一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。本发明专利技术提供的用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养基为配制特殊无血清培养基，利用该培养基对泌尿肿瘤来源的实体瘤细胞进行体外悬浮培养，可以保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明专利技术方法得到的泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养物可用于多种细胞水平体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可预见，这种培养方法在泌尿肿瘤的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。
技术介绍
泌尿肿瘤是发生于泌尿系统任意部位的肿瘤。包括肾、肾盂、输尿管、膀胱、尿道肿瘤。由于尿液在膀胱内停留时间最长，所以引起的膀胱癌也最为常见。泌尿系统肿瘤常在40岁以后发出，男性比女性多一倍左右。据国家癌症中心2018年数据统计，2014年，我国膀胱癌和肾癌发病率分别占男性恶性肿瘤发病率的4.5％和2.7％。近年来，中国泌尿发病率逐年上升，平均每年增长约6％，尽管世界各国的科研和医疗机构对泌尿肿瘤的病因以及发生发展过程的研究都有很大力度的投入，但是人类对这种疾病仍然知之甚少。泌尿肿瘤是一类复杂疾病，其发生、发展是一个动态的过程，涉及到诸多信号分子相互作用，形成了一个复杂的分子调控网络，同时还受到外界环境因素的影响。泌尿肿瘤的病因和发生发展过程有很强的个体差异性，不能一概而论。此外，泌尿肿瘤可选择的治疗方式和药物较多，如何选择最优的治疗方案一直是临床诊疗的一大难题。因此将泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研究是泌尿肿瘤研究领域乃至泌尿肿瘤诊断治疗领域的趋势。现有的原代肿瘤细胞培养技术主要有2D培养，3D培养，重编程培养等几类，这些方法都不同程度的面临培养周期极长，培养成功率低，杂细胞难以去除等问题。
技术实现思路
为了有效解决上述技术问题，本专利技术提供了一种新的泌尿肿瘤实体瘤原代细胞培养技术及配套试剂，本专利技术配制特殊的无血清培养基，利用悬浮培养体系对泌尿肿瘤实体瘤来源的肿瘤细胞进行体外培养，保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。第一方面，本专利技术要求保护一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。本专利技术所要求保护的用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基由抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)、N-2Supplement、Y-27632、双氢睾酮(Dihydrotestosterone)、前列腺素E2(ProstaglandinE2)和AdvancedDMEM/F12培养基组成。其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL(如100U/mL)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL(如100μg/mL)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL(如250ng/mL)；所述HEPES的终浓度为8-12mM(如10mM)；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(如1％，％表示体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；所述双氢睾酮的终浓度为1-10nM；所述前列腺素E2的终浓度为1-10μM；余量均为AdvancedDMEM/F12培养基。进一步地，所述抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)组成如下：每毫升包含10000单位青霉素(碱)、10000μg链霉素(碱)和25μg两性霉素B。所述抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)为“Antibiotic-Antimycotic,100X”(如Gibco#15240062，或与其组成相同的其他产品)。所述“Antibiotic-Antimycotic,100X”每毫升包含10000单位青霉素(碱)、10000μg链霉素(碱)和25μg两性霉素B，利用0.85％盐液形式的青霉素G(钠盐)、硫酸链霉素和两性霉素B作为抗真菌剂。所述GlutaMAX为“GlutaMAXTMSupplement”(如Gibco#35050061，或与其组成相同的其他产品)。所述“GlutaMAXTMSupplement”的成分为L-alanyl-L-glutamine，是L-glutamine的替代物，浓度为200nM，溶剂为0.85％NaCl溶液。所述N-2Supplement为“N-2Supplement(100X)”(如Gibco#17502001，或与其组成相同的其他产品)。所述“N-2Supplement(100X)”中含有终浓度为1mM的人全铁转铁蛋白(HumanTransferrin(Holo))、500mg/L的重组胰岛素全链(InsulinRecombinantFullChain)、0.63mg/L的孕酮(Progesterone)、10mM的腐胺(Putrescine)、0.52mg/L的亚硒酸盐(Selenite)。所述GlutaMAX是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代细胞培养基中的L-谷氨酰胺。所述GlutaMAX为“GlutaMAXTMSupplement”(如Gibco#35050061，或与其组成相同的其他产品)。所述Y-27632为“Y-27632dihydrochloride(一种ATP竞争性的ROCK-I和ROCK-II抑制剂，Ki分别为220nM和300nM)”(如MCE#129830-38-2，或与其组成相同的其他产品)。所述Dihydrotestosterone是一种内源性的雄激素性类固醇和激素，是雄激素受体的激动剂，其亲和力比睾酮高2-3倍，诱导雄激素受体信号的效力比睾酮高3倍。所述ProstaglandinE2在分娩中发挥重要作用(可软化宫颈，引起子宫收缩)，也刺激成骨细胞释放能刺激破骨细胞吸收的因子。在本专利技术的具体实施例中，所述抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)的品牌货号为Gibco#15240062；所述HEPES的品牌货号为Gibco#15630080；所述GlutaMAX的品牌货号为Gibco#35050061；所述人重组蛋白EGF的品牌货号为PeprotechAF-100-15-100；所述人重组蛋白bFGF的品牌货号为PeprotechAF-100-18B-50；所述人重组蛋白HGF的品牌货号为PeprotechAF-100-39-100；所述人重组蛋白MSP的品牌货号为R&D#352-MS-050；所述N-acetyl-L-cysteine的品牌货号为Sigma#A9165；所述N-2Supplement的品牌货号为Gibco#17502001；所述Y-27632的品牌货号为MCE#129830-38-2；所述Dihydrotestosterone的品牌货号为Selleck#S4757；所述ProstaglandinE2的品牌货号为Selleck#S3003；所述AdvancedDMEM/F本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基，其特征在于：所述培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-2Supplement、Y-27632、双氢睾酮、前列腺素E2和AdvancedDMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；所述双氢睾酮的终浓度为1-10nM；所述前列腺素E2的终浓度为1-10μM；余量均为Advanced DMEM/F12培养基。/n...

【技术特征摘要】
1.一种用于培养泌尿肿瘤实体瘤原代细胞的培养基，其特征在于：所述培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-2Supplement、Y-27632、双氢睾酮、前列腺素E2和AdvancedDMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；所述双氢睾酮的终浓度为1-10nM；所述前列腺素E2的终浓度为1-10μM；余量均为AdvancedDMEM/F12培养基。


2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基为含有所述抗菌抗真菌剂三抗、所述HEPES、所述GlutaMax、所述人重组蛋白EGF、所述人重组蛋白bFGF、所述人重组蛋白HGF、所述人重组蛋白MSP、所述N-乙酰-L-半胱氨酸、所述N-2Supplement、所述Y-27632、所述双氢睾酮、所述前列腺素E2和所述AdvancedDMEM/F12培养基的溶液。


3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基中的各组分单独存在。


4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述人重组蛋白EGF、所述人重组蛋白bFGF、所述人重组蛋白HGF、所述人重组蛋白MSP、所述N-乙酰-L-半胱氨酸、所述Y-27632、所述双氢睾酮、所述前列腺素E2以母液形式存在。


5.根据权利要求4所述的培养基，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹申意，张函槊，
申请(专利权)人：北京基石生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11