本发明专利技术提供了一种抑制马立克氏病病毒复制的药物，包括去泛素化酶UL36抑制剂，以及一种预防或抗马立克氏病药物。通过抑制病毒编码的酶活性实验、CEF细胞水平上进行药物毒性实验、病毒CPE抑制实验和鸡马立克氏病模型实验，本发明专利技术首次筛选出去泛素化酶UL36抑制剂DUBs‑IN‑1及其衍生物，不仅能够在酶水平上抑制UL36的活性，在细胞水平上抑制马立克氏病病毒的复制，还可在动物水平上抑制马立克氏病肿瘤生长和内脏出血，且具有效果极强，剂量小的优点，可作为抗MD药物广泛用于养禽业防御马立克氏病的生产实践中。
【技术实现步骤摘要】
一种抑制马立克氏病病毒复制、预防或抗马立克氏病的药物
本专利技术涉及化合物应用领域，具体涉及DUBs-IN-1及其衍生物作为抑制马立克氏病病毒复制以及抗马立克氏病发生药物的应用。
技术介绍
马立克氏病(MD)是一种由于鸡感染致病型血清I型马立克氏病病毒(MDV)而引起的高度传染性、高致病性、淋巴组织增生性病毒性肿瘤病，此病世界各地广泛存在，我国与埃及是此病的高发病率国家。因此，MD对我国的养禽业是重要威胁。鸡是MDV最重要的自然宿主，MDV属于细胞结合性的疱疹病毒科，其分子结构和基因组成与α疱疹病毒相似。除非是在严格的无特定病原体(SPF)条件下饲养,否则所有鸡群都可能被感染，即便是经过疫苗免疫的鸡群也不能幸免。MD被认为是严重危害世界养鸡业的主要疫病之一，给世界家禽业带来了巨大的经济损失。MD疫苗是目前广泛用来防御MD的主要手段，自20世纪70年代以来，疫苗在家禽养殖业开始普遍用于MD的控制。已经有研究表明，接种MD疫苗能在一定程度上减少鸡体发生MD恶性肿瘤和免疫抑制的概率，但MDV仍然可以感染经MD疫苗免疫的鸡，疫苗的免疫作用不能阻止鸡体内病毒的复制、成熟和释放。因此，经MD疫苗免疫并被MDV感染而不发病的鸡，就成为MDV新的传染源，同时，由于疫苗免疫引起的免疫压力，造成MDV毒力不断增强，进而造成新疫苗使用约10年，就会有毒力更强的MDV毒株的出现。因此，上述原因造成病毒突破疫苗免疫防御引起MD的暴发，是养禽业的重大威胁。而抑制MDV在鸡细胞内的复制是切断传染源，扼制MDV毒力增强的最有效办法，也是控制MD暴发，增强疫苗的防御效果的关键。DUBs-IN-1中文名称为9-[(苯甲氧基)肟]-9H-茚并[1,2-B]吡嗪-2,3-二甲腈，中文别名为9-苄氧基亚氨基-9H-茚并[1,2-B]吡嗪-2,3-二甲腈，其CAS号为924296-18-4，其分子式为C20H11N5O，相对分子质量为337.33，是一种蛋白酶抑制剂。其药理功能目前还未见报道，且至今也未见任何关于DUBs-IN-1抗MD或任何抑制MDV病毒复制的报道。其结构式如下：DUBs-IN-2，CAS号是924296-19-5，分子式是C15H9N5O，分子量是275.26，是DUBs-IN-1的一种衍生物，是一种蛋白酶抑制剂。其药理功能目前还未见报道，且至今也未见任何关于DUBs-IN-2抗MD或任何抑制MDV病毒复制的报道。其结构式如下：DUBs-IN-3，CAS号是924296-17-3，分子式是C16H9N5O，分子量是287.28，是DUBs-IN-1的一种衍生物，是一种蛋白酶抑制剂。其药理功能目前还未见报道，且至今也未见任何关于DUBs-IN-3抗MD或任何抑制MDV病毒复制的报道。其结构式如下：
技术实现思路
本专利技术为了抗鸡MD的发生，抑制MDV在鸡细胞内的复制，提高MD疫苗防御效果，扼制MDV毒力的增强，提供了一种DUBs-IN-1及其衍生物作为抑制MDV复制和抗鸡MD药物的新用途，基于MDV编码的去泛素化酶UL36活性抑制系统，以及细胞接种病毒和马立克氏病动物模型，筛选出DUBs-IN-1及其衍生物在安全浓度下能有效地抑制MDV的复制、攻毒实验动物模型肿瘤的产生。本专利技术提供了一种抑制MDV复制的药物，包括去泛素化酶UL36抑制剂。UL36是疱疹病毒编码的N端具有去泛素化酶结构域的大被膜蛋白。经过本专利技术的研究，确定去泛素化酶UL36抑制剂能够在细胞水平抑制MDV复制，并且对鸡的细胞没有毒副作用。然而由于动物体内复杂的体内环境，细胞水平的数据无法指导实际的生产需要，本专利技术对去泛素化酶UL36抑制剂在动物水平(即活体鸡)的作用进行的进一步的研究，并确定了去泛素化酶抑制剂在鸡体内安全有效的使用剂量。优选的是，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-1及其衍生物。本专利技术对5000余个蛋白酶抑制剂进行高通量筛选，初步缩小范围后，进一步筛选抑制去泛素化酶UL36活性的化合物。幸运的发现，DUBs-IN-1及其衍生物具有抑制去泛素化酶UL36的作用，DUBs-IN-1及其衍生物，均具有抗MD和MDV活性，优选的DUBs-IN-1的衍生物为DUBs-IN-2、DUBs-IN-3。DUBs-IN-1、DUBs-IN-2、DUBs-IN-3作为一种蛋白酶抑制剂，目前只知道DUBs-IN-1可USP7和USP8，影响细胞内哪种信号通路未见报道。经过本专利技术的研究表明，针对细胞和鸡体的安全浓度范围内，DUBs-IN-1特异性的抑制去泛素化酶UL36的活性，而对鸡细胞本身的信号通路和蛋白无显著抑制作用。本专利技术对DUBs-IN-2、DUBs-IN-3的研究也得到了一致的结果。上述任一项优选的是，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-1、DUBs-IN-2或DUBs-IN-3的至少一种，所述DUBs-IN-1、DUBs-IN-2或DUBs-IN-3抑制细胞内MDV的复制。通过向感染MDV的鸡细胞的培养体系中添加DUBs-IN-1、DUBs-IN-2或DUBs-IN-3，MDV复制受到显著抑制。DUBs-IN-1、DUBs-IN-2或DUBs-IN-3是在感染了MDV的CEF细胞(鸡胚成纤维细胞)或者DF-1细胞(鸡胚成纤维细胞系)水平上抑制病毒的复制。上述任一项优选的是，所述去泛素化酶UL36抑制剂细胞水平作用浓度为0.01～300μM。所述细胞水平优选的细胞为CEF细胞或DF-1细胞。进一步优选的浓度为0.01～110μM，0.01～0.3μM，0.01μM、0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.4μM、1.2μM、5.3μM、10.2μM、20.3μM、30.1μM、40.6μM、50.6μM、60.1μM、70.2μM、80.1μM、90.2μM、100μM、131μM、152μM、192μM、241μM、280μM、292μM、300μM。优选的，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-1，DUBs-IN-1细胞水平的作用浓度为0.01～0.3μM。所述细胞水平优选的细胞为CEF细胞或DF-1细胞。0.01μM的DUBs-IN-1在CEF细胞水平抑制MDV的复制，优选的，0.02μM、0.05μM、0.07μM、0.1μM、0.13μM、0.17μM、0.19μM、0.21μM、0.24μM、0.27μM、0.3μM均有效抑制感染MDV的细胞内MDV的复制，同时对细胞本身没有毒副作用。DUBs-IN-1的浓度大于10nM时可显著减少病毒的复制。当浓度达到20nM时，基本上可以完全抑制病毒在细胞内的复制和对细胞的感染，并且在此浓度范围药物对细胞没有造成显著伤害。优选的，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-2，DUBs-IN-2细胞水平的作用浓度为0.01～110μM，所述细胞水平优选的细胞为CEF细胞或DF-1细胞。进一步优选的DUBs-IN-2细胞水平的作用浓度为0.01μM、0.2μM、0.4μM、1.2μM、5.3μM、10.2μ本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制马立克氏病病毒复制的药物，包括去泛素化酶UL36抑制剂。/n
【技术特征摘要】
1.一种抑制马立克氏病病毒复制的药物，包括去泛素化酶UL36抑制剂。
2.如权利要求1所述的抑制马立克氏病病毒复制的药物，其特征在于，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-1及其衍生物。
3.如权利要求2所述的抑制马立克氏病病毒复制的药物，其特征在于，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-1、DUBs-IN-2或DUBs-IN-3的至少一种，所述DUBs-IN-1、DUBs-IN-2或DUBs-IN-3抑制鸡细胞内马立克氏病病毒的复制。
4.如权利要求3所述的抑制马立克氏病病毒复制的药物，其特征在于，所述去泛素化酶UL36抑制剂细胞水平的作用浓度为0.01～300μM。
5.如权利要求1-4任一项抑制马立克氏病病毒复制的药物，其特征在于，所述马立克氏病病毒为血清I型马立克氏病病毒，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-1时细胞水平的作用浓度为0.01～0.3μM，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-2时细胞水平的作用浓度为0.01～110μM，所述去泛素化酶UL36抑制剂为DUBs-IN-3时细胞水平的作用浓度为0.01～300μM。
6.一种预防或抗马立克氏病药物，包括权利要求1-5任一项所述的抑制马立克氏病病毒复制的药物。
7.如权利要求6所述的预防或抗马立克氏病药物，其特征在于，所述去泛素化酶UL36抑制剂包括DUBs-IN-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：艾永兴，李占军，许家翠，徐媛媛，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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