新生儿胆道闭锁诊断标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了新生儿胆道闭锁诊断标志物在制备评估和诊断新生儿胆道闭锁的工具中的应用。所述诊断产品可以为医疗器械、试剂盒、试纸和医疗装置等。本发明专利技术还提供了检测所述生物标志物的试剂盒及其使用方法。本发明专利技术提供了新生儿胆道闭锁风险早期筛查和区别于其他原因导致的胆汁瘀积的诊断的有效手段，提高了新生儿胆道闭锁诊断效率和诊断准确性，为及时采取治疗措施争取时间，有利于提高新生儿胆道闭锁的治疗效果和预后。

【技术实现步骤摘要】
新生儿胆道闭锁诊断标志物的应用
本专利技术涉及生物医疗
，具体涉及可用于评估新生儿胆道闭锁风险的诊断标志物及其在监测、筛查和诊断新生儿胆道闭锁领域的应用，本专利技术还涉及检测所述诊断标志物的方法和装置。
技术介绍
胆道闭锁(Biliaryatresia，BA)新生儿期发生的进行性、特发性肝外胆管系统疾病，是一种破坏性的新生儿胆管炎症纤维阻塞，影响着不同长度的肝内和肝外胆管，是新生儿阻塞性黄疸最主要原因，也是小儿肝移植最主要原因，约60％儿童肝移植是由此引起的。诊断为先天性胆道闭锁的患儿，如不得到及时治疗，80％以上将在1岁以内因肝功能衰竭而死亡。许多患儿往往在确诊胆道闭锁时即已存在严重的肝脏纤维化，并且很快发展成为肝硬化，最终导致肝功能衰竭。因此，胆道闭锁的尽早诊断就愈发显得迫切。肝门空肠吻合术(Kasai根治术)是胆道闭锁的首选治疗方案。手术时间对于Kasai手术的疗效有很大影响。研究发现，在出生后30或45天内进行Kasai手术，其术后黄疸消失率和五年的自体肝生存率显著升高，对肝移植的需求显著降低。但不幸的是目前胆道闭锁不能及时诊断，一般手术的时间都到了2个月后。胆道闭锁的早期筛查和诊断对患者意义重大，可节省患者宝贵的治疗时间并提高预后。目前临床常用的术前诊断方法包括肝活检、胰胆管造影、肝胆造影和十二指肠管检查等。但这些技术存在一定局限性。影像学检查中，异常胆囊(胆囊缩小，收缩差)和肝门部纤维块是超声检查胆道闭锁患儿肝脏的特征性表现[Ta等。利用肝门纤维块及胆囊长度诊断胆道闭锁。儿科影像学，2000,30(2):69-73]，但肝门部纤维块不一定在每个患儿中均出现，并且超声检查因不同医生、机器等观察结果差异较大。因此文献中报道诊断胆道闭锁的敏感性与特异性各不相同。近期，有Meta分析报道，胆囊闭锁和肝门部纤维块的特异性均可达到99％，然而相对应的敏感性为28％和80％。3个月龄以内的婴儿胆管直径小、胆管内液体少，磁共振胰胆管成像检查诊断胆道闭锁的高假阳性率不可避免。此外，胆道闭锁的病理特征为小胆管增生、胆栓形成、毛细胆管和肝细胞胆汁淤积、汇管区或小叶周围纤维化，早期尚可见肝小叶结构。因此，临床应用于鉴别胆道闭锁与其他新生儿胆汁淤积症时，因检测准确性低或过程复杂导致胆道闭锁诊断和治疗的延迟。在疾病早期，BA的临床表现、生物化学指标、影像学和组织学特征与其它胆汁淤积疾病存在重叠性，鉴别诊断过程曲折、复杂且费用高昂，容易导致诊断延迟和增加了患者家庭的经济负担。肝活检和十二指肠管检查将涉及不必要的手术，并给疑似患儿带来额外伤害。因此探索简单、特异性诊断方法从未停止，探索简单有效的诊断生物标志物对胆道闭锁的早期筛查和诊断具有重要意义。现有的胆道闭锁筛查和诊断血清学指标包括：①血清总胆红素，直接胆红素；其作为最初筛查指标。新生儿血清总胆红素>2.0mg/dL(42–51μmol/L)，或直接胆红素>1.0mg/dL(17μmol/L)需进行胆道闭锁排查，但对于诊断胆道闭锁特异性差；②GGT：大样本调查研究表明，不同年龄组中，胆道闭锁组GGT含量均明显高于其他胆汁淤积疾病组[ChenX等。γ-GT与年龄结合诊断胆道闭锁的价值。儿科胃肠病学与营养学，2016,63(3):370-373]。Liu等人在“γ-GT对早期诊断胆道闭锁的价值”中报道GGT>300U/L时，其诊断胆道闭锁的精确度为60％-85％诊断。GGT是胆道闭锁最常用的筛查指标，但临床病例中不同患儿之间差异较大，准确性受到局限；③其他指标：血清胆酸、凝血酶原浓度、血小板测定影响因素较多。现有技术中对新生儿胆道闭锁诊断的生物标志物进行了探索。中国专利文献CN101221129B公开了磺酸化胆汁酸酶荧光毛细分析法及酶荧光定量试剂盒，适用于肝胆疾病的快速筛查和诊断，尤其适用于新生儿期黄疸、先天性胆道闭锁症的早期发现。CN108267585A公开了生物样品中的MMP-7作为诊断标志物。CN102818866B公开了血清中牛磺鹅去氧胆酸和鹅去氧胆酸的比值作为新生儿胆道闭锁的诊断标志物。本专利技术针对现有技术之不足，探索便捷、可靠的能够评估新生儿胆道闭锁风险的方法或途径，为临床新生儿胆道闭锁快速、高效地筛查和诊断提供可行方案。
技术实现思路
本专利技术提供了一种能够便利、可靠、高效地对新生儿胆道闭锁风险进行评估、筛查和/或诊断的技术方案。本专利技术提供了生物标志物用以评估新生儿胆道闭锁风险，本专利技术还提供了新生儿胆道闭锁风险的评估方法。本专利技术提供了生物标志物用于制备评估新生儿胆道闭锁风险的产品、方法或装置，可用于临床筛查新生儿胆道闭锁高风险患者。本专利技术提供的评估新生胆道闭锁风险的所有技术方案，可根据评估结果决定是否采取进一步的临床诊断和治疗措施。基于本文提供的构思、方法和数据，本专利技术使新生儿胆道闭锁的早期快速筛查成为可能。本专利技术探索了胆红素及其代谢产物与新生儿患有胆道闭锁风险的关联性。本专利技术通过测定健康新生儿和患有胆道闭锁新生儿血液样本中胆红素及其代谢产物，确定了胆红素及其代谢产物与新生儿胆道闭锁风险是相关的。结合生物信息学方法，将本专利技术生物标志物的水平与检测对象胆道闭锁的风险相关联。作为示例，采用胆红素单葡萄糖醛酸酯作为生物标志物，检测健康新生儿和新生儿胆道闭锁患者的检测样本中的胆红素单葡萄糖醛酸酯的含量，确定截断值(cutoff值)；当检测对象同样的检测样本中的胆红素单葡萄糖醛酸酯的含量高于截断值时，提示检测对象具有胆道闭锁高风险，提示了进一步临床诊断和治疗的必要性。本专利技术提供了与新生儿胆道闭锁有关的生物标志物，以及进一步提供所述生物标志物在新生儿胆道闭锁风险评估、筛查和/或诊断的应用，以及进一步提供一种评估新生儿胆道闭锁风险的工具和方法，以及进一步更具体地提供所述生物标志物在制备新生儿胆道闭锁风险评估的诊断产品的应用及相关诊断产品和使用方法。本专利技术描述生物标志物筛查和验证的研究过程和结果。本专利技术通过定量测定胆红素及其组分的含量在正常新生儿、胆道闭锁新生儿和其他原因导致的胆汁瘀积疾病新生儿血液样本中含量的不同，发现可将胆红素单葡萄糖醛酸酯定量检测值作为风险评估的指标用以区分正常新生儿、疑似胆道闭锁新生儿和其他原因导致的胆汁瘀积疾病新生儿。基于此创造性研究成果，专利技术人进一步探索将胆红素单葡萄糖醛酸酯含量作为检测指标用于临床新生儿胆道闭锁的早期筛查与诊断的应用途径，从而使新生儿出生后快速、便捷、高效地进行胆道闭锁的筛查，对于高风险患儿迅速采取进一步医疗措施成为可能。专利技术人提出胆红素单葡萄糖醛酸酯可以作为诊断标志物用于临床新生儿胆道闭锁的快速筛查的方法；以及作为示例之一，专利技术人提出胆红素单葡萄糖醛酸酯作为诊断标志物，可用于制备新生儿胆道闭锁风险评估的适当的诊断产品，该诊断产品以胆红素单葡萄糖醛酸酯作为定量检测指标，包含胆红素单葡萄糖醛酸酯定量检测试剂，以及任选地，可包含对受试体的血液样本进行处理的试剂及其他检测试剂。基于以上发现和构思，本专利技术第一方面提供胆红素单葡萄糖醛酸酯作为诊断标志物在制备用于评估新生儿胆道本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.胆红素单葡萄糖醛酸酯作为诊断标志物在制备用于评估新生儿胆道闭锁风险的诊断装置中的应用，其特征在于，所述诊断装置对胆红素单葡萄糖醛酸酯进行定量检测。/n

【技术特征摘要】
1.胆红素单葡萄糖醛酸酯作为诊断标志物在制备用于评估新生儿胆道闭锁风险的诊断装置中的应用，其特征在于，所述诊断装置对胆红素单葡萄糖醛酸酯进行定量检测。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断装置选自医疗器械、试剂盒、试纸和检测装置。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断装置以新生儿为检测对象，采用检测对象的血液样本进行检测；优选地，所述血液样本选自检测对象的全血、血浆、血清和干血斑。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述定量检测方法为液相色谱-串联质谱；优选地，所述液相色谱选自高效液相色谱、超高效液相色谱和纳升液相色谱；优选地，所述液相色谱选自高效液相色谱，液相色谱柱选自C8和C18硅胶填料柱。


5.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱检测方法，液相色谱的流动相的组成为：
水相A选自pH值调整剂调整pH值为3-4.5的超纯水；
有机相B选自乙腈、乙醇、甲醇、丙二醇、异丙醇中一种或几种的组合；
优选地，所述pH值调整剂选自乙酸铵-乙酸、甲酸铵-甲酸、三氟乙酸和三氯乙酸；优选地，所述pH值调整剂为乙酸铵/乙酸缓冲系统；
优选地，所述有机相B选自乙腈、甲醇、异丙醇中一种或几种的组合；优选地，所述有机相B包括乙腈、甲醇和异丙醇。


6.如权利要求5至12任一所述的应用，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱检测方法，所述质谱选自四级杆质谱、飞行时间质谱、离子肼质谱和高分辨轨道肼质谱；优选地，所述质谱的条件和设定质谱定性定量检测模式包括：选择电喷离子源(ESI)，根据检测目标化合物的响应选择离子扫描模式；选择多反应监测方法(MRM)，设定多反应监测模式参数。


7.如权利要求1至14任一所述的应用，其特征在于，所述诊断装置可任选地联合检测对象的其他检测指标评估新生儿胆道闭锁风险，其他检测指标选自游离胆红素、胆红素双葡萄糖醛酸酯、胆绿素、γ-谷氨酰转移酶、MMP-7和其他直接或间接地对新生儿胆道闭锁有诊断能力的指标之一种或几种用于所述应用目的。


8.用于评估新生儿胆道闭锁风险的试剂盒，其特征在于，包含胆红素单葡萄糖醛酸酯定量检测试剂；优选地，所述定量检测试剂包括胆红素单葡萄糖醛酸酯质控品和内标准品；优选地，所述胆红素单葡萄糖醛酸酯质控品为胆红素单葡萄糖醛酸酯标准品分配于包含有第一稳定剂和第二稳定剂的体系中；优选地，所述第一稳定剂选自丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)中之一种或几种的组合；优选地，所述第二稳定剂选自抗坏血酸；优选地，所述第一稳定剂和第二稳定剂的体系为含有二丁基羟基甲苯(BHT)和抗坏血酸的有机溶剂分散体系；优选地，所述有机溶剂分散体系的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇和乙腈中之一种或几种的组合。


9.如权利要求18所述的试剂盒，其特征在于，所述体系为固体体系，所述固体体系包括固体载体；优选地，所述固体载体为滤纸片，选自分析滤纸、定性分析滤纸...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾伟，谢国祥，周科军，
申请(专利权)人：深圳市绘云生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44