溶瘤病毒及其应用制造技术

本申请实施例公开了一种溶瘤病毒及其应用。所述溶瘤病毒含有重组核酸，所述重组核酸可以包括：(i)编码可溶性PD‑1分子的第一核酸片段；(ii)编码VAR2CSA蛋白的第二核酸片段；以及(iii)编码CD3分子的抗体的第三核酸片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】溶瘤病毒及其应用
本申请涉及生物
，特别涉及含有重组核酸的溶瘤病毒及其应用。
技术介绍
目前，以溶瘤病毒为代表的病毒类药物在治疗肿瘤中发挥着越来越大的作用。溶瘤病毒指的是一类能够有效感染并消灭癌细胞的病毒。溶瘤病毒可以在癌细胞内进行复制和增殖，释放出新的感染性病毒颗粒感染和破坏其他癌细胞，或者表达对癌细胞具有效应的蛋白以影响肿瘤微环境、刺激宿主产生抗肿瘤免疫反应或者直接溶解肿瘤。由于溶瘤病毒的特性，这种疗法既可以系统施用，也可以局部施用，对原发和转移性肿瘤进行治疗。当癌细胞在溶瘤病毒的感染下破裂死亡时，新生成的病毒颗粒会被释放，进一步感染周围的癌细胞。溶瘤病毒不仅能对肿瘤进行直接杀伤，还有望刺激人体的免疫反应，增强抗肿瘤效果。除了单独使用，溶瘤病毒还可以与其他抗癌药物联合施用，此外，还可以将溶瘤病毒与有利于治疗癌症的外源基因进行重组。这样，一方面能够发挥溶瘤蛋白的溶瘤效果，另一方面可以发挥其他药物的抗癌作用。因此，为了实现针对癌症的更好的治疗效果，一直以来对含有重组核酸的溶瘤病毒都是有需求的。
技术实现思路
根据本申请的一方面，提供了一种含有重组核酸的溶瘤病毒。所述重组核酸可以包括：(i)编码可溶性PD-1分子的第一核酸片段；(ii)编码VAR2CSA蛋白的第二核酸片段；以及(iii)编码CD3分子的抗体的第三核酸片段。在一些实施例中，所述第一核酸片段与SEQIDNO:1所示的序列的相似度可以大于或等于90％。在一些实施例中，所述第二核酸片段与SEQIDNO:2所示的序列的相似度可以大于或等于90％。在一些实施例中，所述第三核酸片段与SEQIDNO:3所示的序列的相似度可以大于或等于90％。在一些实施例中，所述重组核酸还可以包括(iv)编码US11蛋白的第四核酸片段。在一些实施例中，所述第四核酸片段与SEQIDNO:4所示的序列的相似度可以大于或等于90％。在一些实施例中，所述溶瘤病毒可以为单纯疱疹病毒属。在一些实施例中，所述溶瘤病毒可以是HSV-1病毒，并且所述重组核酸与SEQIDNO:5所示的序列的相似度可以大于或等于80％。在一些实施例中，所述重组序列还可以包括以下核酸片段中的至少一种：编码细胞因子的核酸片段、编码共刺激分子的核酸片段、编码抗血管生成因子的核酸片段和编码基质金属蛋白酶的核酸片段。根据本申请的另一方面，提供了一种含有重组核酸的溶瘤病毒。所述重组核酸可以包括：(i)编码可溶性PD-1分子的第一核酸片段；(ii)编码VAR2CSA蛋白的第二核酸片段；(iii)编码CD3分子的抗体的第三核酸片段；以及(iv)编码US11蛋白的第四核酸片段。在一些实施例中，所述溶瘤病毒可以是HSV-1或HSV-2病毒，且所述第四核酸片段可以包括插入到所述重组核酸中的外源核酸片段。在一些实施例中，所述溶瘤病毒可以是HSV-1病毒，并且所述重组核酸与SEQIDNO:5所示的序列的相似度可以大于或等于80％。在一些实施例中，所述溶瘤病毒在培养环境中以感染复数1作用于人非小细胞肺癌细胞、人肝癌细胞、人乳腺癌细胞或人胰腺癌细胞时，能够在48小时之内分别对应导致至少40％、80％、40％、50％的癌细胞死亡。在一些实施例中，所述溶瘤病毒在培养环境中以感染复数0.1作用于人肝癌细胞、人乳腺癌细胞、或人胰腺癌细胞时，能够在48小时之内分别对应导致约80％、40％、30％的癌细胞死亡。在一些实施例中，将所述溶瘤病毒以2x106pfu用量1次注射或1x106pfu用量3次注射施用于人胰腺癌肿瘤时，能够在32天之内分别对应导致至少70％或80％的肿瘤体积减少。在一些实施例中，将所述溶瘤病毒以2x106pfu用量3次注射或4x106pfu用量3次注射施用于人非小细胞肺癌肿瘤时，能够在32天之内分别对应导致至少70％或90％的肿瘤体积减少。根据本申请的另一方面，提供了一种用于治疗癌症的组合物。所述组合物可以包括上述任一项所述的溶瘤病毒和药理上可接受的载体或赋形剂。在一些实施例中，所述癌症可以是黑色素瘤、肺癌、白血病、胃癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、宫颈癌或骨肉瘤。在一些实施例中，所述癌症可以是肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌。根据本申请的另一方面，提供了一种用于治疗胰腺癌的组合物。所述组合物可以包括上述任一项所述的溶瘤病毒和药理上可接受的载体或赋形剂。根据本申请的另一方面，提供了一种上述溶瘤病毒在制备用于治疗癌症的药物中的应用。在一些实施例中，所述癌症可以是黑色素瘤、肺癌、白血病、胃癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、宫颈癌或骨肉瘤。在一些实施例中，所述癌症可以是肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌。根据本申请的另一方面，提供了一种溶瘤病毒在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用。根据本申请的再一方面，提供了一种用于治疗癌症的方法。所述方法可以包括：向患有癌症的对象施用有效剂量的上述组合物。在一些实施例中，所述癌症可以是黑色素瘤、肺癌、白血病、胃癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、宫颈癌或骨肉瘤。在一些实施例中，所述癌症可以是肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌。在一些实施例中，所述对象可以是哺乳动物。在一些实施例中，所述有效剂量的组合物中含有的所述溶瘤病毒的量与所述对象的体重的比值的范围可以是2.5×104pfu/g-5×105pfu/g。在一些实施例中，所述有效剂量的组合物中含有的所述溶瘤病毒的量与所述对象的体重的比值的范围可以是2.5×104pfu/g-5×106pfu/g。在一些实施例中，所述向患有癌症的对象施用有效剂量的组合物可以包括通过注射方式向所述对象施用所述组合物。在一些实施例中，所述通过注射方式向所述对象施用所述组合物可以包括向所述对象的肿瘤内或肿瘤附近的部位注射所述组合物。附图说明本申请将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，其中：图1是根据本申请一些实施例所示的构建的重组溶瘤病毒的载体质粒的示意图；图2是根据本申请一些实施例所示的经重组溶瘤病毒转染的人非小细胞肺癌细胞A549染色后的示意图；图3是根据本申请一些实施例所示的经重组溶瘤病毒转染的人肝癌细胞HepG2染色后的示意图；图4是根据本申请一些实施例所示的经重组溶瘤病毒转染的人乳腺癌细胞MCF-7染色后的示意图；图5是根据本申请一些实施例所示的经重组溶瘤病毒转染的人胰腺癌细胞SW1990染色后的示意图；图6是根据本申请一些实施例所示的经重组溶瘤病毒转染的人非小细胞肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MCF-7和人胰腺癌细胞SW1990的细胞存活率的示意图；图7是根据本申请一些实施例所示的用重组溶瘤病毒处理免疫缺陷的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有重组核酸的溶瘤病毒，其特征在于，所述重组核酸包括:/n(i)编码可溶性PD-1分子的第一核酸片段；/n(ii)编码VAR2CSA蛋白的第二核酸片段；以及/n(iii)编码CD3分子的抗体的第三核酸片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种含有重组核酸的溶瘤病毒，其特征在于，所述重组核酸包括:
(i)编码可溶性PD-1分子的第一核酸片段；
(ii)编码VAR2CSA蛋白的第二核酸片段；以及
(iii)编码CD3分子的抗体的第三核酸片段。


2.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述第一核酸片段与SEQIDNO:1所示的序列的相似度大于或等于90％。


3.如权利要求1或2所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述第二核酸片段与SEQIDNO:2所示的序列的相似度大于或等于90％。


4.如权利要求1-3中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述第三核酸片段与SEQIDNO:3所示的序列的相似度大于或等于90％。


5.如权利要求1-4中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述重组核酸还包括：
(iv)编码US11蛋白的第四核酸片段。


6.如权利要求5所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述第四核酸片段与SEQIDNO:4所示的序列的相似度大于或等于90％。


7.如权利要求1-6中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒为单纯疱疹病毒属。


8.如权利要求7所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒是HSV-1病毒，并且所述重组核酸与SEQIDNO:5所示的序列的相似度大于或等于80％。


9.如权利要求1-7中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述重组序列还包括以下核酸片段中的至少一种：编码细胞因子的核酸片段、编码共刺激分子的核酸片段、编码抗血管生成因子的核酸片段和编码基质金属蛋白酶的核酸片段。


10.一种含有重组核酸的溶瘤病毒，其特征在于，所述重组核酸包括:
(i)编码可溶性PD-1分子的第一核酸片段；
(ii)编码VAR2CSA蛋白的第二核酸片段；
(iii)编码CD3分子的抗体的第三核酸片段；以及
(iv)编码US11蛋白的第四核酸片段。


11.如权利要求10所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒是HSV-1或HSV-2病毒，且所述第四核酸片段包括插入到所述重组核酸中的外源核酸片段。


12.如权利要求10或11所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒是HSV-1病毒，并且所述重组核酸与SEQIDNO:5所示的序列的相似度大于或等于80％。


13.如权利要求1-12中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒在培养环境中以感染复数1作用于人非小细胞肺癌细胞、人肝癌细胞、人乳腺癌细胞或人胰腺癌细胞时，能够在48小时之内分别对应导致至少40％、80％、40％、50％的癌细胞死亡。


14.如权利要求1-12中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒在培养环境中以感染复数0.1作用于人肝癌细胞、人乳腺癌细胞、或人胰腺癌细胞时，能够在48小时之内分别对应导致约80％、40％、30％的癌细胞死亡。


15.如权利要求1-12中任一条所述的溶瘤病毒，其特征在于，将所述溶瘤病毒以2x106pfu用量1次注射或...

【专利技术属性】
技术研发人员：巩子英，张道允，孙永华，王毅，
申请(专利权)人：上海允英医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31