一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用技术

本发明专利技术涉及一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用，利用超高效液相色谱法，以多个对照品作为参照峰，以乙腈‑磷酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱，通过对色谱条件进行系统化合理控制，能够同时认定19个共有峰，构成了泽泻汤药物特征图谱的全貌，经过指认的共有峰有7个，使泽泻汤药物的质量控制从原来针对两个成分的含量测定或少数几个共有峰的检测上升到针对整个泽泻汤药物内在品质的把控，能够比较全面地反映泽泻汤药物的特征，避免了只检测单一或少数几个共有峰而带来的方法缺陷，为泽泻汤药物的内在质量控制提供了新的分析手段，并达到控制原药材白术、泽泻的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用
本专利技术属于药物分析
，涉及一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用。
技术介绍
泽泻汤，经典名方，出自《金匮要略》卷中。具有利水除饮，健脾制水之功效。主治饮停心下，头目眩晕，胸中痞满，咳逆水肿。方中泽泻甘淡，利水渗湿，使水湿从小便而出，为君药。白术甘苦，健脾益气，利水消肿，助脾运化水湿，为臣药。两药相须为用，重在利水，兼健脾以制水，为治脾虚水饮内停之良方。2018年4月，国家中医药管理局发布的《(第一批)古代经典名方目录》，泽泻汤作为首批100个经典名方之一。为了有效地发挥泽泻汤经典名方的临床治疗作用，对于目前中药复方制剂的质量控制来说，能够做到对于处方中的每一味药物都有一个含量测定成分，是一种比较高的质量标准。CN201910065029-泽泻汤标准煎液的质量检测方法和质量评价方法，公开了运用液相色谱检测白术内酯Ⅲ和23-乙酰泽泻醇B的含量；CN201611121475-一种检测泽泻汤标准颗粒中白术内酯Ⅲ和23-乙酰泽泻醇B含量的方法，公开了泽泻汤标准颗粒中白术内酯Ⅲ和23-乙酰泽泻醇B含量的方法。刘协和，[J].中国药学杂志,1978,V13(1):0-0.主要化学成分是三萜类化合物泽泻醇(Alisol)类,包括泽泻醇A、24-乙酰基泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰基泽泻醇B、23-乙酰基泽泻醇C；于玲玲.白术化学成分及质量标准研究[D].辽宁中医药大学,2010.术中分离纯化出六个单体化合物:1)白术内酯Ⅰ(atractylenolideⅠ),2)白术内酯Ⅱ(atractylenolideⅡ),3)白术内酯Ⅲ(atractylenolideⅢ),4)蒲公英萜醇乙酸酯(taracetate),5)β-谷甾醇(β-sitosterol),6)豆甾醇(stigmasterol)。目前对泽泻汤的质量检测都限于白术内酯III和23-乙酰泽泻醇B的含量，但针对泽泻汤含有多种的化学成分，只检测两种含量是不能够更好地控制产品的质量，为了确保泽泻汤的质量，专利技术人通过了大量的实验研究，对色谱条件进行系统化合理控制，能够同时认定19个共有峰，构成了泽泻汤药物特征图谱的全貌，使泽泻汤质量控制从原来针对两个成分的含量测定或少数几个共有峰的检测上升到针对整个泽泻汤药物内在品质的把控，能够比较全面地反映泽泻汤特征，避免了只检测单一或少数几个共有峰而带来的方法缺陷，为泽泻汤内在质量控制提供了新的分析手段，并达到控制原药材白术、泽泻的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用。本专利技术所述泽泻汤药物由泽泻、白术组成，取泽泻、白术加水煎煮即得，所述UPLC特征图谱的检测方法包括下列步骤：1)供试品溶液的制备：取相当于泽泻饮片0.8～1.2g的泽泻汤，精密称定，置于50ml容量瓶中，加60～80％甲醇至接近刻度，超声处理5～15分钟，冷却，定容至刻度，摇匀，离心3～7分钟，取上清液用0.22um的有机膜过滤，取滤液，即得；2)对照品溶液的制备：精密称取适量23-乙酰泽泻醇B、环氧泽泻烯、泽泻醇A、泽泻醇B对照品，分别用乙腈溶解制成每1ml含0.01～0.03mg23-乙酰泽泻醇B、0.10～0.20mg环氧泽泻烯、0.03～0.07mg泽泻醇A、0.20～0.30mg泽泻醇B对照品溶液；精密称取适量白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、23-乙酰泽泻醇C对照品，分别用甲醇溶解制成每1ml含0.8～1.2mg白术内酯Ⅱ、0.03～0.08mg白术内酯Ⅲ、0.008～0.013mg23-乙酰泽泻醇C对照品溶液；3)色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3MVK，色谱柱规格：100mm×2.1mm,1.8μm；流动相：以乙腈为流动相A，流动相B为0.05-0.15％磷酸水，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0～4min，45％A，55％B；4～6min，45％～60％A,55％～40％B；6～10min，60％～70％A,40％～30％B；10～13min，70％～85％A,30％～15％B；13～18min，85％～90％A,15％～10％B；18～19min，90％～45％A,10％～55％B；19～24min，45％A,55％B；柱温：38～42℃，检测波长：205～215nm，流速：0.35ml/min。(4)测定法：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液8～12ul注入超高效液相色谱仪中测定，标定共有峰，即得所述泽泻汤药物UPLC特征图谱。优选的，1)供试品溶液的制备：取相当于泽泻饮片0.9～1.1g的泽泻汤，精密称定，置于50ml容量瓶中，加65～74％甲醇至接近刻度，超声处理8～13分钟，冷却，定容至刻度，摇匀，离心4～6分钟，取上清液用0.22um的有机膜过滤，取滤液，即得；2)对照品溶液的制备：精密称取适量23-乙酰泽泻醇B、环氧泽泻烯、泽泻醇A、泽泻醇B对照品，分别用乙腈溶解制成每1ml含0.015～0.025mg23-乙酰泽泻醇B、0.13～0.18mg环氧泽泻烯、0.035～0.065mg泽泻醇A、0.23～0.28mg泽泻醇B对照品溶液；精密称取适量白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、23-乙酰泽泻醇C对照品，分别用甲醇溶解制成每1ml含0.85～1.15mg白术内酯Ⅱ、0.04～0.07mg白术内酯Ⅲ、0.009～0.012mg23-乙酰泽泻醇C对照品溶液；3)色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3MVK，色谱柱规格：100mm×2.1mm,1.8μm；流动相：以乙腈为流动相A，流动相B为0.07-0.13％磷酸水，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0～4min，45％A，55％B；4～6min，45％～60％A,55％～40％B；6～10min，60％～70％A,40％～30％B；10～13min，70％～85％A,30％～15％B；13～18min，85％～90％A,15％～10％B；18～19min，90％～45％A,10％～55％B；19～24min，45％A,55％B；柱温：39～41℃，检测波长：206～210nm，流速：0.35ml/min。(4)测定法：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液9～11ul注入超高效液相色谱仪中测定，标定共有峰，即得所述泽泻汤药物UPLC特征图谱。进一步优选的，1)供试品溶液的制备：取相当于泽泻饮片1.0g的泽泻汤，精密称定，置于50ml容量瓶中，加70％甲醇至接近刻度，超声处理10分钟，冷却，定容至刻度，摇匀，离心5分钟，取上清液用0.22um的有机膜过滤，取滤液，即得；2)对照品溶液的制备：精密称取适量23-乙酰泽泻醇B、环氧泽泻烯、泽泻醇A、泽泻醇B对照品，分别用乙腈溶解制成每1ml含0.02mg23-乙酰泽泻醇B、0.16mg环氧泽泻烯、0.05mg泽泻醇A、0.25mg泽泻醇B对照品溶液；精密称取适量白术内酯Ⅱ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法，该药物由泽泻、白术组成，取泽泻、白术加水煎煮即得，其特征在于检测方法步骤为：/n1)供试品溶液的制备：取相当于泽泻饮片0.8～1.2g的泽泻汤，精密称定，置于50ml容量瓶中，加60～80％甲醇至接近刻度，超声处理5～15分钟，冷却，定容至刻度，摇匀，离心3～7分钟，取上清液用0.22um的有机膜过滤，取滤液，即得；/n2)对照品溶液的制备：精密称取适量23-乙酰泽泻醇B、环氧泽泻烯、泽泻醇A、泽泻醇B对照品，分别用乙腈溶解制成每1ml含0.01～0.03mg23-乙酰泽泻醇B、0.10～0.20mg环氧泽泻烯、0.03～0.07mg泽泻醇A、0.20～0.30mg泽泻醇B对照品溶液；精密称取适量白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、23-乙酰泽泻醇C对照品，分别用甲醇溶解制成每1ml含0.8～1.2mg白术内酯Ⅱ、0.03～0.08mg白术内酯Ⅲ、0.008～0.013mg23-乙酰泽泻醇C对照品溶液；/n3)色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3 MVK，色谱柱规格：100mm×2.1mm,1.8μm；流动相：以乙腈为流动相A，流动相B为0.05-0.15％磷酸水，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0～4min，45％A，55％B；4～6min，45％～60％A,55％～40％B；6～10min，60％～70％A,40％～30％B；10～13min，70％～85％A,30％～15％B；13～18min，85％～90％A,15％～10％B；18～19min，90％～45％A,10％～55％B；19～24min，45％A,55％B；柱温：38～42℃，检测波长：205～215nm，流速：0.35ml/min；/n(4)测定法：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液8～12ul注入超高效液相色谱仪中测定，标定共有峰，即得所述泽泻汤药物UPLC特征图谱。/n...

【技术特征摘要】
1.一种泽泻汤UPLC特征图谱的检测方法，该药物由泽泻、白术组成，取泽泻、白术加水煎煮即得，其特征在于检测方法步骤为：
1)供试品溶液的制备：取相当于泽泻饮片0.8～1.2g的泽泻汤，精密称定，置于50ml容量瓶中，加60～80％甲醇至接近刻度，超声处理5～15分钟，冷却，定容至刻度，摇匀，离心3～7分钟，取上清液用0.22um的有机膜过滤，取滤液，即得；
2)对照品溶液的制备：精密称取适量23-乙酰泽泻醇B、环氧泽泻烯、泽泻醇A、泽泻醇B对照品，分别用乙腈溶解制成每1ml含0.01～0.03mg23-乙酰泽泻醇B、0.10～0.20mg环氧泽泻烯、0.03～0.07mg泽泻醇A、0.20～0.30mg泽泻醇B对照品溶液；精密称取适量白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、23-乙酰泽泻醇C对照品，分别用甲醇溶解制成每1ml含0.8～1.2mg白术内酯Ⅱ、0.03～0.08mg白术内酯Ⅲ、0.008～0.013mg23-乙酰泽泻醇C对照品溶液；
3)色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3MVK，色谱柱规格：100mm×2.1mm,1.8μm；流动相：以乙腈为流动相A，流动相B为0.05-0.15％磷酸水，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0～4min，45％A，55％B；4～6min，45％～60％A,55％～40％B；6～10min，60％～70％A,40％～30％B；10～13min，70％～85％A,30％～15％B；13～18min，85％～90％A,15％～10％B；18～19min，90％～45％A,10％～55％B；19～24min，45％A,55％B；柱温：38～42℃，检测波长：205～215nm，流速：0.35ml/min；
(4)测定法：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液8～12ul注入超高效液相色谱仪中测定，标定共有峰，即得所述泽泻汤药物UPLC特征图谱。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于检测方法步骤为：
1)供试品溶液的制备：取相当于泽泻饮片0.9～1.1g的泽泻汤，精密称定，置于50ml容量瓶中，加65～74％甲醇至接近刻度，超声处理8～13分钟，冷却，定容至刻度，摇匀，离心4～6分钟，取上清液用0.22um的有机膜过滤，取滤液，即得；
2)对照品溶液的制备：精密称取适量23-乙酰泽泻醇B、环氧泽泻烯、泽泻醇A、泽泻醇B对照品，分别用乙腈溶解制成每1ml含0.015～0.025mg23-乙酰泽泻醇B、0.13～0.18mg环氧泽泻烯、0.035～0.065mg泽泻醇A、0.23～0.28mg泽泻醇B对照品溶液；精密称取适量白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、23-乙酰泽泻醇C对照品，分别用甲醇溶解制成每1ml含0.85～1.15mg白术内酯Ⅱ、0.04～0.07mg白术内酯Ⅲ、0.009～0.012mg23-乙酰泽泻醇C对照品溶液；
3)色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3MVK，色谱柱规格：100mm×2.1mm,1.8μm；流动相：以乙腈为流动相A，流动相B为0.07-0.13％磷酸水，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0～4min，45％A，55％B；4～6min，45％～60％A,55％～40％B；6～10min，60％～70％A,40％～30％B；10～13min，70％～85％A,30％～15％B；13～18min，85％～90％A,15％～10％B；18～19min，90％～45％A,10％～55％B；19～24min，45％A,55％B；柱温：39～41℃，检测波长：206～210nm，流速：0.35ml/min；
(4)测定法：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液9～11ul注入超高效液相色谱仪中测定，标定共有峰，即得所述泽泻汤药物UPLC特征图谱。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于检测方法步骤为：
1)供试品...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭静，张学花，邢会香，郭海君，刘红，石慧慧，王飞，陈钟，李生萍，肖秋霞，
申请(专利权)人：青海普兰特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：青海;63