本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体涉及一种靶向IL‑16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用。本发明专利技术所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；所述sgRNA1包括sgRNA1‑S和sgRNA1‑A；所述sgRNA2包括sgRNA2‑S和sgRNA2‑A。本发明专利技术提供的靶向IL‑16基因的sgRNA不仅能够稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL‑16基因，而且可用于制备抑制肿瘤增殖的药物。
【技术实现步骤摘要】
一种靶向IL-16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种靶向IL-16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用。
技术介绍
IL-16也被称为淋巴细胞趋化因子。目前，尚未发现与其同家族的其它细胞因子，在不同物种间，其具有高度保守性。人的IL-16基因全长153kbp，位于人类基因位于15q26.3染色体上。IL-16前体蛋白其含有631个氨基酸，分子量为80kDa。一旦被激活，储存在细胞中的前体IL-16就会被caspase-3分子切割，含有N末端结构域的部分形成分子量为60kDa的非分泌型蛋白；含有C末端结构域的部分形成分子量为20kDa分泌型蛋白。在淋巴细胞中，含有N末端结构域的分子可以和转录因子结合，进而影响细胞周期。而成熟的含有C末端结构域的IL-16可以从细胞中分泌，和相应的配体结合。IL-16表达水平在各种疾病的发病机制中起着重要的作用，如骨质疏松症、肾细胞癌、阿尔茨海默病、炎症性肠病等。但现有技术中还未有关于稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL-16基因对其影响的报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种靶向IL-16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用。本专利技术提供的靶向IL-16基因的sgRNA能够稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL-16基因，从而使得白血病肿瘤细胞停滞于G0期，进而影响肿瘤细胞的增殖。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供一种靶向IL-16基因的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；所述sgRNA1包括sgRNA1-S和sgRNA1-A；所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述sgRNA2包括sgRNA2-S和sgRNA2-A；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。本专利技术还提供一种用于敲除IL-16基因的质粒组，所述质粒组包括sgRNA1质粒组或sgRNA2质粒组；所述sgRNA1质粒组包括sgRNA1-S质粒和sgRNA1-A质粒；所述sgRNA1-S质粒包括上述方案所述的sgRNA1-S和px330质粒；所述sgRNA1-A质粒包括上述方案所述的sgRNA1-A和px330质粒；所述sgRNA2质粒组包括sgRNA2-S质粒和sgRNA2-A质粒；所述sgRNA2-S质粒包括上述方案所述的sgRNA2-S和px330质粒；所述sgRNA2-A质粒包括上述方案所述的sgRNA2-A和px330质粒。优选的，所述px330质粒包括经BbsⅠ酶后的px330大片段质粒。优选的，所述sgRNA1-S、sgRNA1-A、sgRNA2-S或sgRNA2-A与px330质粒的摩尔比独立为10:1。优选的，所述sgRNA1-S和sgRNA1-A的摩尔比为1:1；所述sgRNA2-S和sgRNA2-A的摩尔比为1:1。本专利技术还提供一种利用CRISPR/Cas9系统敲除肿瘤细胞中IL-16基因的方法，包括以下步骤：将上述方案所述质粒组导入肿瘤细胞中，得到敲除IL-16基因的肿瘤细胞。优选的，所述肿瘤细胞包括白血病肿瘤细胞；所述白血病包括急性髓系白血病、急性淋系白血病和慢性髓系白血病。本专利技术提供一种利用上述方案所述方法构建得到的IL-16基因敲除的白血病细胞系。本专利技术还提供了上述方案所述sgRNA或上述方案所述的质粒组在制备抑制肿瘤增殖药物中的应用。本专利技术还提供了上述方案所述sgRNA或上述方案所述的质粒组在制备治疗白血病药物中的应用；所述白血病包括急性髓系白血病、急性淋系白血病和慢性髓系白血病。本专利技术提供了一种靶向IL-16基因的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；所述sgRNA1包括sgRNA1-S和sgRNA1-A；所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述sgRNA2包括sgRNA2-S和sgRNA2-A；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。本专利技术提供的靶向IL-16基因的sgRNA能够稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL-16基因，从而使得白血病肿瘤细胞停滞于G0期，进而影响肿瘤细胞的增殖。附图说明图1为应用例2中不同质粒组对于IL-16基因的敲除效果图；图2为应用例5中敲除IL-16基因对急性髓系白血病细胞系的影响图；图3为应用例5中敲除IL-16基因对慢性髓系白血病细胞系的影响图；图4为应用例5中敲除IL-16基因对急性淋系白血病细胞系的影响图；图5为应用例5中敲除IL-16基因对急性髓系白血病细胞系细胞周期的影响图；图6为应用例5中敲除IL-16基因对慢性髓系白血病细胞系细胞周期的影响图；图7为应用例5中敲除IL-16基因对急性淋系白血病细胞系细胞周期的影响图；图8为应用例6中接种敲除IL-16基因的急性髓系白血病细胞对小鼠存活时间的影响图；图9为应用例6中接种敲除IL-16基因的慢性髓系白血病细胞对小鼠存活时间的影响图；图10为应用例6中接种敲除IL-16基因的急性淋系白血病细胞对小鼠存活时间的影响图。具体实施方式如无特殊要求，本专利技术所用试剂均为本领域技术人员常规购买所得。本专利技术提供了一种靶向IL-16基因的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；所述sgRNA1包括sgRNA1-S和sgRNA1-A；所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述sgRNA2包括sgRNA2-S和sgRNA2-A；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。本专利技术根据IL-16基因(GeneID是NCBIGeneID:3603)序列特点设计sgRNA1和sgRNA2，用于IL-16基因的敲除。在本专利技术中，所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，具体如下：CACCGCAGCTGGCAGACACATCGG；所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，具体如下：AAACCCGATGTGTCTGCCAGCTGC；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，具体如下：CACCGCTGCTCAACTCCAAGCAGC；所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，具体如下AAACGCTGCTTGGAGTTGAGCAGC；所述核苷酸序列SEQIDNo.1～4中下本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向IL-16基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；/n所述sgRNA1包括sgRNA1-S和sgRNA1-A；所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；/n所述sgRNA2包括sgRNA2-S和sgRNA2-A；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种靶向IL-16基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；
所述sgRNA1包括sgRNA1-S和sgRNA1-A；所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；
所述sgRNA2包括sgRNA2-S和sgRNA2-A；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。
2.一种用于敲除IL-16基因的质粒组，其特征在于，所述质粒组包括sgRNA1质粒组或sgRNA2质粒组；
所述sgRNA1质粒组包括sgRNA1-S质粒和sgRNA1-A质粒；所述sgRNA1-S质粒包括权利要求1所述的sgRNA1-S和px330质粒；所述sgRNA1-A质粒包括权利要求1所述的sgRNA1-A和px330质粒；
所述sgRNA2质粒组包括sgRNA2-S质粒和sgRNA2-A质粒；所述sgRNA2-S质粒包括权利要求1所述的sgRNA2-S和px330质粒；所述sgRNA2-A质粒包括权利要求1所述的sgRNA2-A和px330质粒。
3.根据权利要求2所述的质粒组，其特征在于，所述px330质粒包括经BbsⅠ酶后的...
【专利技术属性】
技术研发人员：王一，郭梅，蔡博，莫丹，胡锴勋，黄雅静，刘志青，刘铁强，黄珊，李冰霞，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第五医学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。