一种DNA甲基化靶向富集的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种DNA甲基化靶向富集的方法，特异性富集甲基化修饰DNA片段。通过本发明专利技术所得到的靶向富集后的DNA可广泛应用于下游诸多分子诊断，如基于检测母体血浆中胎儿游离DNA的无创性产前分子诊断(NITP)，病原微生物检测，肿瘤伴随诊断等。肿瘤伴随诊断等。

【技术实现步骤摘要】
一种DNA甲基化靶向富集的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及分子检测
，具体涉及一种DNA甲基化靶向富集的方法及其应用。

技术介绍

[0002]自从Mander和Metais于1948年发现人体外周血中存在着细胞外游离DNA和RNA后，游离核酸的检测作为一种有效的微创性诊疗手段广泛应用于临床的各个方面，如肿瘤的发生发展、妊娠相关性疾病、自身免疫病、移植排斥反应、创伤急救医学等，其检测在疾病的早期诊断、分期、治疗检测、预后判断以及产前分子诊断等方面有着重要意义。
[0003]来自美国宾夕法尼亚大学的研究人员便注意到了AID/APOBEC家族DNA脱氨酶的酶促脱氨作用。这种脱氨反应可以实现亚硫酸氢盐的作用，且不会损伤DNA。基于此，研究人员开发了一种全新的表观遗传测序方法ACE
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seq(APOBEC
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coupled epigenetic sequencing)，而无需亚硫酸氢盐，可在单碱基分辨率条件下进行5
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羟甲基胞嘧啶(5hmC)的检测定位，获得高置信度的5hmC图谱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA甲基化靶向富集的方法，其特征在于，该方法是体外方法，其包括如下步骤：(1)样本DNA片段化；(2)以胸腺嘧啶DNA糖基化酶处理片段化的DNA，将DNA中5
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羧基胞嘧啶切除，通过DNA剪切修复途径，在5
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羧基胞嘧啶切除位点加上非甲基化的胞嘧啶；(3)利用转糖酶将带有葡糖基的糖化物共价连接到步骤(2)获得的DNA的5
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羟甲基胞嘧啶的羟甲基上，形成β
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葡糖基
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羟甲基胞嘧啶；(4)利用双加氧酶处理DNA或者利用其他化学法，将DNA中5
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甲基胞嘧啶转变为5
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羧基胞嘧啶或者5
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醛基胞嘧啶；(5)将步骤(4)的产物利用化学标记的方法继续富集，之后进行建库测序。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胸腺嘧啶DNA糖基化酶包括：全长...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小刚，贾鑫淼，肖盟，徐英春，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：