用于病毒核酸检测的样本释放剂、试剂盒及预处理方法技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术，旨在提供一种用于病毒核酸检测的样本释放剂、试剂盒及预处理方法。该样本释放剂能够同时用作样本保存、蛋白裂解、核酸释放与保存用途，其所含组分及浓度关系为：KCl，40mM；非离子表面活性剂Triton X

【技术实现步骤摘要】
用于病毒核酸检测的样本释放剂、试剂盒及预处理方法


[0001]本专利技术涉及病毒检测技术，特别涉及用于病毒核酸检测的样本释放剂、试剂盒及预 处理方法。

技术介绍

[0002]现行传统的病毒样本保存液主要有灭活型和非灭活型两种。非灭活型病毒样本保存 液主要是Hank氏病毒保存液，是病毒运送的常见的平衡盐溶液(Balanced Salt Solution， BSS)。受各种因素的影响，Hank's液保存病毒只能保存数个小时，数个小时之后病毒 形态就会受到影响，进而会影响到病毒的核酸检测效率。如果时间再延长一些，那么还 很容易滋生细菌、真菌，导致Hank's液pH值下降，加速病毒降解，所以很难用于病毒 的长期保存与核酸检测。灭活型病毒保存液常见的是基于胍盐的病毒保存液。其中的盐 酸胍或者Rnasin的浓度相对而言较高(3-5M)，高浓度的胍盐适用于常温下的病毒灭 活。但是由于胍盐浓度太高，对于诸如磁珠法的核酸提取或纯化有很大的抑制作用，需 要多次洗涤或者用于离心柱的方式才可进行。并且，后续的病毒培养等试验无法使用胍 盐保存液。
[0003]PCR(Polymerase Chain Reaction)——聚合酶链式反应经过世界范围内无数学者的 不断补充完善，已经成为整个生命科学领域应用最广泛、使用频率最高也是最重要的基 础研究手段。传统PCR技术以及在此基础上衍生出来的各项新技术新应用，都有一个 前提，就是需要事先获得高纯度的核酸模版。DNA与RNA的分离提取一直以来都是相 关科研技术人员每天需要不断重复的基础工作。新的Direct PCR技术(直扩法)解决了 这一难题。Direct PCR技术是指无需对核酸进行分离提取，直接以组织样本为对象，加 入目标基因引物进行PCR反应。它的模板既包括传统的DNA模版，也包含RNA模版 的逆转录PCR。Direct PCR技术不仅仅是直接对组织样本进行常规定性PCR反应，还 包括Real-Time qPCR反应，这就要求反应体系具备极强的抗背景荧光干扰能力以及对 内源性荧光淬灭剂的拮抗能力。Direct PCR技术针对的组织样本，只需要核酸模版的释 放，并不对干扰PCR反应的蛋白、多糖、盐离子等进行去除，这要求反应体系中的保 存液可以保护核酸聚合酶和PCR Mix的功能，能够在复杂的条件下保证酶活性和复制 准确性。
[0004]在发生重大疫情(例如，2019-2020年发生的新冠2019-nCoV疫情)的时候，更加 倾向于直扩法检测，可以节省检测时间，提高效率，会对整个疫情的攻克带来巨大的贡 献。但是，现行常见的病毒预处理液，例如Hank氏病毒保存液和基于胍盐的保存液均 不能很好的用于后续的直扩法检测，从而很难用于病毒样本的快速检测和筛查的应用场 景中。因此，本领域需求一种能够很好适配于基于直扩法的病毒核酸检测的样本保存 液。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种用于病毒核酸检测 的样本释放剂、试剂盒及预处理方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的解决方案是：
[0007]提供一种用于病毒核酸检测的样本释放剂，其所含组分及浓度关系为：
[0008]KCl，40mM；
[0009]非离子表面活性剂Triton X-100，质量百分比浓度为0.1％；
[0010]防腐剂BND-10，质量百分比浓度为0.1％；
[0011]余量为去离子水。
[0012]本专利技术还提供了一种试剂盒，包括能够同时用作样本保存、蛋白裂解、核酸释放与 保存用途的样本释放剂；该样本释放剂的组分及浓度关系为：
[0013]KCl，40mM；
[0014]非离子表面活性剂Triton X-100，质量百分比浓度为0.1％；
[0015]防腐剂BND-10，质量百分比浓度为0.1％；
[0016]余量为去离子水。
[0017]本专利技术提供了前述样本释放剂在病毒核酸检测中用作样本保存、蛋白裂解、核酸释 放与保存的用途。
[0018]本专利技术进一步提供了利用前述样本释放剂进行病毒核酸检测预处理的方法，包括步 骤：
[0019](1)将病毒样本浸入样本释放剂中，摇晃、混匀后得到细胞保存液，保存备用；
[0020](2)将细胞保存液涡旋混匀，吸取PCR扩增所需用量，加入等体积的样本释放剂； 混合均匀后在4～37℃条件下放置10min，得到完成核酸释放的待检样本混合液；
[0021](3)直接将待检样本混合液用于荧光定量PCR检测；或者，将待检样本混合液保 存在4～37℃条件下，备用于荧光定量PCR检测。
[0022]本专利技术中，所述步骤(1)、(3)中，所述保存时间均控制在15天内。
[0023]本专利技术中，所述步骤(2)中，在吸取PCR扩增所需用量后，先在12000rpm离心 10min，弃上清；再加入等体积的样本释放剂。
[0024]专利技术原理描述：
[0025]非离子表面活性剂Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)在多个
均有广泛 应用。例如在农药、橡胶工业用作乳化剂，建筑行业用作沥青乳化剂；气相色谱固定液、 分离分析烃类化合物、含氧化合物。可广泛的应用于不同的学科领域。在显微镜和组织 学实验室，其稀释的溶液可作为润湿剂，协助染色，并可作为清洁剂对钻石刀进行清洁。 在电子工业领域，该产品的作为晶片清洁剂，以便增强和加速某些程序和操作。在生命 科学领域，该产品经常被用于水中帮助分解蛋白酶；但是，必须使用尽可能低的浓度否 则会污染样品，污染还会影响MS分析。该产品通常还作为聚合乳液的配方使用。
[0026]本专利技术通过使用非离子表面活性剂Triton X-100代替传统的胍盐的使用，其作用原 理是：使用中性的表面活性剂裂解病毒的同时，提高了核酸保存的稳定性。保证已释放 的核酸可直接进行后续PCR反应，取代了核酸提取步骤；另一方面，可以直接使用本 样本释放剂完成采样工作，采集的生物标本可室温存放15天。因此，本专利技术能够有效 地对含有病原体的样本进行裂解，释放其中的核酸，并降低对下游实验的抑制，大大缩 短了检测时间，同时病原体DNA/RNA充分释放且本身不干扰后续PCR的扩增。
[0027]现有技术中，也会采用Triton X-100或SDS、胍盐等进行样本裂解与核酸释放，但 通常需要加入裂解、洗涤、洗脱等繁琐的提取步骤，这就导致了预处理试剂复杂、操作 流程
多、检验时间延长等问题，无法适应重大疫情等特殊情况下的大批量样本、快速出 结果的要求。本专利技术所提供的样本释放剂，通过合理搭配辅助试剂，能够同步完成样本 保存、蛋白裂解、核酸释放与保存；并且，无需提纯步骤即可直接用于检测，且由于保 存方式灵活，极大提高了样本处置时间的可计划性，提供了样本大批量快速处理的可能 性、样本复查复检的便利性。
[0028]与现有技术相比，本专利技术的技术效果是：
[0029]1、本专利技术采用的核酸释放剂使用非离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于病毒核酸检测的样本释放剂，其特征在于，其所含组分及浓度关系为：KCl，40mM；非离子表面活性剂Triton X-100，质量百分比浓度为0.1％；防腐剂BND-10，质量百分比浓度为0.1％；余量为去离子水。2.一种试剂盒，其特征在于，包括能够同时用作样本保存、蛋白裂解、核酸释放与保存用途的样本释放剂；该样本释放剂的组分及浓度关系为：KCl，40mM；非离子表面活性剂Triton X-100，质量百分比浓度为0.1％；防腐剂BND-10，质量百分比浓度为0.1％；余量为去离子水。3.权利要求1所述样本释放剂在病毒核酸检测中用作样本保存、蛋白裂解、核酸释放与保存的用途。4.利用权利要求1所述样本释放剂进行病毒核酸检测预处理的...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚慧捷，李杨霞，
申请(专利权)人：江苏默乐生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：