用cpSSR分子标记法对山药种质资源真实性进行鉴别的方法技术

本发明专利技术公开了一种用cpSSR分子标记法对山药种质资源真实性进行鉴别的方法。本发明专利技术公开的一种用于辅助鉴定山药种质资源真实性的引物组，由SY69、SY104、SY108、SY158、SY161、SY196、SY216、SY280、SY302、SY326中的至少两种引物对组成。本发明专利技术SY161，SY326构建64份供试种质资源的指纹图谱，使得山药种质资源真实性的鉴定简便、快捷、重复性和稳定性好，为cpSSR分子标记技术更广泛地用于山药种质资源真实性鉴定打下良好的基础。

【技术实现步骤摘要】
用cpSSR分子标记法对山药种质资源真实性进行鉴别的方法
本专利技术属于生物
，具体的说，本专利技术涉及用cpSSR分子标记法对山药种质资源真实性进行鉴别的方法。
技术介绍
山药(DioscoreaoppositeacThunb)，是百合目(Liliales)薯蓣科(Dioscoreaceace)薯蓣属(Dioscorea)一年生或多年生缠绕性藤本植物，药食两用。我国山药种质资源在长期种植过程中，由于生态环境的变化、人工选择、历史变迁，品种资源丰富，如铁棍山药，佛手山药，日本小叶山药，嘉祥细长毛山药等。山药种质资源复杂多样，地区间引种，真假山药无法有效鉴定，分类鉴定难度大。山药也是临床配方常用中药，它的主要功能是：益气养阴，补脾肺肾，山药的混伪品大量存现于市场，而且混伪品加工作伪手段越来越高明。山药的真实性和纯度是衡量山药质量的重要指标，直接影响山药的产量和品质。生产上如何快速、准确鉴定山药真实性是一个突出的问题。传统的形态鉴定法依赖于品种表型差异，而形态性状的表现受环境影响较大，稳定性差，误鉴率较高。分子标记技术具有丰富的多态性和环境稳定性，且操作简便，已开始广泛应用于作物品种鉴定与纯度检测中。叶绿体微卫星(chloroplastSSR,cpSSR)，是一种新型高效的微卫星子标记技术结合了SSR和cpDNA的优点，重复性好，多态性高，显性遗传，分布广泛且进化缓慢、结构简单，分子量小，单亲保守遗传，cpSSR标记已被广泛应用于遗传多样性研究。在山药中，应用cpSSR分子标记分析山药种质资源遗传多样性已有报道，但应用cpSSR分子标记技术进行山药品种真实性鉴定的方法尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种简便、快捷、重复性和稳定性好的对山药种质资源真实性进行鉴别的方法。本专利技术提供一种获取DNA山药指纹图的引物组合物，所述引物组合物由引物对SY161和引物对SY326，其中，引物对SY161由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成；引物对SY326由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的两条单链DNA组成本专利技术还提供一种获取山药DNA指纹图谱的成套引物对，由述的引物组合物和下述引物对中的至少一种组成：A1)由SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的两条单链DNA组成的名称为SY69的引物对；A2)由SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的两条单链DNA组成的名称为SY104的引物对；A3)由SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示的两条单链DNA组成的名称为SY108的引物对；A4)由SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示的两条单链DNA组成的名称为SY158的引物对；A5)由SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示的两条单链DNA组成的名称为SY196的引物对；A6)由SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示的两条单链DNA组成的名称为SY216的引物对；A7)由SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示的两条单链DNA组成的名称为SY280的引物对；A8)由SEQIDNo.19和SEQIDNo.20所示的两条单链DNA组成的名称为SY302的引物对。本专利技术提供一种获取山药DNA指纹图谱的产品，所述产品含有所述的获取山药DNA指纹图谱的引物组合物或所述的获取山药DNA指纹图谱的成套引物对。上述产品可为试剂或试剂盒，还可为由试剂或试剂盒与仪器组成的系统，如由上述获取山药DNA指纹图谱的引物对、上述获取山药DNA指纹图谱的成套引物对A或上述获取山药DNA指纹图谱的成套引物对B和下述至少一种试剂和/或仪器组成的系统：进行PCR扩增所需的其它试剂、进行凝胶电泳所需的试剂、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统和照相机。本专利技术还提供一种制备所述的获取山药DNA指纹图谱的成套引物对的方法，包括将任一所述引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。本专利技术还提供一种获取山药DNA指纹图谱的方法，包括：1)以山药的基因组DNA为模板，用所述的获取山药DNA指纹图谱的引物组合物或所述的获取山药DNA指纹图谱的成套引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；2)将1)中得到的所述PCR扩增产物进行电泳，得到所述山药的DNA指纹图谱。上述方法中的PCR扩增体系为：dNTPs(10mmol/L)2.0μL，10×buffer(Mg2+)2.5μL，正向引物1.0μL，反向引物1.0μL，基因组DNA(50～60ng/μL)1.0μL，Easy-TaqDNAPolymerase0.5μL，最后加水至25μL；PCR扩增程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，52-55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min，4℃保存。利用上述的方法得到的山药DNA指纹图谱也应在本专利技术的保护范围之内。所述的获取山药DNA指纹图谱的引物组合物或2所述的获取山药DNA指纹图谱的成套引物对在获取山药DNA指纹图谱中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。所述的获取山药DNA指纹图谱的产品在获取山药DNA指纹图谱中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。所述的山药DNA指纹图谱在分析山药种质资源中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。本专利技术利用cpSSR分子标记成功构建了山药种质资源单一引物的指纹图谱表，使得山药种质资源真实性的鉴定简便、快捷、重复性和稳定性好，为cpSSR分子标记技术更广泛地用于山药种质资源真实性鉴定打下良好的基础。附图说明图1为引物SY161对64个山药种质资源的扩增产物电泳图。图2为引物SY326对64个山药种质资源的扩增产物电泳图。图3为山药种质资源的UPGMA聚类图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。EasyTaqDNAPolymerase购自北京全式金生物技术有限公司。64种山药种质资源，公众可从湖北省农业科学院粮食作物研究所获得。铁棍山药、太谷山药在文献“腊贵晓，理向阳，郭红霞，等.2017.铁棍山药和太谷山药代谢成分差异研究.河南农业科学,46(5),116-119.”中公开过，公众可从湖北省农科院粮食作物研究所获得。高阳小白嘴、日本青森、神农山4号、怀山药在文献“张文芳.2018.基于怀山药转录组测序的SSR分子标记的开发与应用.河南师范大学”中公开过，公众可从湖北省农科院粮食作物研究所获得。沁阳野山药、山西永济山药、村太谷山药、沁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种获取DNA山药指纹图的引物组合物，所述引物组合物由引物对SY161和引物对SY326，其中，引物对SY161由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成；引物对SY326由SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的两条单链DNA组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种获取DNA山药指纹图的引物组合物，所述引物组合物由引物对SY161和引物对SY326，其中，引物对SY161由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成；引物对SY326由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的两条单链DNA组成。


2.获取山药DNA指纹图谱的成套引物对，由权利要求1所述的引物组合物和下述引物对中的至少一种组成：
A1)由SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的两条单链DNA组成的名称为SY69的引物对；
A2)由SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的两条单链DNA组成的名称为SY104的引物对；
A3)由SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示的两条单链DNA组成的名称为SY108的引物对；
A4)由SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示的两条单链DNA组成的名称为SY158的引物对；
A5)由SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示的两条单链DNA组成的名称为SY196的引物对；
A6)由SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示的两条单链DNA组成的名称为SY216的引物对；
A7)由SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示的两条单链DNA组成的名称为SY280的引物对；
A8)由SEQIDNo.19和...

【专利技术属性】
技术研发人员：王连军，杨新笋，张静珍，柴沙沙，雷剑，宋峥，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院粮食作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42