一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取和文库构建方法技术

本发明专利技术提供了一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取和文库构建方法，属于医学和生物技术领域。通过添加助沉试剂到尿液中实现外泌体有效沉降，解决RNA材料受限的问题，同时采用Trizol试剂直接对外泌体进行RNA提取且去除回溶、纯化步骤，减少RNA在提取中损失和降解，为后续建库提供合格原料。通过修复cDNA损伤，优化末端修复加A、纯化步骤，以及文库扩增反应循环数，使用高保真酶预混液进行PCR扩增进行建库，该文库保存了外泌体分子多样性，为NGS技术在液体活检和诊断的应用提供可靠样本。该方法有效解决了尿液样本外泌体含量低，提取RNA总量低，无法有效建库，利用NGS平台测序的难题。利用NGS平台测序的难题。利用NGS平台测序的难题。

【技术实现步骤摘要】
一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取和文库构建方法


[0001]本专利技术属于医学和生物
，具体涉及一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取和文库构建方法。

技术介绍

[0002]外泌体(Exosomes)，或称细胞外囊泡(EV)，是数种起源与功能不同的，具有双层膜结构，直径为30nm～200nm的囊泡结构。其功能有参与细胞之间的信息传递与物质交换、对宿主
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病原体相互关系的调节、炎症反应的介导等。外泌体的成分包括DNA、RNA、糖类、脂类与蛋白质等，由于其参与多种生理与病理过程，其成分可以作为对多种传染性疾病与肿瘤诊断的生物标志物。利用外泌体来源的生物标志物进行诊断，已经成为现代医学最受关注的新领域。通过NGS技术对外泌体来源的核酸进行测序，是这一领域目前最广泛使用的手段。
[0003]尿液作为一种人类体液，在液体活检和生物医学诊断中具有其独特优势
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方便获得与收集，且收集过程对受检者无伤害，这一特征是血液、恶性积液、穿刺组织等无可比拟的。当前，尿液外泌体技术具有广泛应用前景，而对其应用研本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)尿液样本去除细胞或细胞碎片后，与助沉试剂混合，分离外泌体；2)用Trizol试剂与所述外泌体混合，静置，得到混合液；3)将所述混合液和溴氯丙烷混合，静置，收集水相，依次经异丙醇和体积浓度75％的乙醇水溶液纯化，离心收集上清液得到外泌体RNA。2.根据权利要求1所述用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取方法，其特征在于，所述助沉试剂包括PEG 8000分离液。3.根据权利要求2所述用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取方法，其特征在于，所述PEG 8000分离液为300～600g/L PEG 8000和0.5～2.5M NaCl的水溶液。4.根据权利要求1所述用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取方法，其特征在于，尿液样本与助沉试剂的体积比为2：0.5～1.5。5.根据权利要求1所述用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取方法，其特征在于，Trizol试剂的体积和外泌体的质量比为1mL：5～30mg。6.根据权利要求1～5任意一项所述用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取方法，其特征在于，所述混合液和溴氯丙烷的体积比为1：(0.2～...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明炎，张晓妮，李慧，林郁松，
申请(专利权)人：深圳海普洛斯医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：