一种重组谷氨酸棒杆菌及谷胱甘肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种重组谷氨酸棒杆菌及谷胱甘肽的制备方法，所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌中过表达双功能谷胱甘肽合成酶的基因。采用本发明专利技术的谷氨酸棒杆菌基因工程菌作为出发菌株，通过发酵法生产谷胱甘肽，不仅谷胱甘肽产量高、得率高，而且操作简单、方便，同时食品级的谷氨酸棒杆菌安全无毒，符合节约资源、环境友好的生产理念，本发明专利技术为重组谷氨酸棒杆菌工业化生产谷胱甘肽提供了参考和借鉴。业化生产谷胱甘肽提供了参考和借鉴。

【技术实现步骤摘要】
一种重组谷氨酸棒杆菌及谷胱甘肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种利用重组谷氨酸棒杆菌制备谷胱甘肽的方法。

技术介绍

[0002]谷胱甘肽(γ
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L
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glutamyl
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cysteinyl
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glycine，GSH)是由L
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谷氨酸、L
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半胱氨酸和甘氨酸三种氨基酸缩合而成的一种活性三肽类化合物，广泛存在于各种生物体内。还原型的谷胱甘肽在活组织中具有许多重要的功能，谷胱甘肽可以提高人体免疫力、抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大，谷胱甘肽对于治疗放射线、放射性药物所引起的白细胞减少等症状也都具有非常显著的效果。
[0003]目前谷胱甘肽的制备方法很多，常见的包括溶剂萃取法、化学合成法、生物发酵法和酶法。目前国内外生产谷胱甘肽主要是是采用发酵法或酶法，发酵法主要是将编码合成谷胱甘肽酶系或者双功能酶的基因克隆到大肠杆菌或酵母中，发酵培养获得谷胱甘肽，发酵法中酵母发酵法工艺较成熟。专利CN20本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种谷氨酸棒杆菌基因工程菌，其特征在于：所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌中过表达双功能谷胱甘肽合成酶的基因。2.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌，其特征在于：所述的双功能谷胱甘肽合成酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.一种如权利要求1或2所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将所述的双功能谷胱甘肽合成酶的基因克隆到pEC
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XK99E质粒上，得到重组质粒；(2)将所述的重组质粒转化谷氨酸棒杆菌，得到所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(1)的具体方法为：以质粒pET28a
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gshFst为模板进行DNA的扩增，然后将扩增产物或质粒采用BamHI和PstI进行双酶切，再与经BamHI和PstI酶切处理后的所述的pEC
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XK99E质粒进行连接，得到所述的重组质粒。5.一种谷胱甘肽的制备方法，其特征在于：采用权利要求1或2所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌生产所述的谷胱甘肽。6.根据权利要求5所述的谷胱甘肽的制备方法，其特征在于：采用补料分批发酵法生产所述的谷胱甘肽；生产所述的谷胱甘肽时添加谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸，且添加的所述的谷氨酸、所述的甘氨酸、所述的半胱氨酸在反应体系中的初始浓度范围分别为80～120...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦建国，刘世领，李志敏，王德正，
申请(专利权)人：上海青平药业有限公司，
类型：发明
国别省市：