本发明专利技术公开了一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其包括：免疫层析试纸条、试剂R1以及试剂R2，所述免疫层析试纸条包括：底衬、样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，所述硝酸纤维素膜上固定有一条或多条检测线，所述检测线为抗人糖化血红蛋白抗体，所述试剂R1包含1‑10g/L的SDS，所述试剂R2包含示踪粒子标记抗人血红蛋白抗体。本发明专利技术通过配置特殊的试剂R2，将示踪粒子标记抗体溶于试剂R2中，在待测样本前处理阶段就使其与示踪粒子标记抗体结合，同时通过配置试剂R1，在前处理阶段针对样本进行溶血处理。本发明专利技术一方面简化了试纸条的制备工艺，另一方面提升了试纸条的特异性和稳定性，使检测精密度CV值低于3％。
【技术实现步骤摘要】
一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂及其制备方法
本专利技术涉及医学检验领域，具体涉及一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂及其制备方法
技术介绍
糖化血红蛋白HbA1c是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类相结合的产物。它是通过缓慢、持续及不可逆的糖化反应形成，其含量的多少取决于血糖浓度以及血糖与血红蛋白接触时间,与红细胞的生存有关，其合成速率与平均120d生命周期的红细胞糖化量成正比函数关系，在临床上，HbA1c代表了人体在最近2-3月平均血糖水平的控制，且与抽血时间、患者是否空腹以及是否使用胰岛素等因素无关，因此HbA1c是衡量血糖控制的金标准，也是诊断和管理糖尿病的重要手段。目前已知的测定糖化血红蛋白的方法有酶法、免疫法、硼酸亲和层析法、离子交换HPLC法、毛细管电泳法。其中离子交换HPLC法为IFCC指导的标准参考方法，具有精密度好、检测结果准确等优点，通常采用离子交换HPLC法检测的精密度CV值小于3％，但其所需设备昂贵，检测成本高，同时其检测耗时较长。与之相对的是免疫层析法，因免疫层析操作简单，易于在基层医院开展，但由于其局限局层析材质的不均一，导致检测结果的精密度和准确性不佳，通常采用免疫层析法检测的精密度CV值小于15％，检测的准确度和精密度得不到保证。
技术实现思路
本专利技术提供一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂及其制备方法，通过配置特殊的试剂R2，将示踪粒子标记抗体溶于试剂R2中，在待测样本前处理阶段就使其与示踪粒子标记抗体结合，同时通过配置试剂R1，在前处理阶段针对样本进行溶血处理，一方面简化了试纸条的制备工艺，另一方面提升了试纸条的特异性和稳定性，使检测精密度CV值低于3％。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术手段：一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，包括：免疫层析试纸条、试剂R1以及试剂R2；所述试剂R1包含1-10g/L的溶血剂，所述溶血剂优选为SDS；所述试剂R2包含0.05-0.2g/L示踪粒子标记抗人血红蛋白抗体。优选地，所述免疫层析试纸条包括：样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，所述硝酸纤维素膜上靠近样品垫端设置有1条或多条检测线，所述检测线为抗人糖化血红蛋白抗体，所述硝酸纤维素膜上靠近吸水垫端设置有1条质控线，所述质控线为羊抗鼠抗体。优选地，所述试剂R1还包括20-100mmol/L的缓冲液、0.1-0.8g/L的防腐剂、50-100mmol/L的氯化钠以及以及15-30ml/L的表面活性剂。优选地，所述缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种，所述表面活性剂选自Tween-20、Tween-80、曲拉通X100以及曲拉通X405中的至少一种。优选地，所述试剂R2还包括5-50mmol/L的缓冲液、2-10g/L的蛋白稳定剂、20-50g/L的保护剂、0.1-0.8g/L的防腐剂。优选地，所述试剂R2中缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述保护剂选自海藻糖或蔗糖中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种，所述蛋白稳定剂选自酪蛋白钠及其水解产物、BSA、脱脂奶粉、鱼明胶或氨基酸中的至少一种。优选地，所述示踪粒子为彩色微球，优选为红色微球。一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)试剂R1的制备：按照1-10g/L的溶血剂、20-100mmol/L的缓冲液、0.1-0.8g/L的防腐剂、50-100mmol/L的氯化钠以及以及15-30ml/L的表面活性剂进行配置后搅拌混匀，所述溶血剂优选为SDS，所述缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种，所述表面活性剂选自Tween-20、Tween-80、曲拉通X100以及曲拉通X405中的至少一种；(2)试剂R2的制备：按照0.05-0.2g/L示踪粒子标记抗人血红蛋白抗体、5-50mmol/L的缓冲液、2-10g/L的蛋白稳定剂、20-50g/L的保护剂以及0.1-0.8g/L的防腐剂进行配置后搅拌混匀，所述示踪粒子优选为红色微球，所述缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述保护剂选自海藻糖或蔗糖中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种，所述蛋白稳定剂选自酪蛋白钠及其水解产物、BSA、脱脂奶粉、鱼明胶或氨基酸中的至少一种；(3)硝酸纤维素膜的处理：将抗人糖化血红蛋白单克隆抗体用PBS缓冲液稀释后在硝酸纤维素膜靠近样品垫端划检测线；将羊抗鼠IgG抗体在硝酸纤维素膜靠近吸水垫端划质控线，该线与检测线相互平行，干燥；(4)试纸条的组装：将硝酸纤维素膜搭接在底衬上，样品垫搭接在硝酸纤维素膜的一端，吸水垫搭接在硝酸纤维素膜的另一端，切条。上述试剂盒在检测糖化血红蛋白中的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待测样本加入试剂R1中，搅拌混匀；(2)将步骤(1)中的混合液与试剂R2混合，搅拌混匀；(3)滴加混合液到实施例1中制备得到的试纸条加样孔中；(4)用免疫定量分析仪检测；优选地，步骤(1)中所述待测样本与试剂R1的体积比为1:50-1:100之间，步骤(2)中混合液与试剂R2的体积比为10:1-50:1之间。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术通过配置试剂R1，在样品前处理阶段利用试剂R1对待测样本进行溶血处理，降低了试纸条的背景干扰，保证了检测的稳定性以及精密度。(2)本专利技术通过配置特殊的试剂R2，将示踪粒子标记抗体溶于试剂R2中，在待测样本前处理阶段就使其与示踪粒子标记抗体结合，取代了传统的结合垫结构，一方面简化了试纸条的制备工艺，另一方面克服了由于层析材质不均一导致检测结果的精密度和准确性不佳，提升了试纸条的特异性和稳定性，使检测精密度CV值低于3％。附图说明图1为根据本专利技术实施例1中的糖化血红蛋白检测试纸条的结构示意图；图2为根据本专利技术实施例3所提供的HbA1c标准品浓度与测定值的标准曲线图；图3根据本专利技术实施例3所提供的HbA1c测定值与临床值相关性图。图中标号分别表示：检测线1；质控线2；样品垫3；硝酸纤维素膜4；吸水垫5；底衬6。具体实施例本文包括以下的实施例，用于以例证的方式更清楚、明确地阐述本专利技术的技术方案。本领域技术人员根据本文的公开应当理解，可以在所公开的特定的实施方式中进行许多改变但是仍然获得相似或类似的结果，而不偏离本专利技术的思想和范围。本专利技术的具体实施方式仅用于解释本专利技术，而非意图通过任何方式限制本专利技术。实施例1糖化血红蛋白检测试纸条的制备1.试剂1的制备本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，包括：免疫层析试纸条、试剂R1以及试剂R2；/n所述试剂R1包含1-10g/L的溶血剂，所述溶血剂优选为SDS；/n所述试剂R2包含0.05-0.2g/L示踪粒子标记抗人血红蛋白抗体。/n
【技术特征摘要】
1.一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，包括：免疫层析试纸条、试剂R1以及试剂R2；
所述试剂R1包含1-10g/L的溶血剂，所述溶血剂优选为SDS；
所述试剂R2包含0.05-0.2g/L示踪粒子标记抗人血红蛋白抗体。
2.根据权利要求1所述的一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，所述免疫层析试纸条包括：样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，所述硝酸纤维素膜上靠近样品垫端设置有1条或多条检测线，所述检测线为抗人糖化血红蛋白抗体，所述硝酸纤维素膜上靠近吸水垫端设置有1条质控线，所述质控线为羊抗鼠抗体。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，所述试剂R1还包括20-100mmol/L的缓冲液、0.1-0.8g/L的防腐剂、50-100mmol/L的氯化钠以及以及15-30ml/L的表面活性剂。
4.根据权利要求3所述的一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，所述缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种，所述表面活性剂选自Tween-20、Tween-80、曲拉通X100以及曲拉通X405中的至少一种。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，所述试剂R2还包括5-50mmol/L的缓冲液、2-10g/L的蛋白稳定剂、20-50g/L的保护剂、0.1-0.8g/L的防腐剂。
6.根据权利要求5所述的一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，所述试剂R2中缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述保护剂选自海藻糖或蔗糖中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种，所述蛋白稳定剂选自酪蛋白钠及其水解产物、BSA、脱脂奶粉、鱼明胶或氨基酸中的至少一种。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂，其特征在于，所述示踪粒子为彩色微球，优选为红色微球。
8.一种测...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖江涛，秦川，
申请(专利权)人：重庆中元汇吉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50
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