一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法，所述测定方法为：取白术药材，用70％甲醇提取，采用乙腈‑0.1％磷酸水系统进行梯度洗脱，测定白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量。该方法是在泽泻汤检测方法的基础上，通过优化流动相比例梯度、检测波长、提取溶剂、提取方式、提取时间以及色谱柱的系列的研究，结果显示出峰时间快、峰形好，分离度、峰纯度均合格，且准确度高，稳定性好，操作简便快捷，完善了白术药材的质量检测方法，使质量得到更好的控制。

【技术实现步骤摘要】
一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法。
技术介绍
白术是菊科多年生的草本植物白术的根茎，是中医临床极常用的补益中药，有“南术北参”之美称，最早记载在《山海经》、《尔雅》这些古籍里。白术性温，味甘、微辛带苦，入脾经和胃经，临床上主要用于补脾气，功能是健脾益气、燥湿利水、止汗安胎，用于脾虚食少、腹胀泄泻、痰饮、眩悸、自汗、胎动不安等症。近十几年来研究表明白术在利尿、抗肿瘤、抗菌、抗炎、治疗糖尿病、抗衰老等方面都有一些作用，对神经系统、消化道、子宫平滑肌也有一定的作用，还能够调节免疫功能。白术在健脾益气、调节盲肠运动的功能方面，可以促进空肠的平滑肌的收缩运动，同时对盲肠的自律性收缩活动有显著的抑制作用。白术对免疫系统的作用主要是抗炎、抗肿瘤、抗氧化。白术能有效的抑制肿瘤细胞的生长，其中白术内酯和挥发油是有效的抗肿瘤的活性成分。白术的抗氧化作用，能有效抑制脂质的过氧化作用，降低组织脂质过氧化物的含量，避免有害物质对组织细胞结构和功能的进一步的破坏。临床上常用的炮制品主要是生白术和炒白术，用于健脾是以炒白术为主，根据症状不同，还可以选用麸炒白术和土炒白术。白术具有较强的临床应用价值，市场需求广阔，但《中国药典》2015年版白术药材没有收载含量测定项，并不能全面地评价白术质量。目前文献研究报道的关于白术中白术内酯含量多采用HPLC法，采用梯度洗脱程序进行分离，梯度洗脱就是将两种或两种以上不同极性但可以互溶的溶剂，随着时间改变使按一定比例混合，以连续改变冲洗液的极性，使复杂组分得到良好的分离，但该梯度洗脱程序结果存在的以下技术问题：出峰时间长、分离度差、峰形不好，重现性差，稳定性差、溶剂消耗较大、精确度低等。申请号CN201910299616.6，专利技术名称为白术药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法，公开了以绿原酸为对照品制备对照品参照物溶液；以白术对照药材制备对照药材参照物溶液；分别取白术药材、白术饮片、麸炒白术饮片、白术标准汤剂和麸炒白术标准汤剂，加入提取溶剂提取，滤过，取续滤液分别作为供试品溶液；以流动相A为乙腈，流动相B为0.05-0.15％磷酸溶液，进行梯度洗脱：0-4min，流动相A的体积分数由1％上升到6％，流动相B的体积分数由99％降低至94％；4-10min，流动相A的体积分数由6％上升到9％，流动相B的体积分数由94％降低至91％；10-16min，流动相A的体积分数由9％上升到18％，流动相B的体积分数由91％降低至82％；16-22min，流动相A的体积分数由18％上升到20％，流动相B的体积分数由82％降低至80％；22-23min，流动相A的体积分数由20％上升到90％，流动相B的体积分数由80％降低至10％。以柱温为(25±3)℃；流速为(0.25±0.1)ml/min；检测波长为(325±40)nm，进行测定。申请号CN201910299616.6存在的技术问题：是针对白术饮片、麸炒白术饮片、白术标准汤剂和麸炒白术标准汤剂的特征图谱进行研究，未针对白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ含量测定作分析，且该方法出峰时间长，峰形不好，分离度差、稳定性差。申请号CN201910725324.4，专利技术名称为一种检测白术药材中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的UPLC方法，公开了将白术粉碎后置于三角瓶中，加入甲醇后放置于超声波仪中进行超声、离心，最后过滤；将标准白术样品溶液注入超高效液相色谱仪中，以色谱柱：BEHC18柱(2.1μm×100mm，1.7mm)；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；紫外检测波长：221nm；流动相：乙腈和水，其中乙腈和水的体积比为54:46进行测定，通过得到的标准白术样品的UPLC特征图谱和待测白术样品的UPLC特征图谱对制备得到的待测白术样品进行定量。申请号CN201910725324.4存在的技术问题：本申请针对白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的检测，未对白术内酯Ⅱ进行分析，且该方法目标峰分离度不好，重现性差、精确度低。申请号CN202010678723.2，专利技术名称为白术中有效成分白术内酯Ⅲ、Ⅰ含量测定方法，公开了取白术粉末加乙酸乙酯浸泡；抽滤后蒸干，加甲醇溶解；用滤膜滤过，取续滤液即得；精密称取白术内酯Ⅲ、Ⅰ对照品；加甲醇制成每1ml中含0.1mg的溶液，即得；精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪测定；以色谱柱：C18柱(150mm×4.6)；柱温：35℃；流动相：甲醇和水，甲醇和水的比例为72：28；流速：1.0ml/min；检测波长：220nm；进样量：10μL记录色谱图，以外标法计算白术内酯Ⅲ、Ⅰ的含量。申请号CN202010678723.2存在的技术问题：本申请针对白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的检测，未对白术内酯Ⅱ进行分析，且该方法操作复杂，色谱峰分离不好，出峰时间慢，稳定性差、溶剂消耗较大、精确度低。针对以上问题，专利技术人参照本公司产品泽泻汤中白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量的检测方法，通过优化流动相梯度、检测波长、提取溶剂、提取方式、提取时间以及色谱柱的系列的研究，得到了一种检测白术药材白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量的检测方法，该方法峰形好，分离度和峰纯度均合格，且精确性高，出峰时间短，操作简单，完善了白术药材的质量检测方法，使质量得到更好的控制。
技术实现思路
本专利技术提供一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法，所述含量测定方法为：(1)供试品溶液的制备：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-70％甲醇50ml，称定重量，超声或回流处理，放冷，再称定重量，用30-70％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心2-8min，滤过，取续滤液，即得；(2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅱ对照品、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加70％甲醇分别制成每1ml含白术内酯Ⅱ10ug、白术内酯Ⅲ10ug的溶液，即得；(3)色谱条件与系统适用性试验：以色谱柱为CORTECSUPLCT31.6um；柱温为39-41℃；以乙腈为流动相A,以0.09-0.11％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；检测波长为210-230nm；流速为0.34-0.36ml/min，理论板数按白术内酯Ⅲ峰计算应不低于4500；所述梯度洗脱具体为：0-1min，流动相A为44％，流动相B为56％；1-2min，流动相A为44→36％，流动相B为56→64％；2-3.5min，流动相A为36％，流动相B为64％；3.5-4.0min，流动相A为36→43％，流动相B为64→57％；4-8min，流动相A为43％，流动相B为57％；8-9min，流动相A为43→90％，流动相B为57→10％；9-12min，流动相A为90％，流动相B为10％；12-13min，流动相A为90→44％，流动相B为10→56％；13-16min，流动相A为44％，流动相B为56％；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法为：/n(1)供试品溶液的制备：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-70％甲醇50ml，称定重量，超声或回流处理，放冷，再称定重量，用30-70％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心2-8min，滤过，取续滤液，即得；/n(2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅱ对照品、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加70％甲醇分别制成每1ml含白术内酯Ⅱ10ug、白术内酯Ⅲ10ug的溶液，即得；/n(3)色谱条件与系统适用性试验：以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.6um；柱温为39-41℃；以乙腈为流动相A,以0.09-0.11％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；检测波长为210-230nm；流速为0.34-0.36ml/min，理论板数按白术内酯Ⅲ峰计算应不低于4500；所述梯度洗脱具体为：0-1min，流动相A为44％，流动相B为56％；1-2min，流动相A为44→36％，流动相B为56→64％；2-3.5min，流动相A为36％，流动相B为64％；3.5-4.0min，流动相A为36→43％，流动相B为64→57％；4-8min，流动相A为43％，流动相B为57％；8-9min，流动相A为43→90％，流动相B为57→10％；9-12min，流动相A为90％，流动相B为10％；12-13min，流动相A为90→44％，流动相B为10→56％；13-16min，流动相A为44％，流动相B为56％；/n(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。/n...

【技术特征摘要】
1.一种用于白术药材中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法为：
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30-70％甲醇50ml，称定重量，超声或回流处理，放冷，再称定重量，用30-70％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心2-8min，滤过，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅱ对照品、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加70％甲醇分别制成每1ml含白术内酯Ⅱ10ug、白术内酯Ⅲ10ug的溶液，即得；
(3)色谱条件与系统适用性试验：以色谱柱为CORTECSUPLCT31.6um；柱温为39-41℃；以乙腈为流动相A,以0.09-0.11％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；检测波长为210-230nm；流速为0.34-0.36ml/min，理论板数按白术内酯Ⅲ峰计算应不低于4500；所述梯度洗脱具体为：0-1min，流动相A为44％，流动相B为56％；1-2min，流动相A为44→36％，流动相B为56→64％；2-3.5min，流动相A为36％，流动相B为64％；3.5-4.0min，流动相A为36→43％，流动相B为64→57％；4-8min，流动相A为43％，流动相B为57％；8-9min，流动相A为43→90％，流动相B为57→10％；9-12min，流动相A为90％，流动相B为10％；12-13min，流动相A为90→44％，流动相B为10→56％；13-16min，流动相A为44％，流动相B为56％；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。


2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法为：
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声或回流处理，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5min，滤过，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅱ对照品、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加70％甲醇分别制成每1ml含白术内酯Ⅱ10ug、白术内酯Ⅲ10ug的溶液，即得；
(3)色谱条件与系统适用性试验：以色谱柱为CORTECSUPLCT31.6um；柱温为40℃；以乙腈为流动相A,以0.1％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；检测波长为220nm；流速为0.35ml/min，理论板数按白术内酯Ⅲ峰计算应不低于4500；所述梯度洗脱具体为：0-1min，流动相A为44％，流动相B为56％；1-2min，流动相A为44→36％，流动相B为56→64％；2-3.5min，流动相A为36％，流动相B为64％；3.5-4.0min，流动相A为36→43％，流动相B为64→57％；4-8min，流动相A为43％，流动相B为57％；8-9min，流动相A为43→90％，流动相B为57→10％；9-12min，流动相A为90％，流动相B为10...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭静，张学花，邢会香，王飞，刘红，余梅，王周霞，曹得辉，杨恋，
申请(专利权)人：青海普兰特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：青海;63