【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸提取的，具体地，涉及一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒及其应用。
技术介绍
1、干血斑（dried blood spot，dbs），是一种将全血样品收集在滤纸上的血液采集方式，比传统的血液采集方法具有血量需求较少、血样采集和存储运输方便等优势，是基因检测尤其是大规模遗传病筛查过程中的一项有效工具，在上世纪五六十年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查。随着串联质谱技术等的发展，干血斑被广泛应用于各种新生儿遗传代谢病的“新筛”。近些年，干血斑在基因检测领域也得到多方面的发展，如耳聋、地中海贫血等。此外，新生儿重症联合免疫缺陷（scid）中的t细胞受体重排删除环（trecs）和kappa删除重组切除环（krecs）的筛查也均使用干血斑。
2、目前提取干血斑基因组dna的方法主要有3种：（1）核酸释放方法：干血片经过清洗或不清洗，加入核酸释放剂浸润，高温裂解，离心得到核酸；（2）离心柱法：核酸裂解液裂解干血片中的细胞，释放核酸后利用硅胶膜特异性吸附核酸，再洗脱得到较纯的核酸；（3）磁珠法：核酸裂解液裂解干血片中的细胞，释放核酸后用磁珠吸附核酸，当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，从而洗脱得到较纯的核酸。近年来，磁珠法因其能实现高通量自动化操作、用时短，且具有操作简单、安全无毒和成本低等优点越来越备受瞩目。
3、中国专利技术专利cn105602942a公开了核酸释放剂和干血斑核酸快速提取方法，该方法提供的核酸释放剂即可实现核酸的释放，并通过过滤柱得到较高纯度的核酸，免去了传统提取技术中的反复离心
4、中国专利技术专利cn113122534a公开了一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒及提取方法，该专利技术的干血斑提取试剂可以提取片段完整、质量稳定、条带整洁的基因组dna，但不能实现自动化高通量提取，且人为操作对提取干血斑核酸质量的影响较大。
5、中国专利技术专利cn117165575a公开了一种基于纳米磁珠自动化提取干血斑dna试剂盒，该试剂盒不含酚氯仿等有毒组分，也无需进行耗时的醇类沉淀，可进行高通量提取。然而，该试剂盒提取的核酸的a260/a230平均值为1.16左右，远远小于2.0，这表明该试剂盒提取的干血斑基因组dna存在碳水化合物、胍盐等污染物，因此该试剂盒的dna纯度仍需进一步提高。
6、综上所述，现有技术在干血斑基因组dna的提取方面仍存在一些缺点，因此需要开发一种在提高浓度和纯度的同时，也能适合机器自动化提取的方法，从而实现样本的大规模快速提取。
技术实现思路
1、为克服现有技术中存在的上述缺陷与不足，本专利技术提供一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒及其应用。
2、本专利技术的第一个目的是提供一种用于磁珠法提取干血斑基因组dna的核酸释放剂。
3、本专利技术的第二个目的是提供一种用于磁珠法提取干血斑基因组dna的裂解液。
4、本专利技术的第三个目的是提供上述的核酸释放剂和裂解液在制备用于磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒的产品中的应用。
5、本专利技术的第四个目的是提供一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒。
6、因此，本专利技术要求保护以下内容：
7、一种用于磁珠法提取干血斑基因组dna的核酸释放剂，所述核酸释放剂含有以下组分：4～10 m盐酸胍、10～50 mm tris-hcl、50～150 mm naoh、10～40 mm edta、体积分数为0.8～1.2%的triton x-100和0.8～1.2 m dtt。
8、优选地，所述核酸释放剂含有以下组分：6～8 m盐酸胍、40～50 mm tris-hcl、110～125 mm naoh、10～15 mm edta、体积分数为0.8～1.2%的triton x-100和0.8～1.2 mdtt。
9、更优选地，所述核酸释放剂含有以下组分：7 m盐酸胍、50 mm tris-hcl、120 mmnaoh、10 mm edta、体积分数为1%的triton x-100和1 m dtt。
10、一种用于磁珠法提取干血斑基因组dna的裂解液，所述裂解液含有以下组分：1～5m盐酸胍、40～50 mm tris-hcl、10～40 mm edta、1～3 m氯化钠和体积分数为1～2%的月桂基二甲基氧化胺。
11、优选地，所述裂解液含有以下组分：3 m盐酸胍、50 mm tris-hcl、20 mm edta、3 m氯化钠和体积分数为1.5%的月桂基二甲基氧化胺。
12、任一上述的核酸释放剂和/或裂解液在制备用于磁珠法提取干血斑基因组dna的产品中的应用。
13、一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒，所述试剂盒中含有任一上述的核酸释放剂和/或裂解液。
14、优选地，所述试剂盒中还含有磁珠。
15、更优选地，所述磁珠为硅羟基磁珠。
16、更优选地，所述磁珠的浓度为1.8～2.2 mg/ml。
17、最优选地，所述磁珠的浓度为2 mg/ml。
18、优选地，所述试剂盒中还含有洗涤液ⅰ；
19、所述洗涤液ⅰ含有以下组分：1～3 m盐酸胍、0.5～0.8 m氯化钠、25～35 mm tris-hcl和20～25 mm edta。
20、更优选地，所述洗涤液ⅰ含有以下组分：1 m盐酸胍、0.8 m氯化钠、30 mm tris-hcl和25 mm edta。
21、优选地，所述试剂盒中还含有洗涤液ⅱ，所述洗涤液ⅱ为体积分数70～75%的乙醇溶液。
22、更优选地，所述洗涤液ⅱ为体积分数70%的乙醇溶液。
23、优选地，所述试剂盒中还含有洗脱液，所述洗脱液为8～10 mm tris-hcl或rnase-free水。
24、更优选地，所述洗脱液为10 mm tris-hcl或rnase-free水。
25、更优选地，所述10 mm tris-hcl的ph为8.0。
26、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
27、本专利技术公开了一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒及其应用。该试剂盒由核酸释放剂、裂解液、磁珠、洗涤液ⅰ、洗涤液ⅱ和洗脱液组成，核酸释放剂包括以下组分：盐酸胍、tris-hcl、naoh、edta、triton x-100和dtt；裂解液包括以下组分：盐酸胍、tris-hcl、edta、氯化钠和月桂基二甲基氧化胺；磁珠为硅羟基磁珠；洗涤液ⅰ包括以下组分：盐酸胍、氯化钠、tris-hcl和edta；洗涤液ⅱ为乙醇溶液，洗脱液为tris-hcl或rnase-free水。
28、与现有产品相比，本专利技术的试剂盒至少具有以下优势：
29、（1）核酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种用于磁珠法提取干血斑基因组DNA的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂含有以下组分：4～10 M盐酸胍、10～50 mM Tris-HCl、50～150 mM NaOH、10～40 mMEDTA、体积分数为0.8～1.2%的Triton X-100和0.8～1.2 M DTT。
2. 根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂含有以下组分：6～8 M盐酸胍、40～50 mM Tris-HCl、110～125 mM NaOH、10～15 mM EDTA、体积分数为0.8～1.2%的Triton X-100和0.8～1.2 M DTT。
3. 根据权利要求2所述的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂含有以下组分：7M盐酸胍、50 mM Tris-HCl、120 mM NaOH、10 mM EDTA、体积分数为1%的Triton X-100和1 MDTT。
4. 一种用于磁珠法提取干血斑基因组DNA的裂解液，其特征在于，所述裂解液含有以下组分：1～5 M盐酸胍、40～50 mM Tris-HCl、10～40 mM EDT
5.权利要求1～3任一所述的核酸释放剂和/或权利要求4所述的裂解液在制备用于磁珠法提取干血斑基因组DNA的产品中的应用。
6.一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1～3任一所述的核酸释放剂和/或权利要求4所述的裂解液。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有磁珠。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有洗涤液Ⅰ；
9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有洗涤液Ⅱ，所述洗涤液Ⅱ为体积分数70～75%的乙醇溶液。
10. 根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有洗脱液，所述洗脱液为8～10 mM Tris-HCl或RNase-free水。
...【技术特征摘要】
1. 一种用于磁珠法提取干血斑基因组dna的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂含有以下组分：4～10 m盐酸胍、10～50 mm tris-hcl、50～150 mm naoh、10～40 mmedta、体积分数为0.8～1.2%的triton x-100和0.8～1.2 m dtt。
2. 根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂含有以下组分：6～8 m盐酸胍、40～50 mm tris-hcl、110～125 mm naoh、10～15 mm edta、体积分数为0.8～1.2%的triton x-100和0.8～1.2 m dtt。
3. 根据权利要求2所述的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂含有以下组分：7m盐酸胍、50 mm tris-hcl、120 mm naoh、10 mm edta、体积分数为1%的triton x-100和1 mdtt。
4. 一种用于磁珠法提取干血斑基因组dna的裂解液，其特征在于，所述裂解...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶树秀，许泽仰，刘付家敏，李菲，葛毅媛，谢龙旭，
申请(专利权)人：广州凯普医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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