【技术实现步骤摘要】
一种真姬菇Finc-B-7菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用
本专利技术属于真姬菇菌种的检测
,具体涉及一种真姬菇Finc-B-7菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用。
技术介绍
真姬菇(拉丁文名Hypsizygusmarmoreus(Peck)H.E.Bigelow)属担子菌门、伞菌纲、伞菌目、离褶伞科,因其菌盖表面的大理石斑纹而得名。其外形美观、质地脆嫩、具有独特的海鲜味且价格经济,受到广大消费者喜爱。真姬菇不仅含有丰富维生素和18种氨基酸,近年研究还发现真姬菇中所含的小分子化合物、多糖和多肽等成分具有溶血、抗氧化、抑制白血病和淋巴瘤细胞、降血脂、抗炎和抗氧化等功能,是一种经济价值很高的食药兼用菌。自从2001年我国第一家真姬菇工厂化栽培企业成立以来,真姬菇成为了我国市场发展较快的新型食用真菌之一。2019年中国真姬菇工厂化总产量为32.8万吨,较2018年同比增长58.63%,占食用菌工厂化总产量的9.6%,在我国工厂化栽培食用真菌生产总量中排名第三。优质菌种在真姬菇的工厂化栽培中起着举足轻重的作用。目前,我国工厂化生产企业使用的真姬菇菌种主要为日本引入菌种或在其基础上进一步杂交选育而成,栽培后子实体为棕色的称为蟹味菇,子实体为白色的又称白玉菇或玉龙菇。尽管工厂化生产的产量逐年提升,但部分菌种仍存在栽培周期长、单产低、单根子实体外观整齐度差和易出现瘤盖等问题,这些缺陷都可能导致生产成本的增加,降低产品的市场竞争力。另一方面,由于真姬菇工厂化生产菌株的多样性不高,产品外观近似, ...
【技术保护点】
1.一种真姬菇Finc-B-7菌种的SSR标记指纹图谱,其特征在于:所述指纹图谱包括6对SSR标记,具体序列如下:/n
【技术特征摘要】
1.一种真姬菇Finc-B-7菌种的SSR标记指纹图谱,其特征在于:所述指纹图谱包括6对SSR标记,具体序列如下:
相应带型编号组合为:17/(9+8)/5/6/(13+16)/(7+9+11+4)。
2.权利要求1所述的真姬菇Finc-B-7菌种的SSR标记指纹图谱的构建方法,其特征在于:包括,
(1)菌丝培养:将真姬菇菌种转接到马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基上,22℃培养10-14d后收集菌丝;
(2)基因组DNA的提取:利用真菌DNA提取试剂盒,按照试剂盒实验步骤提取基因组DNA,并取2μLDNA进行1.2%琼脂糖凝胶电泳检测,紫外分光光度法检测总基因组DNA浓度和纯度,调整样品DNA的浓度一致;
(3)SSR分子标记引物开发:根据真姬菇菌株的基因组重测序结果,选取多态性序列设计SSR引物并合成;
(4)SSR分子标记的检测:对上述提取的DNA进行基因SSR标记的PCR扩增;
(5)电泳检测:将上述PCR扩增得到的产物与甲酰胺加样缓冲液混匀,变性,上机检测;
(6)GeneMapper数据分析;找到相应带型编号组合为17/(9+8)/5/6/(13+16)/(7+9+11+4)的菌种。
3.根据权利要求2所述的真姬菇Finc-B-7菌种的SSR标记指纹图谱的构建方法,其特征在于:所述步骤(2)基因组DNA的提取,其具体方法包括:
(1)将真菌样本加入液氮充分研磨;
(2)向研磨好的粉末中迅速加入360μLBufferSTE和40μLBufferSDS,迅速涡旋混匀后,将离心管放在65℃水浴15min,水浴过程中颠倒离心管以混合样本数次;
(3)加入5μLRNaseSolution至裂解液中,涡旋混匀,室温静置15-30min;
(4)加入140μLBufferPS,涡旋震荡30s,冰上放置10min;
(5)室温下,13000g离心5min,小心转移400μL上清液至新的离心管中;
(6)加入600μLBufferPBD至样品中,涡旋混匀30s;
(7)把DNA结合柱装在收集管,转移一半混合液至柱子中,8000g离心1min;
(8)倒弃滤液把柱子装回收集管,转移剩余混合液至柱子中,8000g离心1min;
(9)倒弃滤液把柱子装回收集管,加入600μLBufferGW2至柱子中,8000g离心1min;
(10)重复步骤9;
(11)倒弃滤液把柱子装回收集管,10000g离心2min去除柱子中残留的乙醇;
(12)将柱子转移至新的1.5mL离心管中,加入30μL预热至65℃的BufferAE至柱子的膜中央,室温静置...
【专利技术属性】
技术研发人员:王楠,陈静,李金鑫,李兆鹏,阿依尼尕尔·买合木提,曹娜,
申请(专利权)人:上海丰科生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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