一种从孕妇宫颈脱落细胞中分离胎盘滋养层细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种从孕妇宫颈脱落细胞中分离胎盘滋养层细胞的方法。该方法基于研究确定的滋养层细胞表面或胞内表达的特异性抗原及组合，并利用设计的微流控分选芯片或流式细胞仪，对胎盘滋养层样本的细胞悬浮液进行细胞分选，获得分离纯化的胎盘滋养层细胞。本发明专利技术与传统方法相比，具有无创获取标本和特异性好的优势，而且该方法取材时间较早，导致感染及流产的风险低，能实现同时对多个抗原进行同步标记和特征荧光信号的识别和分选，准确性得到较大提升，检测结果又具有更高的可信度和更广的覆盖范围。

【技术实现步骤摘要】
一种从孕妇宫颈脱落细胞中分离胎盘滋养层细胞的方法
本专利技术属于细胞分离
更具体地，涉及一种从孕妇宫颈脱落细胞中分离筛选滋养层细胞的方法。
技术介绍
孕前、产前和新生儿三级防控体系是我国降低出生缺陷、提高人口素质的重要手段之一，其中产前筛查和诊断是最为复杂且难度最高的环节。目前临床上用于产前诊断的羊膜腔穿刺术或者脐静脉穿刺术，以及胎儿游离核酸测序等无创产前筛查技术都存在各种不足；羊膜腔穿刺术或者脐静脉穿刺术取材方法操作感染和流产的风险高、分析时间长，检测项目和范围有限，而且诊断时间限制在孕中晚期，孕妇的接受度低且不利于临床处理。胎儿游离核酸测序技术检验范围极其有限，且存在仅可检测3-5条指定染色体倍性，假阳性、假阴性情况难以避免，对常见变异检出能力不足，母血胎儿游离核酸的含量也存在个体差异性等问题。申请人的专利申请CN111304153A披露了一种分离滋养层细胞的方法，该方法通过确定滋养层细胞表面表达的特异性抗原，利用带有对应特异性抗体的免疫磁珠技术，从胎盘滋养层样本细胞悬浮液中分离纯化胎盘滋养层细胞。该技术与传统的羊膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离滋养层细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将宫颈脱落细胞液样本制备成样本细胞悬浮液；/n(2)向样本细胞悬浮液中加入特异性抗体进行孵育；/n所述特异性抗体是对应滋养层细胞表面或胞内表达的特异性抗原的抗体组合，即HLA-G+CK7、HLA-G+CK18、HLA-G+β-HCG、CD31+HPL、MMP9+CD31、HLA-G+HPL、HLA-G+MMP9、HLA-G+CD31、HLA-G+P、CD31+P、HLA-G+CDH5、CD31+CDH5、CD31+CK7+HLA-G、HLA-G+CK18+CD31、HLA-G+β-HCG+CD31、CD31+HPL+HLA-G、...

【技术特征摘要】
1.一种分离滋养层细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将宫颈脱落细胞液样本制备成样本细胞悬浮液；
(2)向样本细胞悬浮液中加入特异性抗体进行孵育；
所述特异性抗体是对应滋养层细胞表面或胞内表达的特异性抗原的抗体组合，即HLA-G+CK7、HLA-G+CK18、HLA-G+β-HCG、CD31+HPL、MMP9+CD31、HLA-G+HPL、HLA-G+MMP9、HLA-G+CD31、HLA-G+P、CD31+P、HLA-G+CDH5、CD31+CDH5、CD31+CK7+HLA-G、HLA-G+CK18+CD31、HLA-G+β-HCG+CD31、CD31+HPL+HLA-G、MMP9+CD31+HLA-G、CD31+P+HLA-G或HLA-G+CDH5+CD31的特异性抗体组合；
(3)利用流式细胞仪将步骤(2)孵育完成的细胞重悬液进行荧光标记分选，获得分离纯化的胎盘滋养层细胞；
或利用微流控分选芯片，将步骤(2)孵育完成的细胞重悬液进行荧光标记微流控细胞分选，获得分离纯化的胎盘滋养层细胞。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微流控分选芯片包括基片和与之贴合的盖片；
所述基片的一面上设有主流道、侧流道A和侧流道B，两个侧流道分别靠近主流道的左、右两端部；
所述基片的另一面上设有C入口、S入口、N出口和T出口；四个口均贯穿到基片另一面与流道连通；且C入口的位置对应于主流道的左端部，S入口的位置对应于侧流道A端部，N出口的位置对应于主流道的右端部，T出口的位置对...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑焱，马佳艳，丰晓威，刘梦羽，陈佩璇，管秩生，谢龙旭，葛毅媛，
申请(专利权)人：广州凯普医药科技有限公司，广东凯普生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44