一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法技术

一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法，本发明专利技术涉及一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法。本发明专利技术的目的是要解决当研究对象的标本数量小时，现有方法所提RNA的数量和质量难以满足转录组测序要求的问题，本发明专利技术利用硅藻土吸附植物病原线虫，在离心作用下除去多余水分后液氮速冻研磨，进行初步的组织细胞破碎。利用金刚砂的摩擦粉碎作用进一步充分破胞，通过震荡作用和金刚砂的摩擦将吸附在硅藻土中的松材线虫充分释放并将其粉碎。震荡、金刚砂粉碎和裂解液裂解，三种作用的联合使用，使得细胞充分释放和进一步充分裂解，做到在微量标本条件下获得高质量RNA。本发明专利技术应用于生物技术领域。本发明专利技术应用于生物技术领域。本发明专利技术应用于生物技术领域。

【技术实现步骤摘要】
一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法


[0001]本专利技术涉及一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法。

技术介绍

[0002]植物病原线虫严重威胁植物的健康生长，对我国农业、林业造成了严重的经济、生态损失。由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)引起的松树萎蔫病(pine wilt disease)，能够对松树造成毁灭性伤害，被称为“松树癌症”。松材线虫早已被列为重点检疫对象，对松材线虫的防治刻不容缓。总RNA的提取是植物病原线虫分子生物学研究中的基本实验操作，但在标本数量小等特殊情况下难以完成。例如松材线虫抗逆态幼虫等特殊虫龄的线虫，标本数量小，传统技术提取RNA的数量和质量难以满足cDNA文库构建和RT-PCR等实验要求，特别是转录组测序的要求，阻碍了分子生物学技术在松材线虫研究中的应用。
[0003]在提取植物病原线虫RNA的过程中，组织细胞的破碎是至关重要的一步。当组织细胞充分破碎，才能保证核酸全部释放并被完全溶解。而提取植物病原线虫RNA时，以水为载体收集到的线虫，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、用吸附材料硅藻土充分吸附待提RNA的松材线虫，4500-13000rpm下离心1-10min，得到带有松材线虫的硅藻土；二、取出带有松材线虫的硅藻土，液氮速冻后研磨破碎，加入无菌金刚砂及裂解液，然后置于震荡仪上充分震荡1-15min，再在4500-13000rpm下离心1-10min，取上清液，然后提取RNA，即完成微量植物病原线虫RNA提取；其中无菌金刚砂及裂解液的加入量为：500-30000条松材线虫中加入1mL裂解液和5-100mg无菌金刚砂。2.根据权利要求1所述的一种满足转录组测序要求的微量植物病原线虫RNA提取方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王峰，张瑞芝，王佳楠，陈俏丽，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：