一种乳腺癌类器官专用培养基及3D培养方法技术

本发明专利技术提供一种乳腺癌类器官专用培养基及3D培养方法，该培养基包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括GSK429286A；Doramapimod；A83‑01；EGF；β‑estradiol；Cholera Toxin；FGF2；HEPES；B27；GlutaMAX；ITS；Gentamicin；Neuregulin‑1；BSA。培养方法包括：将分离的乳腺癌组织进行预处理后消化并过滤，得到细胞沉淀；将细胞沉淀裂解，然后与matrigel胶混匀并接种，待混合胶凝固后加入上述培养基，并于37℃、5％CO

【技术实现步骤摘要】
一种乳腺癌类器官专用培养基及3D培养方法
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种乳腺癌类器官专用培养基及3D培养方法。
技术介绍
乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，也是导致女性癌症患者死亡的第二大手。近年来，随着我国经济的发展和人们生活方式的改变，我国乳腺癌的发病率逐年升高，并且患者呈现低龄化趋势。目前，学者们主要使用传统的肿瘤细胞株模型(CCL)和患者来源的肿瘤异种移植模型(PDTX)来研究乳腺癌的发生发展情况。虽然两种模型为乳腺癌的研究做出了巨大贡献，但均存在一定的局限性，如CCL模型可能会出现交污染、基因型会发生改变以及很难永久性增殖等，PDTX模型的瘤移植成功率低、建立所需的时间长、受体缺乏免疫能力以及不能进行高通量药物筛选等，这些缺点可能导致实验结果与肿瘤在人体内的实际情况出现偏差，因此迫切希望一种更加优秀的模型出现。类器官是由多能干细胞或器官祖细胞分化，并自组装成有结构和功能的完整哺乳动物器官，类器官技术在研究广泛的对象方面潜力巨大，包括发育生物学、疾病病理学、细胞生物学、再生机制、精准医疗以及药物毒性和药效试验等。对于这些应用以及其他应用，类器官培养实现了对现有2D培养方法和动物模型系统的高信息量的互补。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在提供一种乳腺癌类器官专用培养基及3D培养方法以解决上述问题。本专利技术的技术方案为：第一个方面，本专利技术提供一种乳腺癌类器官专用培养基，包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括GSK429286A；Doramapimod；A83-01；EGF；β-estradiol；CholeraToxin；FGF2；HEPES；B27；GlutaMAX；ITS；Gentamicin；Neuregulin-1；牛血清白蛋白(BSA)。进一步地，所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：GSK429286A：5-20uM；Doramapimod：5-20uM；A83-01：0.5-1uM；EGF：50-500ng/ml；β-estradiol：2-10nM；CholeraToxin：10-30ng/ml；FGF2：1-5uM；HEPES：10-30mM；B27：1-5X；GlutaMAX：1-2X；ITS：0.1-1X；Gentamicin：0.5-50ug/ml；Neuregulin-1：2-10nM；牛血清白蛋白(BSA)：1-10mg/ml。进一步地，所述培养基还包括重组蛋白。优选地，所述重组蛋白为TN-C重组蛋白，其在所述培养基中的终浓度为50-100ng/ml。更优选地，所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：GSK429286A：10-15uM；Doramapimod:6-8uM；A83-01:0.7-0.8uM；EGF:150-200ng/ml；β-estradiol:4-6nM；CholeraToxin:10-15ng/ml；FGF2:1-5uM；HEPES:15-20mM；B27:1-5X；GlutaMAX：1-2X；ITS:0.5-1X；Gentamicin:20-30ug/ml；Neuregulin-1：5-6nM；牛血清白蛋白(BSA)：4-5mg/ml；TN-C重组蛋白：70-80ng/ml。进一步地，所述基础培养基为无血清培养基。优选地，所述无血清培养基为DMEM/F12(1:1)减血清培养基。进一步地，所述培养基的制备方法为：将特异性添加因子加入到基础培养基中混合均匀既得。第二个方面，本专利技术提供一种乳腺癌类器官3D培养方法，包括以下步骤：1)将分离的乳腺癌组织进行预处理后消化并过滤，得到细胞沉淀；2)将细胞沉淀裂解，然后与matrigel胶混匀并接种，待混合胶凝固后加入上述培养基，并于37℃、5％CO2浓度下培养7-14天，每间隔2-3天更换一次培养基，即得。第三个方面，本专利技术提供一种乳腺癌类器官，是采用上述培养方法获得。本专利技术的有益效果是：①本专利技术的培养基可实现乳腺癌类器官的快速生长，并可长期稳定培养，形成的肿瘤类器官细胞球形规则，且大小较为均一，能在体外很好地保留患者肿瘤组织的异质性。②本专利技术的培养方法操作简单，人员操作影响较少，稳定性高。附图说明图1为本专利技术实施例1中培养1天的肿瘤细胞的状态图。图2为本专利技术实施例1中培养4天的肿瘤细胞的状态图。图3为本专利技术实施例1中培养7天的肿瘤细胞的状态图。图4为本专利技术实施例1中培养10天的肿瘤细胞的状态图。图5为本专利技术实施例1获得的类器官的形貌图。图6为本专利技术实施例2获得的类器官的形貌图。图7为本专利技术实施例3获得的类器官的形貌图。图8为本专利技术实施例4获得的类器官的形貌图。图9为本专利技术实施例5获得的类器官的形貌图。图10为本专利技术实施例6中长期稳定培养30天的类器官的状态图。图11为本专利技术实施例6中长期稳定培养60天的类器官的状态图。图12为本专利技术实施例6中长期稳定培养90天的类器官的状态图。图13为本专利技术对比例1中培养5天的肿瘤细胞的状态图。图14为本专利技术对比例1中培养10天的肿瘤细胞的状态图。图15为本专利技术对比例2中培养14天的肿瘤细胞的状态图。图16为本专利技术对比例3中培养14天的肿瘤细胞的状态图。具体实施方式在本专利技术的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面结合附图和具体的实施例对本专利技术做进一步详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。实施例1本实施例提供一种乳腺癌类器官专用培养基及3D培养方法，该培养基包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：GSK429286A：10uM；Doramapimod:8uM；A83-01:0.8uM；EGF:150ng/ml；β-estradiol:5nM；CholeraToxin:12ng/ml；FGF2:2uM；HEPES:20mM；B27:1X；GlutaMAX：2X；ITS:0.5X；Gentamicin:25ug/ml；Neuregulin-1：6nM；BSA：4mg/ml；TN-C重组蛋白：70ng/ml。培养方法包括：将取出的乳腺癌组织用生理盐水清洗后，在冰上剪碎，加入10ml胰酶重悬，转移至37℃，220rpm摇床消化10分钟，消化完成后加入5ml的DMEM/F12终止消化。用70um的细胞滤网过滤细胞悬液，1200rpm，离心5分钟，加入5ml的红细胞裂解液重悬沉淀，用5ml的DMEM/F12终止裂解后离心，去除上清，细胞计数，混合matrigel,20000个细胞每滴，滴于24孔板中，放置于37℃，5％的CO2培养箱中，待matrigel胶凝固后，加入上述专用培养基于37℃、5％CO2浓度下培养10天本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于：包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括GSK429286A；Doramapimod；A83-01；EGF；β-estradiol；CholeraToxin；FGF2；HEPES；B27；GlutaMAX；ITS；Gentamicin；Neuregulin-1；BSA。/n

【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于：包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括GSK429286A；Doramapimod；A83-01；EGF；β-estradiol；CholeraToxin；FGF2；HEPES；B27；GlutaMAX；ITS；Gentamicin；Neuregulin-1；BSA。


2.根据权利要求1所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于：所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：GSK429286A：5-20uM；Doramapimod：5-20uM；A83-01：0.5-1uM；EGF：50-500ng/ml；β-estradiol：2-10nM；CholeraToxin：10-30ng/ml；FGF2：1-5uM；HEPES：10-30mM；B27：1-5X；GlutaMAX：1-2X；ITS：0.1-1X；Gentamicin：0.5-50ug/ml；Neuregulin-1：2-10nM；BSA：1-10mg/ml。


3.根据权利要求1或2所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于：所述培养基还包括重组蛋白。


4.根据权利要求3所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于：所述重组蛋白为TN-C重组蛋白，其在所述培养基中的终浓度为50-100ng/ml。


5.根据权利要求4所述的一种乳腺癌类器官专用培养基，其特征在于：所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：GSK429286A...

【专利技术属性】
技术研发人员：于言，朱宇，陈泽新，黄敏，
申请(专利权)人：创芯国际生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44