一种真姬菇Finc-B-6菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种真姬菇Finc

【技术实现步骤摘要】
一种真姬菇Finc
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B
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6菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于真姬菇菌种的检测
，具体涉及一种真姬菇Finc
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B
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6菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]真姬菇(拉丁文名Hypsizygus marmoreus(Peck)H.E.Bigelow)属担子菌门、伞菌纲、伞菌目、离褶伞科，因其菌盖表面的大理石斑纹而得名。其外形美观、质地脆嫩、具有独特的海鲜味且价格经济，受到广大消费者喜爱。真姬菇不仅含有丰富维生素和18种氨基酸，近年研究还发现真姬菇中所含的小分子化合物、多糖和多肽等成分具有溶血、抗氧化、抑制白血病和淋巴瘤细胞、降血脂、抗炎和抗氧化等功能，是一种经济价值很高的食药兼用菌。自从2001年我国第一家真姬菇工厂化栽培企业成立以来，真姬菇成为了我国市场发展较快的新型食用真菌之一。2019年中国真姬菇工厂化总产量为32.8万吨，较2018年同比增长58.63％，占食用菌工厂化总产量的9.6％，在我国本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种真姬菇Finc
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6菌种的SSR标记指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱包括6对SSR标记，具体序列如下：相应带型编号组合为：14/(5+6)/(2+5+8)/(1+10)/(12+16)/(4+10)。2.权利要求1所述的真姬菇Finc
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6菌种的SSR标记指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括，(1)菌丝培养：将真姬菇菌种转接到马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基上，22℃培养10
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14d后收集菌丝；(2)基因组DNA的提取：利用真菌DNA提取试剂盒，按照试剂盒实验步骤提取基因组DNA，并取2μL DNA进行1.2％琼脂糖凝胶电泳检测，紫外分光光度法检测总基因组DNA浓度和纯度，调整样品DNA的浓度一致；(3)SSR分子标记引物开发：根据真姬菇菌株的基因组重测序结果，选取多态性序列设计SSR引物并合成；(4)SSR分子标记的检测：对上述提取的DNA进行基因SSR标记的PCR扩增；(5)电泳检测：将上述PCR扩增得到的产物与甲酰胺加样缓冲液混匀，变性，上机检测；(6)GeneMapper数据分析；找到相应带型编号组合为14/(5+6)/(2+5+8)/(1+10)/(12+16)/(4+10)的菌种。3.根据权利要求2所述的真姬菇Finc
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B
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6菌种的SSR标记指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)基因组DNA的提取，其具体方法包括：(1)将真菌样本加入液氮充分研磨；(2)向研磨好的粉末中迅速加入360μLBufferSTE和40μL Buffer SDS，迅速涡旋混匀后，将离心管放在65℃水浴15min，水浴过程中颠倒离心管以混合样本数次；(3)加入5μL RNase Solution至裂解液中，涡旋混匀，室温静置15
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30min；(4)加入140μL Buffer PS，涡旋震荡30s，冰上放置10min；(5)室温下，13000g离心5min，小心转移400μL上清液至新的离心管中；(6)加入600μL Buffer PBD至样品中，涡旋混匀30s；
(7)把DNA结合柱装在收集管，转移一半混合液至柱子中，8000g离心1min；(8)倒弃滤液把柱子装回收集管，转移剩余混合液至柱子中，8000g离心1min；(9)倒弃滤液把柱子装回收集管，加入600μL Buffer GW2至柱子中，8000g离心1min；(10)重复步骤9；(11)倒弃滤液把柱子装回收集管，10000g离心2min去除柱子中残留的乙醇；(12)将柱子转移至新的1.5mL离心管中，加入30μL预热至65℃的Buffer AE至柱子的膜中央，室温静置2min，10000g离心1min；(13)取2μL DNA用于1.2％琼脂糖凝胶电泳检测，取2μL DNA用于NanoDrop分光光度计测浓度，剩余DNA保存于
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20℃。4.根据权利要求2所述的真姬菇...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴惠敏，陈静，王富强，李兆鹏，曹娜，
申请(专利权)人：上海丰科生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：