犬腺病毒2型弱毒疫苗株及其应用制造技术

本发明专利技术实施例涉及一种犬腺病毒2型弱毒疫苗株及其应用，该犬腺病毒2型弱毒疫苗株保藏号为CGMCC No.19992。本发明专利技术犬腺病毒2型(CAV2/15株)弱毒株为分离的自然弱毒株，具有以下优点：其培养毒价高，每毫升稳定在10

【技术实现步骤摘要】
犬腺病毒2型弱毒疫苗株及其应用
本专利技术属于生物制品领域。本专利技术涉及犬腺病毒2型弱毒疫苗株及其应用。
技术介绍
犬腺病毒包括犬腺病毒1型(Canineadenovirusvirus1,CAV1)和犬腺病毒2型(CAV2)，犬腺病毒2是引起犬传染性喉气管炎(canineinfectiouslaryngotracheitis，CIL)的主要病原。本病为高度接触性传染病，各种年龄犬均可感染，尤其是4月龄以下的幼犬，可以造成全窝或全群咳嗽，因此该病依临床特征常称为"犬窝咳"，可导致幼犬发育不良。临床症状主要表现持续性高热、咳嗽、浆液性至粘液性鼻漏、扁桃体炎、喉气管炎和肺炎，幼犬的症状通常比较严重。病理变化主要见肺炎和支气管炎病变，肺充血、实变、膨胀不全，支气管淋巴结充血、管腔有大量分泌物。本病常与犬副流感病毒、疱疹病毒病等混合感染，这时症状复杂而严重，死亡率增高。对于本病尚无特效疗法，防制本病的最有效措施是定期接种犬腺病毒2型疫苗。犬腺病毒2型在我国普遍存在，且发病率较高，对犬危害较大。为预防该类传染病，国内外都在进行大量研究，但目前疫苗存在针对性不强、造价高等缺点，研制新型高效的犬腺病毒2型疫苗尤为重要。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
专利技术目的本专利技术的目的在于提供一株犬腺病毒2型弱毒疫苗株及其应用。解决方案为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术目的之一是提供一株犬腺病毒2型弱毒疫苗株，其保藏号为：CGMCCNo.19992。在一种可能的实现方式中，犬腺病毒2型弱毒CAV2/15株在MDCK细胞上传代50代，其培养毒价稳定在每毫升109.0TCID50以上。在一种可能的实现方式中，犬腺病毒2型弱毒CAV2/15株免疫剂量低，最小免疫剂量为103.0TCID50。在一种可能的实现方式中，犬腺病毒2型弱毒CAV2/15株在MDCK细胞上传代50代，对犬安全，无致病性。在一种可能的实现方式中，犬腺病毒2型弱毒CAV2/15株注射20倍免疫剂量(2×106TCID50)仍然对犬安全。本专利技术目的之二是提供一种上述犬腺病毒2型弱毒疫苗株在制备治疗、预防犬腺病毒2型所致疾病的药物中的应用。在一种可能的实现方式中，所述药物包括疫苗；可选地，所述疫苗为：犬腺病毒2型弱毒疫苗或犬腺病毒2型弱毒疫苗株与其它病原体联合制备的多联苗。在一种可能的实现方式中，其它病原体选自以下的一种或多种：犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒1型、犬冠状病毒。本专利技术目的之三是提供一种犬腺病毒2型弱毒疫苗，其包括上述犬腺病毒2型弱毒疫苗株及药学上可接受的辅料。在一种可能的实现方式中，犬腺病毒2型弱毒疫苗株以含有犬腺病毒2型弱毒疫苗株的病毒液形式加入，所述含有犬腺病毒2型弱毒疫苗株的病毒液通过以下方法制备：犬腺病毒2型病毒毒种按2％比例接种于MDCK单层细胞，37℃培养4～5天，当细胞病变达到80％以上收获病毒液。在一种可能的实现方式中，所述药学上可接受的辅料包括耐热稳定剂，所述耐热稳定剂为冻干保护剂且包括以下配方：脱脂奶粉1000g，蔗糖80g，明胶25g分别用适量注射用水溶解，115℃灭菌20分钟；VC200g，谷氨酸钠100g，两性霉素5.0mg，溶解过滤除菌，定溶为10000mL。在一种可能的实现方式中，所述犬腺病毒2型弱毒疫苗在免疫后，可产生较高的抗体，强毒攻击可达100％(5/5)的保护，免疫期1年以上。在一种可能的实现方式中，用冻干保护剂制备冻干苗，4℃条件下可保存2年以上。在一种可能的实现方式中，所述犬腺病毒2型弱毒疫苗适用于各种品种、各种年龄的犬；可选地，所述犬腺病毒2型弱毒疫苗也适用于怀孕犬。本专利技术目的之四是提供一种多联疫苗，其包括上述犬腺病毒2型弱毒疫苗株、其它病原体及药学上可接受的辅料。在一种可能的实现方式中，其它病原体选自以下的一种或多种：犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒1型、犬冠状病毒。本专利技术目的之五是提供一种上述犬腺病毒2型弱毒疫苗株在制备诊断或检测犬腺病毒2型所致疾病的试剂中的应用。有益效果1、本专利技术犬腺病毒2型(CAV2/15株)弱毒株为分离的自然弱毒株，具有以下优点：(1)其培养毒价高，每毫升稳定在109.0TCID50/ml；(2)其免疫剂量低，最小免疫剂量为103.0TCID50，使用105.0TCID50可达到很好的免疫效果；(3)其可用于各种品种、各种年龄的犬，也可用于怀孕犬；(4)其使用安全，超剂量注射(注射20倍免疫剂量)仍然对犬安全；(5)其生产工艺简单，用MDCK细胞培养即可，对设备要求不高，适合于工业化大规模生产；(6)其遗传性状稳定，经传代50代后未出现碱基的缺失或突变、毒力和病毒毒价均未发生任何改变、也无毒力返强、无致病作用；(7)其对氯仿不敏感、对乙醚不敏感、对胰蛋白酶敏感、耐酸性较强、有一定耐热性，既可单独制成疫苗、还可以与其它病原体制成联苗。2、本专利技术犬腺病毒2型(CAV2/15株)弱毒株制备的活疫苗，具有免疫产生期早，免疫持续期长，不受母源抗体干扰的优点。附图说明一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。图1为犬腺病毒2型CAV2/15株毒电镜照片。图2为犬腺病毒2型CAV2/15株毒的PCR扩增的电泳鉴定图。M:DL2000Marker，1:CAV2阳性对照，2:CAV2/15分离株，3:阴性对照。本专利技术将所涉及犬腺病毒2型弱毒株(CAV2/15株)提交专利认可机构保藏(即保藏证明中的200611株)，微生物保藏号为：CGMCCNo.19992；保藏时间是：2020年6月12日；保藏单位是：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。另外，为了更好的说明本专利技术，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本专利技术同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本专利技术的主旨。除非另有其它本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株犬腺病毒2型弱毒疫苗株，其特征在于：保藏号为CGMCC No.19992。/n

【技术特征摘要】
1.一株犬腺病毒2型弱毒疫苗株，其特征在于：保藏号为CGMCCNo.19992。


2.一种权利要求1所述的犬腺病毒2型弱毒疫苗株在制备治疗、预防犬腺病毒2型所致疾病的药物中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述药物包括疫苗；可选地，所述疫苗为：犬腺病毒2型弱毒疫苗或犬腺病毒2型弱毒疫苗株与其它病原体联合制备的多联苗。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：其它病原体选自以下的一种或多种：犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒1型、犬冠状病毒。


5.一种犬腺病毒2型弱毒疫苗，其特征在于：包括权利要求1所述的犬腺病毒2型弱毒疫苗株及药学上可接受的辅料。


6.根据权利要求5所述的一种犬腺病毒2型弱毒疫苗，其特征在于：所述犬腺病毒2型弱毒疫苗株以含有犬腺病毒2型弱毒疫苗株的病毒液形式加入，所述含有犬腺病毒2型弱毒疫苗株的病毒液通过以下方法制备：犬腺病毒2型...

【专利技术属性】
技术研发人员：金扩世，韩俊国，贺亚奇，胡义彬，李晓亮，李三鹏，尚川川，商云鹏，赵卓，王力，江厚生，
申请(专利权)人：北京华夏兴洋生物科技有限公司，北京生泰尔科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11