一种泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养方法。本发明专利技术提供了泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养方法及配套试剂，该技术核心是：用温和细胞解离试剂处理泌尿肿瘤实体瘤组织，最大程度保证了组织中肿瘤细胞活力；配制特殊无血清培养基，利用悬浮培养体系对泌尿肿瘤来源的实体瘤细胞进行体外培养，保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明专利技术方法得到的泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养物可用于多种细胞水平体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可预见，这种培养方法在泌尿肿瘤的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养方法。
技术介绍
泌尿肿瘤是发生于泌尿系统任意部位的肿瘤。包括肾、肾盂、输尿管、膀胱、尿道肿瘤。由于尿液在膀胱内停留时间最长，所以引起的膀胱癌也最为常见。泌尿系统肿瘤常在40岁以后发出，男性比女性多一倍左右。据国家癌症中心2018年数据统计，2014年，我国膀胱癌和肾癌发病率分别占男性恶性肿瘤发病率的4.5％和2.7％。近年来，中国泌尿发病率逐年上升，平均每年增长约6％，尽管世界各国的科研和医疗机构对泌尿肿瘤的病因以及发生发展过程的研究都有很大力度的投入，但是人类对这种疾病仍然知之甚少。泌尿肿瘤是一类复杂疾病，其发生、发展是一个动态的过程，涉及到诸多信号分子相互作用，形成了一个复杂的分子调控网络，同时还受到外界环境因素的影响。泌尿肿瘤的病因和发生发展过程有很强的个体差异性，不能一概而论。此外，泌尿肿瘤可选择的治疗方式和药物较多，如何选择最优的治疗方案一直是临床诊疗的一大难题。因此将泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：利用泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基悬浮培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞；/n所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-2Supplement、Y-27632、双氢睾酮、前列腺素E2和Advanced DMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为2...

【技术特征摘要】
1.一种培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：利用泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基悬浮培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞；
所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-2Supplement、Y-27632、双氢睾酮、前列腺素E2和AdvancedDMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；所述双氢睾酮的终浓度为1-10nM；所述前列腺素E2的终浓度为1-10μM；余量均为AdvancedDMEM/F12培养基。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞是用样本解离液对泌尿肿瘤实体瘤组织进行解离处理后获得的；
所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶II、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶II在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；余量均为PBS；
进一步地，是按照包括如下步骤的方法用所述样本解离液对所述泌尿肿瘤实体瘤组织进行解离的：按0.1-0.3mL所述样本解离液每mg组织的用量，将剪碎后的所述泌尿肿瘤实体瘤组织用事先37℃预热的所述样本解离液进行处理，在37℃条件下进行样本解离，解离时间15分钟至3小时。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法中，是按照包括如下步骤的方法用所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基悬浮培养所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的：使用细胞培养容器M，利用所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基悬浮培养所述泌尿肿瘤实体瘤原代细胞，37℃，5％CO2条件下进行培养，每2-4天更换一次培养基；
所述细胞培养容器M为如下任一：(I)聚苯乙烯材质的细胞培养容器、聚碳酸酯材质的细胞培养容器、聚甲基丙烯酸甲酯材质的细胞培养容器、COC树脂材质的细胞培养容器、环烯烃聚合物材质的细胞培养容器或低吸附表面的细胞培养容器；(II)对(I)中的细胞培养容器进行CYTOP修饰后的细胞培养容器；
进一步地，所述细胞培养容器为细胞培养皿、细胞培养孔板或用于细胞培养的微孔板芯片；
进一步地，所述(II)中，是按照包括如下步骤的方法对所述(I)中的细胞培养容器进行CYTOP修饰的：对所述(I)中的细胞培养容器进行纯氧刻蚀，刻蚀条件为功率20W，刻蚀时间为3分钟；然后用1％CYTOP溶液覆盖所述细胞培养容器表面，晾干所述1％CYTOP溶液即完成CYTOP修饰；
更进一步地，所述1％CYTOP溶液的组成如下：每100mL所述1％CYTOP溶液中含有1mLCYTOP，余量为氟油。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹申意，张函槊，
申请(专利权)人：北京基石生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11