用于检测癌症相关细胞群体、进行转移性癌症筛查及治疗的方法技术

本发明专利技术提供了涉及已标记细胞悬液测定以检测癌症相关细胞及其群体和/或进行转移性癌症筛查等的方法。可以对已标记细胞悬液进行测定，以检测受试者的细胞悬液中是否存在肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体。目的癌症相关细胞群体包括诸如表达一种或更多种标志物的细胞群体，包括其中所述标志物是标志物组的成员。所测定的标志物可以根据上下文而变化，并且可以包括蛋白标志物、核酸标志物、细胞周期标志物、DNA含量标志物等。有用的标志物包括一种或更多种免疫检查点标志物和/或一种或更多种免疫细胞类型标志物，包括其中所测定的标志物是一个或更多个标志物组的一部分。本发明专利技术还提供了基于来自受试者的已标记细胞悬液样本的测定结果来治疗受试者的瘤形成的方法。本发明专利技术还提供了用于实施所述方法的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测癌症相关细胞群体、进行转移性癌症筛查及治疗的方法相关专利申请的交叉引用根据《美国法典》第35章第119节(e)项的规定，本专利申请案主张于2018年7月2日提交的编号为62/693,235以及于2019年1月14日提交的编号为62/792,045的美国临时专利申请案提交日期的优先权；这些专利中的内容以引用方式并入本文中。介绍癌症仍然是全球范围内一个主要的致死病因，据估计，全世界每年癌症病例为1270万，男女患癌比例相当。预计到2030年，这一数字将增至2100万。例如，在美国甚至是全球，肺癌是导致男女因癌症死亡的第一大病因。非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌类型，约占全部肺癌病例的80-85％。大多数NSCLC病例预后较差，因为大多数患者在确诊时通常已处于癌症发展的晚期。传统上，肺癌通过手术切除、放射疗法和化学疗法进行治疗。这些治疗进展非常缓慢，并且对肺癌患者5年生存率的改善作用较为有限。但是，另一方面，近年来，靶向疗法和免疫疗法取得显著进步。在新近确诊的肺癌患者中，近40％的患者已发生癌症转移。在癌症发展过程中，肿瘤上皮细胞转化为间充质细胞(EMT)，并进入血液循环，变成循环肿瘤细胞(CTC)。CTC被视为是肿瘤扩散和转移的前兆。
技术实现思路
本专利技术提供了涉及已标记细胞悬液测定以检测癌症相关细胞及其群体和/或进行转移性癌症筛查等的方法。可以对已标记细胞悬液进行测定，以检测受试者的细胞悬液中是否存在肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体。目的癌症相关细胞群体包括诸如表达一种或更多种标志物的细胞群体，包括其中所述标志物是标志物组的成员。所测定的标志物可以根据上下文而变化，并且可以包括蛋白标志物、核酸标志物、细胞周期标志物、DNA含量标志物等。有用的标志物包括一种或更多种免疫检查点标志物和/或一种或更多种免疫细胞类型标志物，包括其中所测定的标志物是一个或更多个标志物组的一部分。本专利技术还提供了基于来自受试者的已标记细胞悬液样本的测定结果来治疗受试者的瘤形成的方法。本专利技术还提供了用于实施所述方法的试剂盒。附图说明结合附图阅读以下详细说明，可获得对本专利技术最全面的理解。本专利或申请文件含有至少一张彩色附图。专利局将在必要费用已付的情况下根据要求提供具有彩色附图的本专利或专利申请公开说明书副本。需要强调的是，根据惯例，附图的各个特征未按比例绘制。相反，为了清楚起见，可任意扩大或缩小各个特征的尺寸。附图中包括以下图示：图1A-1B提供了适用于实体瘤处理和分析以及循环肿瘤细胞(CTC)分离和分析的实验工作流程。图2描绘了细胞癌标志物的表达和流式分析。图3描绘了细胞免疫标志物的表达和流式分析。图4A-4B描绘了含有免疫检查点标志物、免疫活化标志物和癌细胞标志物的CTC的相关分析。图5描绘了患者样本聚类分析。图6提供了表1。图7提供了表2。图8提供了表3。图9提供了表4。图10提供了表5。图11提供了本文所述的补充表。图12展示了从表达CCR5的肺肿瘤组织中分离出的调节性T细胞群体的检测。图13提供了包括多种可检测标志物结合成员(包括可检测CCR5结合成员)的标志物组。实施方式本专利技术提供了涉及已标记细胞悬液测定以检测癌症相关细胞及其群体和/或进行转移性癌症筛查等的方法。可以对已标记细胞悬液进行测定，以检测受试者的细胞悬液中是否存在肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体。目的癌症相关细胞群体包括诸如表达一种或更多种标志物的细胞群体，包括其中所述标志物是标志物组的成员。所测定的标志物可以根据上下文而变化，并且可以包括蛋白标志物、核酸标志物、细胞周期标志物、DNA含量标志物等。有用的标志物包括一种或更多种免疫检查点标志物和/或一种或更多种免疫细胞类型标志物，包括其中所测定的标志物是一个或更多个标志物组的一部分。本专利技术还提供了基于来自受试者的已标记细胞悬液样本的测定结果来治疗受试者的瘤形成的方法。本专利技术还提供了用于实施所述方法的试剂盒。在更加详细地描述本专利技术之前，应当理解，本专利技术不限于所描述的特定实施例，因为在实际实施中一定会存在差异。还应当理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施例，而无意限制本专利技术构思，本专利技术的范围将仅由所附权利要求书限定。在提供数值范围的情况下，应当理解，该范围的上限和下限之间的每个中间值以及在该范围内的任何其他规定值或中间值都包含在本专利技术的范围内。除非上下文另有明确规定，否则每个中间值应低至下限单位的十分之一。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小范围内，并且也包括在本专利技术内，需遵守所述范围内任何特别排除的限值的要求。在所述范围包括一个或两个限值的条件下，排除了那些所包括限值中的任一个或两个的范围也包括在本专利技术内。本文中提出的某些范围在数值前带有术语“大约”。本文中使用术语“大约”的目的是为其后的精确数字以及与该术语之后数字接近或近似的数字提供文字支持。在确定某一数字是否接近或近似于具体列举的数字时，接近或近似的未列举数字在其出现的上下文中可以是基本上等同于所具体列举数字的数字。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语的含义与本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。尽管与本文所描述的方法和材料类似或等同的方法和材料也可用于本专利技术的实施或测试中，但下文描述了具有代表性的示例性方法和材料。在本说明书中引用的所有出版物和专利通过引用方式并入本文中，犹如每一单独出版物或专利被具体地和单独地表明通过引用方式并入，且通过引用并入本文的目的是公开和描述与引用的出版物相关的方法和/或材料。任何出版物的引用均是针对其在申请日之前公开的内容，并且不应将其解释为承认由于之前的专利技术使得本专利技术无权早于此类出版物。此外，所提供的出版日期可能与实际出版日期不同，可能需要单独确认。需要注意的是，如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式的“一”、“一个”和“所述/该”包括复数指代对象，除非上下文另有明确说明。还应注意，可以起草权利要求以排除任何可选要素。因此，该陈述旨在作为使用诸如“单独”、“仅”等与陈述权利要求要素有关的专用术语或使用“否定”限制的前置基础。在阅读本专利技术后，以下内容对所属领域的技术人员来说是显而易见的，本文所描述和列出的每个单独的实施例都具有分层的组分和特征，这些组分和特征可在不脱离本专利技术的范围和精神的情况下与其他几个实施例中任一实施例的特征进行快速分解或合并。可按陈述的事件顺序或逻辑上可能的任何其他顺序实施任何陈述的方法。尽管为了语法的流畅性已经或将要描述该设备和方法，并进行功能上的说明，但应明确理解，除非《美国法典》第35章有明确规定，否则任何情况下都不得将权利要求解释为必须受“方式”或“步骤”的限制，而应按照等效物的司法原则与权利要求中所述定义的含义和等效物的完整范围相符，当明确按照《美国法典》第35章第112节的规定编写权利要求时，权利要求应与《美国法典》第35章第112节中的法定等效物完全相符。...

【技术保护点】
1.一种方法，其包含：/n使利用从受试者的肿瘤中收集的活检切片制备的细胞悬液与以下各项接触：/n包含多种可检测免疫检查点标志物结合成员的免疫检查点组；以及/n包含多种可检测免疫细胞类型标志物结合成员的免疫细胞类型组，/n制备已标记细胞悬液；以及/n对所述已标记细胞悬液进行细胞计量术测定，以检测所述细胞悬液中是否存在表达所述免疫检查点组中的免疫检查点标志物和所述免疫细胞类型组中的免疫细胞类型标志物的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180702 US 62/693,235;20190114 US 62/792,0451.一种方法，其包含：
使利用从受试者的肿瘤中收集的活检切片制备的细胞悬液与以下各项接触：
包含多种可检测免疫检查点标志物结合成员的免疫检查点组；以及
包含多种可检测免疫细胞类型标志物结合成员的免疫细胞类型组，
制备已标记细胞悬液；以及
对所述已标记细胞悬液进行细胞计量术测定，以检测所述细胞悬液中是否存在表达所述免疫检查点组中的免疫检查点标志物和所述免疫细胞类型组中的免疫细胞类型标志物的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)群体。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多种可检测免疫细胞类型标志物结合成员包含适用于选自由以下各项组成的群组的两种或更多种免疫检查点标志物的特异性结合成员：程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白受体3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述多种可检测免疫细胞类型标志物结合成员包含适用于选自由CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD25、CD56、CD127和CCR5组成的群组的两种或更多种免疫细胞类型标志物的特异性结合成员。


4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包含对所述细胞悬液进行细胞计量术测定，以确定所述细胞悬液中是否存在两种或更多种不同的TIL群体。


5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞类型组进一步包含适用于免疫活化标志物和/或...

【专利技术属性】
技术研发人员：布鲁斯·K·帕特森，阿曼达·诺尔·查尔金，王晓阳，陈品爱，
申请(专利权)人：茵赛德斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US