一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢炎症中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢炎症中的应用，本发明专利技术通过实验证明了SRT1720对Graves’病甲亢患者炎症具有较好的缓解和治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢炎症中的应用
本专利技术属于SRT1720用途领域，特别涉及一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢炎症中的应用。
技术介绍
格雷夫斯病(Graves’disease，GD)是在非缺碘地区引起甲状腺功能亢进最常见的原因，该病患者会产生针对甲状腺的自身免疫反应，包括淋巴细胞浸润以及产生特异性甲状腺球蛋白，甲状腺过氧化物酶和促甲状腺激素受体(TSHR)的自身抗体。除了受遗传和环境因素影响外，免疫紊乱也参与了Graves’病甲亢的发展。已有观点提出抗原提呈细胞，自身反应性T细胞和甲状腺滤泡细胞间的相互作用引起了针对甲状腺自身抗原的免疫反应。尽管针对自身抗原的抗体产生打破了免疫耐受和机体适应性免疫系统的紊乱都已经被揭示，但Graves’病甲亢发生的根本机制目前仍不明确。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢患者炎症中的应用。所述SRT1720的化学结构式为所述SRT1720以药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂使用。所述选自片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。有益效果本专利技术对SRT1720发掘了新的医疗用途；本专利技术中SRT1720可治疗Graves’病甲亢患者外周血单个核细胞中的炎症，具有显著的效果。附图说明图1为SRT1720减轻了Graves’病甲亢患者外周血单个核细胞中的炎症反应图；其中(A)荧光素酶报告基因检测NF-κB启动子活性，(B-K)外周血单个核细胞加入SRT1720(2μM)-SIRT1激动剂24小时，(B)WesternBlotting检测P65乙酰化水平，(C)外周血单个核细胞P65免疫荧光染色P65(红色)细胞核(蓝色)，(D-G)在最后孵育的5小时，外周血单个核细胞内加入脂多糖(50ng/mL),荧光定量PCR检测TNF-α(D)，IL-6(E)，IL-8(F)和MCP1(G)mRNA表达水平，(H-K)使用ELISA法定量细胞上清内的TNF-α(H)，IL-6(I)，IL-8(J)和MCP1(K)蛋白水平。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1采用SRT1720处理外周血单个核细胞，然后进行测试：1、使用DMSO溶解SRT1720，使用移液器混匀，注意力度轻柔,随后使用Millipore一次性针头滤器0.22μm过滤溶解有SRT1720的DMSO和用于做对照的DMSO。2、外周血单个核细胞按照1*106/ml密度接种于12孔板，使用不含血清的培养基培养外周血单个核细胞12小时，加入配置好的SRT1720，调整SRT1720终浓度为2μM。荧光素酶酶活性检测：1、在24孔板内按照约50％的密度提前一天将细胞接种，每孔加入不含抗生素培液400ul，该培液含有10％的FBS；2、用50ulOpti-MEM稀释质粒NF-κΒ(0.4ug/孔)，Sv40质粒(0.01ug/孔)，注意混匀是力度要轻柔，准备另外一个EP管，按照每孔50μlOpti-MEM和1ulLipofectamine2000的量混匀液体，超净台内孵育5min；3、步骤2中的2种培液使用移液器混匀，注意力度轻柔，超净台内孵育20min，在孵育的时候，在24孔板内按照400ul每孔的量加入培液，20分钟后，每孔加入100ul混合液，同时使用DMSO溶解的SRT1720和对照DMSO，SRT1720终浓度为2μM，加入轻柔前后摇晃细胞培养板，放入37℃细胞培养箱；24h后收集转染了质粒的细胞，用于荧光素酶活性检测，参照Promega公司的双荧光素酶说明书步骤说明进行检测。免疫荧光染色具体为：1、取出未使用过的载玻片，按照说明书将甩片装置放置于细胞甩片仪内应放位置。2、将SRT1720处理外周血单个核细胞和DMSO处理的外周血单个核细胞，调整细胞数目至106/ml混匀后，用移液器吸取100ul加入至甩片仪上；3、25℃，离心机速度设定为800rpm，以这样的速度离心5min,离心过程中采用“低速”模式参与加速和减速过程；4、结束后，在干燥通风处晾干载玻片。5、提前在4℃冰箱内放入4％多聚甲醛，用组化笔圈出步骤4中晾干的载玻片上细胞所在位置，孵育15min。6、清洗三次载玻片，使用PBS清洗，室温环境下每次5min，摇床轻摇。7、浸入0.2％PBST内10min,室温摇床轻摇。8、PBS洗一次，5min，室温摇床轻摇。9、用抗体稀释液封闭截面1小时。10、用抗体稀释液按相应比例稀释后的一抗(SIRT11:100)在4℃中孵育过夜。11、4℃取出，放于室温复温30min。12、PBS洗三次，每次10min，室温摇床轻摇。13、加入驴抗兔荧光二抗(PBS中1:500稀释)，室温下湿盒孵育1小时。14、PBS洗三次，每次10分钟，室温摇床轻摇。15、加入含DAPI的防淬灭封片剂封片。16、共聚焦显微镜拍照。荧光实时定量PCR荧光实时定量PCR反应系统：反应选用试剂体积(μl)SYBRPremixExTaqTM(2×)5cDNA模板2上游引物(10μM)0.5不含RNA酶的水2下游引物(10μM)0.5条件：第一步：95℃10s第二步：设定温度95℃，时间5s，设定温度60℃时间31s，重复40个循环最后一步：测定解离曲线。结果：荧光素酶报告基因实验结果证实，SRT1720处理过的HEK-293细胞NF-κΒ转录活性降低(图1A)。同时，蛋白印迹分析证实了SRT1720处理的Graves’病甲亢患者外周血单个核细胞乙酰化p65蛋白水平降低(图1B)，免疫荧光实验结果表明加入SRT1720后，p65从细胞核进入细胞质中，提示NF-κΒ通路活性降低(图1C)。而且，SRT1720处理导致NF-κΒ靶向的促炎基因：无论脂多糖添加与否,TNF-α(图1D)，IL-6(图1E)，IL-8(图1F)和MCP1(图1G)的mRNA表达水平降低。此外，用SRT1720处理外周血单个核细胞后，Graves’病甲亢患者体外培养的单个核细胞上清中的TNF-α(图1H)，IL-6(图1I)，IL-8(图1J)和MCP1(图1K)蛋白水平显著降低。综上所述，本专利技术的结果表明SRT1720激活SIRT1活性有利于缓解Graves’病甲亢患者炎症反应。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢炎症中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种SRT1720在制备治疗Graves’病甲亢炎症中的应用。


2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述SRT1720的化学结构式为





3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁光，王曙，周瑜琳，叶蕾，沈力韵，尹庆磊，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，上海市内分泌代谢病研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31