葡萄糖神经酰胺合成酶基因缺失T细胞的用途和其治疗应用制造技术

本发明专利技术提供一种免疫检查点分子的表达被抑制的活化T细胞，以及提供该T细胞的制备方法和能够用于制备该T细胞的物质的筛选方法。具体而言，本发明专利技术的解决方式是制作或诱导免疫检查点分子的表达不会被诱导的T细胞的方法，该方法包括使T细胞的葡萄糖神经酰胺合成酶(UGCG)或神经节苷脂的功能降低或丧失；以及通过该方法制作或诱导的T细胞。过该方法制作或诱导的T细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】葡萄糖神经酰胺合成酶基因缺失T细胞的用途和其治疗应用


[0001]本专利技术涉及一种葡萄糖神经酰胺合成酶的功能降低或丧失的T细胞的用途等。

技术介绍

[0002]目前，作为癌症的治疗，除手术等外科治疗、使用抗癌剂的药物疗法、放射线治疗以外，还进行了利用免疫检查点抑制剂等的免疫治疗等。其中，利用免疫检查点抑制剂的治疗通过阻碍免疫检查点分子与其配体的结合来抑制免疫抑制信号传递，解除T细胞的活化抑制的治疗法是近年来受到关注的治疗法之一。
[0003]迄今为止鉴定出了各种免疫检查点分子，作为其代表性的分子，报告有CTLA
‑
4(cytotoxic T
‑
lymphocyte associated antigen
‑
4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原
‑
4))、PD
‑
1(programmed cell death
‑
1(程序性死亡受体
‑
1)/CD279)等。T细胞的活化通过介由T细胞受体(T
‑
cell receptor：TCR)的抗原刺激和T细胞上的CD28与抗原提呈细胞上的B7(CD80/CD86)的结合而被诱导。但是，与B7的亲和性比CD28高的CTLA
‑
4已在活化的T细胞上表达，由于B7与其结合而阻断介由CD28的信号，T细胞的活化被抑制(非专利文献1)。另外，已知PD
‑
1已在活化T细胞中表达，如果结合作为其配体的PD
‑
L1和PD
‑
L2等，则活化被抑制。PD
‑
L1/PD
‑
L2已在癌细胞中表达，由于它们与活化T细胞结合而抑制T细胞的活化(非专利文献1)。
[0004]如此，癌细胞介由T细胞的失活而避免受到免疫系统的攻击。但是，已知使用血中半衰期长的抗体的免疫检查点的阻碍有可能产生与肿瘤细胞以外的自身抗原反应的T细胞，产生肺炎、胰腺炎等严重的副作用。因此，目前，将特异性识别肿瘤细胞的T细胞活化的方法正受到关注。作为该利用活化的T淋巴细胞的治疗法，有CAT(CD3 Activated T Lymphocyte，CD3活化T淋巴细胞)疗法和CAR
‑
T(chimeric antigen receptor T cell，嵌合抗原受体T细胞)疗法等。该治疗法是通过利用各种方法使自身的CD3活化T淋巴细胞在生物体外增殖并将其放回至体内，从而提高对癌细胞的攻击性的方法。认为不仅T淋巴细胞，活化T细胞作为癌细胞的攻击方式也是有效的。然而，已知这些方法也会在生物体内因PD
‑
1等产生的免疫检查点机制而受到抑制。因此，寻求特异性识别肿瘤细胞且对免疫检查点的敏感性低的T细胞的制作法。
[0005]作为膜构成分子之一的鞘糖脂(glycosphingolipids：GSLs)由脂质和糖链部分构成，局部存在于细胞膜的脂筏，在包括介由T细胞受体(T
‑
cell receptor：TCR)信号的T细胞的活化等的各种细胞过程中发挥重要的作用(非专利文献2)。因此，认为通过阐明鞘糖脂在T细胞的活化中的功能，能够确立与上述的免疫检查点抑制剂疗法或CAT疗法类似或不同的新的癌症免疫疗法。迄今为止，报告有作为葡萄糖神经酰胺合成酶(UDP
‑
glucose ceramide glucosyltransferase(尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶)：UGCG)抑制剂的1
‑
苯基
‑2‑
十六烷酰基氨基
‑3‑
吗啉代
‑1‑
丙醇(PPMP)针对神经母细胞瘤细胞株和来自急性淋巴性白血病的ALL细胞株，协同地增强维甲酰酚胺(4
‑
hydroxyphenylretinamide(4
‑
羟基苯基维甲酰胺)：4
‑
HPR)所具有的细胞毒性(专利文献1)。
[0006]然而，当前，T细胞参与的癌症免疫与鞘糖脂的关联性尚有许多不明之处。
[0007]现有技术文献
[0008]专利文献
[0009]专利文献1：WO2005/049827公报
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：Pardoll,Nat Rev Cancer 12:252
‑
264 2012
[0012]非专利文献2：Nagafuku等人，Proc Natl Acad Sci USA.109(6):E336
‑
42.doi:10.1073/pnas.1114965109.2012

技术实现思路

[0013]鉴于上述情况，本专利技术的解决问题在于提供一种免疫检查点分子的表达被抑制的活化T细胞，以及提供该T细胞的制备方法和能够用于制备该T细胞的物质的筛选方法。
[0014]专利技术人等着眼于作为鞘脂的前体的葡萄糖神经酰胺，将肿瘤移植至由神经酰胺合成葡萄糖神经酰胺的葡萄糖神经酰胺合成酶(UGCG)特异性缺失T细胞的小鼠(T细胞特异性UGCG基因缺失小鼠)，关于对肿瘤增殖的影响和来自该小鼠的UGCG基因缺失T细胞的性质进行了研究。
[0015]其结果阐明，在移植了肿瘤的T细胞特异性UGCG基因缺失小鼠中，肿瘤生长延迟，存活时间延长，在来自肿瘤移植后的T细胞特异性UGCG基因缺失小鼠的脾脏中，CD3
+
/CD8
+
T细胞的比率显著增加。此外，如果将来自野生型小鼠脾脏的T细胞离体(ex vivo)活化，则作为免疫检查点分子之一的PD
‑
1的表达量因对刺激的负反馈而增加，但即使将来自T细胞特异性UGCG基因缺失小鼠脾脏的T细胞离体活化，也观察不到PD
‑
1的表达量的增加。
[0016]应予说明，UGCG是位于神经节苷脂(在鞘糖脂的糖链部分包含唾液酸的物质)类合成路径的最上游的合成酶，缺失UGCG的T细胞成为不具有所有神经节苷脂类的T细胞(图1)。例如，认为GM3的合成抑制剂等阻碍个别神经节苷脂类的合成，但UGCG由于位于最上游，因此，能够有效地阻碍所有神经节苷脂类的生物合成，可期待通过阻碍神经节苷脂类的生物合成而表达的各种生理活性的最大化。
[0017]本专利技术是基于以上见解而完成的。
[0018]即，本专利技术是以下的(1)～(13)。
[0019](1)一种方法，是制作或诱导免疫检查点分子的表达不会被诱导的T细胞的方法，包括使T细胞的葡萄糖神经酰胺合成酶(UGCG)或神经节苷脂的功能降低或丧失。
[0020](2)根据上述(1)所述的方法，其特征在于，上述免疫检查点分子为PD
‑
1、TIM3(T
‑
cell Immunoglobulin and Mucin domain 3，T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3)或CTL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种方法，是制作或诱导免疫检查点分子的表达不会被诱导的T细胞的方法，包括使T细胞的葡萄糖神经酰胺合成酶(UGCG)或神经节苷脂的功能降低或丧失。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫检查点分子为PD
‑
1即程序性死亡受体
‑
1、TIM3即T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3、或CTLA4即细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述使UGCG的功能降低或丧失的方法是使UGCG基因的表达降低或丧失。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述使UGCG的功能降低或丧失的方法是利用葡萄糖神经酰胺合成酶抑制剂进行处理。5.一种T细胞，是UGCG的功能降低或丧失的T细胞，因活化所导致的免疫检查点分子的表达增加不会被诱导。6.一种免疫检查点抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：山下匡，永根大干，池田辉雄，宫武昌一郎，冈本真理子，
申请(专利权)人：泰来有限公司，
类型：发明
国别省市：