悬浮培养的牛肾细胞及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了悬浮培养的牛肾细胞及其制备方法与应用，属于动物细胞培养领域。本发明专利技术所要解决的技术问题是如何高密度体外培养牛肾细胞和/或提高利用牛肾细胞培养病毒的病毒产量。为了解决该技术问题，本发明专利技术提供了一种牛肾细胞MDBK

【技术实现步骤摘要】
悬浮培养的牛肾细胞及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及动物细胞培养领域，具体涉及悬浮培养的牛肾细胞及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]MDBK细胞是牛肾细胞，由S H Madin和N B Darby从一头健康的成年牛肾脏组织中分离培养建立的贴壁培养型传代细胞系，细胞生长力强，被广泛用于病毒感染、检测和培养领域。
[0003]MDBK细胞呈贴壁型生长，由于其贴壁生长特性的限制，多采用转瓶培养方式和微载体培养方式进行生产，但贴壁培养的生产周期长，下游工艺相对复杂，工业化大规模生产的难度较大。悬浮培养相比贴壁培养的优势在于，生产放大工艺简单，可连续测定细胞浓度，连续收集部分细胞进行继代培养，也无须消化分散，细胞收率高，批间差异较小，劳动强度小，占地空间少，生产效率提升明显。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是如何高密度体外培养牛肾细胞和/或提高利用牛肾细胞培养病毒的病毒产量。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛肾细胞，其特征在于，所述牛肾细胞名称为MDBK
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V，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.45244。2.权利要求1所述牛肾细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：A1）将带有ST6GalNac V基因的重组质粒转染至MDBK细胞中，获得表达ST6GalNac V基因的重组细胞；A2）对所述重组细胞进行低血清悬浮驯化获得所述牛肾细胞MDBK
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V；所述低血清悬浮驯化包括在含2%胎牛血清的培养基中进行培养。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述低血清悬浮驯化包括如下步骤：B1）将所述重组细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行传代培养；B2）用由DMEM培养基与DMEM悬浮培养基混合而成的混合培养液进行传代培养，所述混合培养液中含10%胎牛血清；B3）用低血清培养基传代培养，获得MDBK悬浮细胞株；B4）用低血清培养基传代培养所述MDBK悬浮细胞株，驯化后获得所述牛肾细胞MDBK
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V；所述低血清培养基为含2%胎牛血清的培养基。4.权利要求1所述牛肾细胞的培养方法，其特征在于，所述方法包括：将所述牛肾细胞在低血清培养基中悬浮培养扩增，然后接种至生物反应器，继续用低血清培养基在温度37℃、CO2浓度为5%、溶氧30%~40%和pH 7.0
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7.2的条件下培养，所述低血清培养基为含2%胎牛血清的培养基。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在接种至生物反应器后的培养过程中，补加所述低血清培养基，然后在温度37℃、溶氧50%
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60%和p...

【专利技术属性】
技术研发人员：武春霞，严永，王小霞，武沛泽，胡义彬，赵卓，郭荣，江厚生，
申请(专利权)人：北京华夏兴洋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：