一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。本发明专利技术所提供的用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞培养基是配制特殊无血清培养基，利用该培养基对骨与软组织肿瘤来源的实体瘤细胞进行体外悬浮培养，可以保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明专利技术方法得到的骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞培养物可用于多种细胞水平体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可预见，这种培养方法在骨与软组织肿瘤实体瘤的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养方法基。
技术介绍
骨与软组织肿瘤是严重危害人类健康及生命的疾病，近年来发病率逐渐上升，原发恶性骨肿瘤多见于青少年和中年人，常见的是骨肉瘤、尤文肉瘤、软骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脊索瘤等。常见的软组织恶性肿瘤是滑膜肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤等。骨与软组织肿瘤发病率占恶性肿瘤发病率约1％，但其种类较多，致使不规范诊疗很普遍，当前各临床指南均推荐软组织肉瘤采用临床试验的治疗方式。尽管世界各国的科研和医疗机构对骨与软组织肿瘤的病因以及发生发展过程的研究都有很大力度的投入，但是人类对这种疾病仍然知之甚少。骨与软组织肿瘤是一类复杂疾病，其发生、发展是一个动态的过程，涉及到诸多信号分子相互作用，形成了一个复杂的分子调控网络，同时还受到外界环境因素的影响。骨与软组织肿瘤的病因和发生发展过程有很强的个体差异性，不能一概而论。因此将骨与软组织肿瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研究是骨与软组织肿瘤研究领域乃至骨与软组织肿瘤诊断治疗领域的趋势。现有的原代肿瘤细胞培养技术主要有2D培养，3D培养，重编程培养等几类，这些方法都不同程度的面临培养周期极长，培养成功率低，杂细胞难以去除等问题。
技术实现思路
为了有效解决上述技术问题，本专利技术提供了一种新的骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞培养技术及配套试剂，本专利技术配制特殊的无血清培养基，利用悬浮培养体系对骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞进行体外培养，保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。第一方面，本专利技术要求保护一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。本专利技术所要求保护的用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基由抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白IGF-I、人重组蛋白BDNF、ITS-X(Insulin,Transferrin,Selenium,EthanolamineSolution)、N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)、N-2Supplement、Y-27632和AdvancedDMEM/F12培养基组成。其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL(如100U/mL)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL(如100μg/mL)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL(如250ng/mL)；所述HEPES的终浓度为8-12mM(如10mM)；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(如1％，％表示体积百分含量)；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白IGF-I的终浓度为50-100ng/mL；所述人重组蛋白BDNF的终浓度为50-200ng/mL；所述ITS-X的终浓度为1％(体积百分含量)；所述N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；余量均为AdvancedDMEM/F12培养基。进一步地，所述抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)组成如下：每毫升包含10000单位青霉素(碱)、10000μg链霉素(碱)和25μg两性霉素B。所述抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)为“Antibiotic-Antimycotic,100X”(如Gibco#15240062，或与其组成相同的其他产品)。所述“Antibiotic-Antimycotic,100X”每毫升包含10000单位青霉素(碱)、10000μg链霉素(碱)和25μg两性霉素B，利用0.85％盐液形式的青霉素G(钠盐)、硫酸链霉素和两性霉素B作为抗真菌剂。所述GlutaMAX为“GlutaMAXTMSupplement”(如Gibco#35050061，或与其组成相同的其他产品)。所述“GlutaMAXTMSupplement”的成分为L-alanyl-L-glutamine，是L-glutamine的替代物，浓度为200nM，溶剂为0.85％NaCl溶液。所述N-2Supplement为“N-2Supplement(100X)”(如Gibco#17502001，或与其组成相同的其他产品)。所述“N-2Supplement(100X)”中含有终浓度为1mM的人全铁转铁蛋白(HumanTransferrin(Holo))、500mg/L的重组胰岛素全链(InsulinRecombinantFullChain)、0.63mg/L的孕酮(Progesterone)、10mM的腐胺(Putrescine)、0.52mg/L的亚硒酸盐(Selenite)。所述ITS-X的溶剂为EBSS溶液(Earle's平衡盐溶液)，溶质及浓度如下：胰岛素1g/L；转铁蛋白0.55g/L；亚硒酸钠0.00067g/L；乙醇胺0.2g/L。所述GlutaMAX是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代细胞培养基中的L-谷氨酰胺。所述GlutaMAX为“GlutaMAXTMSupplement”(如Gibco#35050061，或与其组成相同的其他产品)。所述Y-27632为“Y-27632dihydrochloride(一种ATP竞争性的ROCK-I和ROCK-II抑制剂，Ki分别为220nM和300nM)”(如MCE#129830-38-2，或与其组成相同的其他产品)。在本专利技术的具体实施例中，所述抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)的品牌货号为Gibco#15240062；所述HEPES的品牌货号为Gibco#15630080；所述GlutaMAX的品牌货号为Gibco#35050061；所述人重组蛋白bFGF的品牌货号为PeprotechAF-100-18B-50；所述人重组蛋白HGF的品牌货号为PeprotechAF-100-39-100；所述人重组蛋白MSP的品牌货号为R&D#352-MS-050；所述人重组蛋白IGF-I的品牌货号为Peprotech#AF-100-11；所述人重组蛋白BDNF的品牌货号为Peprotech#450-02；所述ITS-X的品牌货号为Gibco#51500056；所述N-acetyl-L-cysteine的品牌货号为Sigma#A9165；所述N-2Supplement的品牌货号为Gibco#17502001；所述Y-27632的品牌货号为MCE#129830-38-2；所述AdvancedDMEM/F12培养基的品牌货号为Gibco#12634010。进一步地，所述用于培养骨与软组织肿瘤实体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基，其特征在于：所述培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白IGF-I、人重组蛋白BDNF、ITS-X、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-2Supplement、Y-27632和Advanced DMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白IGF-I的终浓度为50-100ng/mL；所述人重组蛋白BDNF的终浓度为50-200ng/mL；所述ITS-X的终浓度为1％(体积百分含量)；所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；余量均为Advanced DMEM/F12培养基。/n...

【技术特征摘要】
1.一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基，其特征在于：所述培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白IGF-I、人重组蛋白BDNF、ITS-X、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-2Supplement、Y-27632和AdvancedDMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白IGF-I的终浓度为50-100ng/mL；所述人重组蛋白BDNF的终浓度为50-200ng/mL；所述ITS-X的终浓度为1％(体积百分含量)；所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；余量均为AdvancedDMEM/F12培养基。


2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基为含有所述抗菌抗真菌剂三抗、所述HEPES、所述GlutaMax、所述人重组蛋白bFGF、所述人重组蛋白HGF、所述人重组蛋白MSP、所述人重组蛋白IGF-I、所述人重组蛋白BDNF、所述ITS-X、所述N-乙酰-L-半胱氨酸、所述N-2Supplement、所述Y-27632和所述AdvancedDMEM/F12培养基的溶液。


3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基中的各组分单独存在。


4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述人重组蛋白bFGF、所述人重组蛋白HGF、所述人重组蛋白MSP、所述人重组蛋白IGF-I、所述人重组蛋白BDNF、所述N-乙酰-L-半胱氨酸和所述Y-27632以母液形式存在。


5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹申意，张函槊，
申请(专利权)人：北京基石生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11