一种消除核酸残留的方法技术

本发明专利技术涉及耗材再生技术领域，特别涉及一种消除核酸残留的方法，所述消除核酸残留的方法，包括如下步骤：将耗材依次用核酸祛除溶液浸泡、乙醇浸泡、纯水超声处理和紫外光照射。本发明专利技术提供的消除核酸残留的方法，能够清除耗材上的核酸残留，清洗效率高、清洗效果好，能实现耗材的循环利用，极大程度的节约了成本。极大程度的节约了成本。

【技术实现步骤摘要】
一种消除核酸残留的方法


[0001]本专利技术涉及耗材再生
，特别涉及一种消除核酸残留的方法，特别用于消除核酸用实验耗材上核酸残留的方法。

技术介绍

[0002]聚合酶链式反应(polymerase chain reacton，PCR)是一种模拟天然DNA复制的核酸扩增技术，在体外选择性的扩增DNA片段，即进行基因复制或称基因克隆。PCR能通过体外扩增将目的基因片段百万倍的放大，具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。目前，这项已广泛应用于分子生物学的各个领域。
[0003]然而，PCR测定的高敏感度意味着，在PCR的操作过程中，环境和实验室极其轻微的核酸污染就有可能引起扩增产物的大量扩增，从而导致扩增结果的假阳性。常见的核酸污染包括：扩增产物的污染、提取核酸的污染、阳性对照的污染、外来核酸的污染等。外来核酸污染可能是来源于环境，可以游离形式存在，或者包含在活细胞如微生物、病毒或原生动物中；可能是“遗留污染”，其中先前测定的PCR产物污染后续的PCR测定，污染物可由技术人员、一起甚至经气雾剂传播。为了避免外来核酸污染，一般通过各种方法对环境和仪器进行处理，而核酸实验过程中使用的耗材则直接丢弃。核酸试验中的实验耗材一般价格都比较昂贵，例如，Covaris microTUBE核酸剪切管，其是专门设计生产用于Covaris超声波剪切仪处理少量核酸样本，microTUBE
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50特别针对更低DNA即需要50到55μL样本量的方案进行了优化，优化后的特点是：准确，可调和无偏向的片段DNA、从低样本量回收高DNA、等温，高度可控，可重复的DNA剪切过程。但是microTUBE
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50剪切管的价格昂贵，片段化一个DNA样本的成本就近百元，因此，对于实验样本较多的研究来讲，仅实验耗材就是非常大的一笔消耗。对于核酸用实验耗材采用常规水洗等方法并不能去除之前使用时残余样本的核酸污染，无法实现实验耗材的重复利用。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，提供了一种消除核酸残留的方法，能够去除核酸容器的核酸残留，实现实验耗材的重复利用，极大程度节约了成本。
[0005]本专利技术的技术方案如下文所示。
[0006]本专利技术一方面提供了一种消除核酸残留的方法，包括如下步骤：
[0007]将耗材依次用核酸祛除溶液浸泡、乙醇浸泡、纯水超声处理和紫外光照射；其中，所述核酸祛除溶液可以选自次氯酸钠溶液、过氧化氢溶液、pH<4的酸溶液或pH>10的碱溶液中的至少一种，优选次氯酸钠溶液。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述核酸祛除溶液为次氯酸钠溶液；优选地，所述次氯酸钠溶液中有效氯含量大于等于2.5％。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述核酸祛除溶液浸泡的时间为15～30min。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述乙醇的体积百分含量为70～80％。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述乙醇浸泡的时间为5～15min。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述纯水超声处理的温度为30～50℃。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述纯水超声处理的时间为20～40min。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述纯水超声处理的次数为1～3次。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述纯水超声处理的超声频率为300～500W；优选为400W。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述紫外光照射的波长为200～280nm，优选为254nm。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述紫外光照射的时间为30～60min。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，在用所述核酸祛除溶液浸泡的步骤后，还包括用纯水浸泡5～15min的步骤。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，在用所述乙醇浸泡的步骤后，还包括用纯水浸泡5～15min的步骤。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，每次浸泡后，都需要使所述耗材干燥。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，使所述耗材干燥的方法可以是烘干、晾干或擦干；优选地，每次浸泡后，都需要将所述耗材用棉签擦干。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，消除核酸残留的方法，包括如下步骤：
[0023]S1.核酸祛除溶液浸泡：耗材用核酸祛除溶液浸泡15～30min；浸泡结束后，滤掉浸泡液，擦拭耗材；再用超纯水清洗2～3次，清洗结束后，再次加入超纯水，浸泡5～15min；超纯水浸泡结束后，滤掉超纯水，再将耗材擦拭干净；
[0024]S2.乙醇浸泡：耗材继续用乙醇浸泡5～15min；浸泡结束后，再用超纯水清洗2～3次，再加入超纯水浸泡5～15min，滤掉超纯水，再将耗材擦拭干净；
[0025]S3.纯水超声处理：将耗材浸泡到超纯水中，30～50℃，超声20～40min；更换超纯水，重复1～3次；
[0026]S4.紫外光照射：将耗材用紫外光照射30min～60min。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述耗材，如核酸扩增反应容器、核酸保存容器、核酸处理容器等，优选为核酸剪切管。
[0028]本专利技术另一个方面还提供了上述消除核酸残留的方法在耗材循环利用方面的应用。
[0029]本专利技术中，“耗材”用来表示在操作过程中可能涉及到核酸的任何容器或器材，例如，PCR管、恒温金属浴的金属模块、microTUBE
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50剪切管；耗材可以由不同材料制成。所述耗材更具体地在需要进行核酸扩增或核酸处理的操作的情况下使用。
[0030]在本专利技术中，“核酸残留”是指必须在使用耗材进行核酸分析前被除去的核酸分子。核酸残留可以是任何种类的核酸分子，包括例如单或双链的RNA或DNA、引物、探针、扩增子、基因组DNA、重组DNA等。
[0031]在本专利技术中，“消除核酸残留”意为在处理之后，在所述耗材中检测不到核酸污染。在本专利技术的一个实施方式中，使用了所述耗材后，进行扩增反应时，检测不到核酸污染。不意在受具体机制的限制，消除核酸残留可包括降解核酸以及将核酸分子或片段或衍生物物
理转移出所述耗材。当核酸不能在核酸反应中发挥引物、探针或模板作用时，则所述核酸是失活的。
[0032]本专利技术中，“纯水”是只不含杂质的水，还可以是超纯水、双蒸水、无核酸酶水。
[0033]本专利技术人为了实现核酸试验中耗材的重复利用，以microTUBE
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50剪切管为例，进行了消除耗材表面核酸残留的研究，在研究过程中发现，单一的处理方式，比如仅使用纯水超声处理、核酸祛除溶液浸泡、紫外照射等方法，或简单的组合，比如先使用纯水超声处理，再进行核酸去除溶液浸泡和紫外照射等方法，在PCR扩增后，样本(经过处理重复使用的剪切管中的样本)的变异情况与新管中样本的变异情况存在一定的差异。由于次本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种消除核酸残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：将耗材依次用核酸祛除溶液浸泡、乙醇浸泡、纯水超声处理和紫外光照射；其中，所述核酸祛除溶液选自次氯酸钠溶液、过氧化氢溶液、pH<4的酸溶液或pH>10的碱溶液中的至少一种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸祛除溶液为次氯酸钠溶液；优选地，所述次氯酸钠溶液中有效氯含量大于等于2.5％。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸祛除溶液浸泡的时间为15～30min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙醇的体积百分含量为70～80％；优选地，所述乙醇浸泡的时间为5～15min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纯水超声处理的温度为30～50℃；优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄文静，朱碧银，赵鑫，卜中鑫，王晓锋，王益民，
申请(专利权)人：人和未来生物科技长沙有限公司，
类型：发明
国别省市：