基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗、制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，公开了一种基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗、制备方法和应用，制备方法包括：制备肺炎克雷伯菌强毒NTUH

【技术实现步骤摘要】
基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗、制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，尤其涉及一种基因缺失型肺炎克雷伯菌减 毒活疫苗、制备方法和应用。

技术介绍

[0002]目前，肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是社区获得性感染的重要病原 之一，也可引起医院感染暴发流行，感染后可引起肺炎、菌血症、泌尿系统感 染等。定植在患者肠道的肺炎克雷伯菌高黏菌株(主要为K1、K2血清型， LD
50
<100CFU)可以通过肠道侵袭感染引起肝(肾)脓肿及脑部感染，死亡率 高达10％
‑
30％。由于广谱抗生素的广泛使用，多重耐药与泛耐药肺炎克雷伯菌 逐渐增多，肺炎克雷伯菌已经成为产超广谱β
‑
内酰胺酶(ESBLs)及碳青霉烯酶 (KPC酶)的代表菌种，此类肺炎克雷伯菌引起血液感染的致死率高达50％。
[0003]因此疫苗研究是肺炎克雷伯菌防治研究的一个重要方向。总的来说疫苗包 括灭活疫苗、减毒活疫苗、重组疫苗、亚单位疫苗等。对于肺炎克雷伯菌感染 来说，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种减毒活疫苗评估方法，其特征在于，所述减毒活疫苗评估方法使用肺炎克雷伯菌KP1_RS12260基因缺失株。2.如权利要求1所述的减毒活疫苗评估方法，其特征在于，所述减毒活疫苗对应肺炎克雷伯菌KP1_RS12260基因序列为SEQ ID NO：1。3.如权利要求1所述的减毒活疫苗评估方法，其特征在于，所述减毒活疫苗对应肺炎克雷伯菌KP1_RS12260蛋白序列为SEQ ID NO：2。4.一种基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗的制备方法包括：制备肺炎克雷伯菌强毒NTUH
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K2044株KP1_RS12260基因缺失菌株，并对肺炎克雷伯菌KP1_RS12260基因缺失株不同途径感染小鼠致病性进行分析；选用肺炎克雷伯菌强毒NTUH
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K2044株KP1_RS12260基因缺失菌株，用LB培养基在细菌摇床上培养增殖过夜；于第二天稀释至新鲜的LB培养液中培养，离心收集离心沉淀物后用生理盐水洗菌后以生理盐水重悬；进行肺炎克雷伯菌KP1_RS12260基因缺失减毒活疫苗功效试验。5.如权利要求4所述的基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述肺炎克雷伯菌强毒NTUH
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K2044株KP1_RS12260基因缺失菌株的制备方法，包括：(1)利用融合PCR的方法获得肺炎克雷伯菌KP1_RS12260基因上下侧翼序列的一个1669bp的基因片段；(2)克隆至温度敏感性自杀载休pKO3
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Km上获得重组突变盒质粒，电转至肺炎克雷伯菌野生株NTUH
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K2044中获得KP1_RS12260基因缺失株ΔKP1_RS12260。6.如权利要求4所述的基因缺失型肺炎克雷伯菌减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述对肺炎克雷伯菌KP1_R...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蓓，徐丽，
申请(专利权)人：湖北医药学院，
类型：发明
国别省市：