜聚焦在芯片微阵列芯片上；PMT组件设在滤光模块的上方。该方案能够提高分选精度，不会对细胞活性造成损伤。
[0003]但是，为了能够获得更纯的目的细胞，在细胞分选过程中会采用多种荧光染料对目的细胞进行染色，该方案中的细胞分选装置一次只能够识别带有一种荧光信号的目标细胞，当采用多种荧光染料对目的细胞进行染色时，需对带有荧光信号的目的细胞进行多次筛选。
技术实现思路
[0004]本技术为解决上述技术方案中当采用多种荧光染料对目的细胞进行染色时，需对目的细胞进行多次筛选的问题，提供一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置。本方案可同时识别细胞鞘液内的具有多种荧光信号的目标细胞并完成细胞分选工作。
[0005]本技术采用的技术方案是：一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，包括激发光源、光电倍增管、物镜、微流控芯片和第一二向色镜，其中微流控芯片与光电倍增管电连接。激发光源发出的激发光束依次经过第一二向色镜和物镜后到达微流控芯片上，微流控芯片上的荧光信号依次经过物镜和第一二向色镜后到达光电倍增管上。激发光源有若干个，若干个激发光源集中排列用以将激发光束投射至微流控芯片上；光电倍增管有若干个，若干个光电倍增管集中排列用以接收目标细胞发出的若干种荧光信号。若干个光电倍增管与若干个激发光源一一对应。
[0006]激发光源有若干个，光电倍增管也有若干个，若干个激发光源和若干个光电倍增管一一对应，使得装置可以同时识别细胞内部若干个荧光信号。激发光源发出的激发光束经过第一二向色镜的反射，然后穿过物镜投射在微流控芯片上，微流控芯片上的目标细胞受到激发光源的照射后，发出若干种荧光信号，目标细胞发出的荧光信号经过物镜后被光电倍增管接收，光电倍增管接收到光信号后将光信号转化为电信号，并将电信号传递给微
流控芯片，微流控芯片同时收到若干个光电倍增管的电信号后对目标细胞进行分选，将目标细胞从细胞悬液中筛选出来。装置可以同时识别目标细胞中的若干种荧光信号，对带有多种荧光信号的目标细胞无需多次筛选，筛选目标细胞的速度更快，效率更高。
[0007]优选的，激发光源包括第一激发光源、第二激发光源和第三激发光源；光电倍增管包括第一光电倍增管、第二光电倍增管和第三光电倍增管。目前对细胞进行染色的荧光染剂主要为三种，第一种为DAPI染剂，染色后的荧光蛋白呈蓝色；第二种为PGFP染剂，染色后的荧光蛋白呈绿色；第三种为mCherry染剂，染色后的荧光蛋白呈红色。三种染剂所发出的荧光相互之间更好区分，对目标细胞进行分选时，一般采用三种染剂对细胞同时进行染色，使得目标细胞同时具有三种荧光信号。因此设置三个激发光源使得目标细胞可以发出蓝绿红三种荧光，设置三个光电倍增管来分别接收蓝绿红三种荧光。
[0008]优选的，第一二向色镜与微流控芯片呈45
°
夹角。装置还包括第二二向色镜和第三二向色镜，第二二向色镜与第一二向色镜平行或垂直设置，第三二向色镜与第一二向色镜平行或垂直设置。第一激发光源和第二激发光源二者平行且二者均与第三激发光源垂直。设置与第一二向色镜平行或垂直的第二二向色镜和第三二向色镜，且第一二向色镜与微流控芯片呈45
°
夹角，使得第一激发光源和第二激发光源二者平行设置且二者均与第三激发光源垂直。第一激发光源、第二激发光源和第三激发光源可以分散排布，位置排布更加合理。
[0009]优选的，第一激发光源在第二二向色镜上的入射点和第二激发光源在第三二向色镜上的入射点均位于第三激发光源发出的激发光束的光路上。使得第一激发光源，第二激发光源和第三激发光源所发出的激发光束在经过第一二向色镜反射前即合并成一束光。第一激发光源，第二激发光源和第三激发光源发出的激发光束在微流控芯片上重叠的区域更大，更便于微流控芯片上的目标细胞同时收到三个激发光束。
[0010]优选的，装置还包括第四二向色镜和第五二向色镜，第四二向色镜和第五二向色镜均位于荧光信号的光路上，第四二向色镜反射第一光电倍增管接收的荧光信号，第五二向色镜反射第二光电倍增管接收的荧光信号。设置第四二向色镜和第五二向色镜使得第一光电倍增管、第二光电倍增管和第三光电倍增管无需集中排布即可同时接收到微流控芯片上目标细胞发出的荧光信号，三个光电倍增管的位置排布更加合理。
[0011]优选的，装置还包括滤光片，滤光片包括第一滤光片、第二滤光片和第三滤光片。第一滤光片位于第一光电倍增管的进光口处；第二滤光片位于第二光电倍增管的进光口处；第三滤光片位于第三光电倍增管的进光口处。在光电倍增管前设置滤光片可以使波长范围更小的光进入光电倍增管，提高了光电倍增管所接收的荧光信号的纯度和强度，每个光电倍增管只有一种指定波长的荧光信号进入而被检测，使光谱带宽接近荧光染料的发射峰值。
[0012]优选的，装置还包括固定载板，激发光源、滤光片、光电倍增管、物镜、第一二向色镜、第二二向色镜、第三二向色镜、第四二向色镜和第五二向色镜均位于固定载板的同一侧并与固定载板固定连接，微流控芯片上的荧光检测区域位于固定载板上物镜的正下方。采用固定载板对光学元件进行固定，防止光学元件出现位置偏差影响细胞分选的准确性。
[0013]优选的，微流控芯片包括检测区域、分选区域、进气口、废液池和目标细胞池，检测区域与分选区域之间通过第一细胞流道进行连接，分选区域与废液池之间通过第二细胞流
道进行连接，进气口与分选区域通过气体流道进行连接，目标细胞池和分选区域通过分选流道进行连接。第一细胞流道、第二细胞流道、气体流道和分选流道在分选区域四周呈十字排布，其中气体流道和分选流道位于同一条直线上。细胞流道的直径为细胞直径的1.5
‑
1.8倍，气体流道和分选流道上靠近分选区域的直径均为细胞直径的0.9
‑
1倍。鞘液带着目标细胞经过检测区域时，目标细胞内的三种荧光蛋白在激发光源的照射下发出荧光，光电倍增管接收到荧光信号后发送信号给微流控芯片控制微流控芯片向微流控芯片上的进气口喷气，目标细胞到达分选区域时，气体流道内的气流将目标细胞吹至本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，包括激发光源(1)、光电倍增管(3)和物镜(4)，其特征在于，还包括微流控芯片(11)和第一二向色镜(5)，所述微流控芯片(11)与所述光电倍增管(3)电连接，所述激发光源(1)发出的激发光束依次经过所述第一二向色镜(5)和所述物镜(4)后到达所述微流控芯片(11)上，所述微流控芯片(11)上的荧光信号依次经过所述物镜(4)、所述第一二向色镜(5)后到达所述光电倍增管(3)上，所述激发光源(1)有若干个，若干个所述激发光源(1)集中排列用以将激发光束投射至微流控芯片上；所述光电倍增管(3)有若干个，若干个所述光电倍增管(3)集中排列用以接收荧光信号，若干个所述光电倍增管(3)与所述若干个所述激发光源(1)一一对应。2.根据权利要求1所述的一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，其特征在于，所述激发光源(1)包括第一激发光源(101)、第二激发光源(102)和第三激发光源(103)；所述光电倍增管(3)包括第一光电倍增管(301)、第二光电倍增管(302)和第三光电倍增管(303)。3.根据权利要求2所述的一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，其特征在于，还包括第二二向色镜(6)和第三二向色镜(7)，所述第一二向色镜(5)与所述微流控芯片(11)呈45
°
夹角，所述第二二向色镜(6)与所述第一二向色镜(5)平行或垂直设置，所述第三二向色镜(7)与所述第一二向色镜(5)平行或垂直设置，所述第一激发光源(101)与所述微流控芯片(11)垂直，所述第二激发光源(102)与所述微流控芯片(11)垂直。4.根据权利要求3所述的一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，其特征在于，所述第一激发光源(101)在所述第二二向色镜(6)上的入射点和所述第二激发光源(102)在所述第三二向色镜(7)上的入射点均位于所述第三激发光源(103)发出的激发光束的光路上。5.根据权利要求3所述的一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，其特征在于，还包括第四二向色镜(8)和第五二向色镜(9)，所述第四二向色镜(8)和所述第五二向色镜(9)均位于荧光信号的光路上，所述第四二向色镜(8)反射所述第一光电倍增管(301)接收的荧光信号，所述第五二向色镜(8)反射所述第二光电倍增管(302)接收的荧光信号。6.根据权利要求5所述的一种同时检测细胞内多种荧光信号的分选装置，其特征在于，还包括滤光...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴永光，门涌帆，郑焱，刘梦羽，廖九零，马佳艳，谢龙旭，
申请(专利权)人：广州凯普医药科技有限公司，
类型：新型
国别省市：
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