分析赘生性细胞和赘瘤相关细胞的方法及其用途技术

提供了用于分析赘生性细胞和/或赘瘤相关细胞的方法。该方法的方面涉及检测赘瘤和/或赘瘤相关细胞的异质性、每个细胞的程序性死亡配体1(PD‑L1)的表达和/或增殖。所述方法的方面包括以细胞计数方式测定标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的异质性、每个细胞的PD‑L1表达、增殖和/或其他参数，以检测赘瘤样品中是否存在赘生性细胞。所提供的方法的方面还包括基于这种分析的结果治疗对象。另外，还提供了可用于实施主题方法的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分析赘生性细胞和赘瘤相关细胞的方法及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2018年1月3日提交的美国专利申请序列号15/861,352的自提交日期的优先权，该申请是2017年9月6日提交的国际申请PCT/US2017/050322的部分连续案，该国际申请要求2016年9月6日提交的美国临时专利申请序列号62/384037的自提交日期的优先权，其公开内容通过引用并入本文。专利技术背景癌症仍然是全球死亡的主要原因之一，据估计全世界每年有1270万例病例使两性同等地受到影响。到2030年，预计这一数字将增至2100万。免疫系统与肿瘤发展密切相关，在疾病进展至转移期间尤其起到决定性作用。免疫系统对癌症的影响并无严格抑制性，因为免疫性与癌细胞之间的复杂串扰也增强了肿瘤生长。免疫系统涉及到癌症进展中现在一般被视为癌症的标志。因此，免疫系统如何对癌症作出反应决定了最终的结果。即使在对象的免疫系统确实对癌症产生显著的初始反应的情况下，癌症仍然可能通过各种机制逃避免疫反应的破坏性因素，这些机制包括免疫检查点蛋白的表达以触发免疫抑制。导致逃避免疫攻击的其他机制包括选择对免疫效应物具抗性的肿瘤变体(即，“免疫编辑”)和在肿瘤内逐渐形成免疫抑制环境。免疫疗法寻求合理地重定向对象的免疫系统以有效地靶向癌症和/或防止免疫逃避。
技术实现思路
提供了用于分析赘生性细胞和/或赘瘤相关细胞的方法。该方法的方面涉及检测赘瘤细胞和/或赘瘤相关细胞的异质性、每个细胞的程序性死亡配体1(PD-L1)表达和/或增殖。所述方法的方面包括以细胞计数方式测定标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的异质性、每个细胞的PD-L1表达、增殖和/或其他参数，以检测赘瘤样品中是否存在赘生性细胞。所提供的方法的方面还包括基于这种分析的结果治疗对象。另外，还提供了可用于实施主题方法的试剂盒。附图说明当结合附图阅读以下详细描述时可最透彻地理解本专利技术。要强调的是，按照惯例，附图的各种特征不成比例。相反，为清楚起见，各种特征的尺寸任意地放大或缩小。附图中包括以下图式。图1描绘了使用如本文所描述的PD-L1标记和流式细胞计数分析的PD-L1阳性对照和阴性对照细胞的清晰细胞计数分离。图2描绘了用掺入阴性对照样品中的各种百分比的PD-L1阳性细胞制备的混合样品中PD-L1阳性细胞检测的线性关系。图3描绘了基于MESF珠粒的标准化的PD-L1荧光，其用于如本文所描述的实施方案中使用的每个细胞的PD-L1定量。图4描绘了肿瘤和免疫细胞子组的定量PD-L1表达分析以及源自患者的样品中表达PD-L1的细胞的特异性检测的验证。图5提供了表2。图6描绘了根据本文所描述的实施方案测定的肺肿瘤组织免疫细胞浸润物的增殖。图7描绘了根据本文所描述的实施方案测定的肿瘤组织中巨噬细胞的损失和非T细胞的增加。图8描绘了根据本文所描述的实施方案测定的肿瘤组织中存在的淋巴细胞中与二倍体相比非整倍性的增加。图9描绘了根据本文所述方法的实施方案测定的DNA含量与PD-L1表达的关系。图10描绘了肺肿瘤异质性与PD-L1表达的关系。图11描述了循环肿瘤细胞(CTC)的存在和肿瘤增殖之间的相关性。图12描述了循环肿瘤细胞(CTC)的存在和肿瘤非整倍性之间的相关性。图13描绘了通过流式细胞计数法(左)和循环肿瘤细胞(CTC)细胞计数法(右)获得的PD-L1对比DNA含量的数据。具体实施方式提供了用于分析赘生性细胞和/或赘瘤相关细胞的方法。该方法的方面涉及检测赘瘤细胞和/或赘瘤相关细胞的异质性、每个细胞的程序性死亡配体1(PD-L1)表达和/或增殖。所述方法的方面包括以细胞计数方式测定标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的异质性、每个细胞的PD-L1表达、增殖和/或其他参数，以检测赘瘤样品中是否存在赘生性细胞。所提供的方法的方面还包括基于这种分析的结果治疗对象。另外，还提供了可用于实施主题方法的试剂盒。在详细描述本专利技术之前，应理解，本专利技术不限于所描述的特定实施方案，因此它们当然可以变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且不意图具有限制性，原因是本专利技术的范围将仅受所附权利要求书限制。在提供值的范围的情况下，应理解，在这个范围的上限和下限与在这个规定范围内的任何其他规定值或居中值之间的每个居中值涵盖于本专利技术内，除非上下文另外明确指示，否则精确到下限单位的十分之一。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内并且还涵盖于本专利技术内，除非其是规定范围内的任何明确排除的限值。在规定范围包括限值中的一者或两者的情况下，排除那些所包括的限值中的任一者或两者的范围也包括于本专利技术中。本文以数值前面带有术语“约”给出了某些范围。术语“约”在本文中用于提供其后面的确切数字以及接近或近似该术语后面的数字的数字的字面支持。在确定一个数字是否接近或近似一个具体列举的数字时，接近或近似的未列举数字可以是在给出具体列举的数字的上下文中提供了具体列举数字的基本等同数字的数字。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。尽管在本专利技术的实施或测试中还可以使用与本文所描述的那些类似或等效的任何方法和材料，但现在描述具有代表性的说明性方法和材料。该说明书中的所有公布和专利都以引用的方式并入本文中，就如同每个单独的公布或专利都被具体地和单独地指出通过引用结合于此，并且以引用的方式并入本文中，以公开和描述在引用所述公布时相关联的方法和/或材料。任何公布的引用都是在申请日之前的公开，且不应被解释为承认本专利技术无权凭借在先专利技术而先于该公布。此外，所提供的公布日期可能不同于可能需要独立确认的实际公布日期。应当注意，除非上下文另外明确指示，否则如本文和所附权利要求书中不使用数量词和“所述”包括复数指示物。还应注意，权利要求可以被撰写为排除任何可选要素。这样，该陈述旨在作为在叙述权利要求要素时使用诸如“单独”、“仅”等专有术语或使用“否定”限制的前提基础。本领域技术人员在阅读本公开后将显而易见的是，本文所描述和说明的个别实施方案中的每一者具有离散的组分和特征，在不偏离本专利技术的范围或精神的情况下这些组分和特征可以容易地与其他若干实施方案中的任一者的特征分离或组合。任何所陈述的方法可以按所陈述事件的顺序或按逻辑上可能的任何其他顺序进行。尽管为了功能性解释以及语法流畅性，已经描述了或将要描述设备和方法，但是应当清楚地理解，除非根据35U.S.C.§112明确表述，否则权利要求不应当被解释为必须以任何方式受到“装置”或“步骤”限制构造的限制，而是应当符合在等同的司法原则下权利要求所提供定义的含义和等同形式的全部范围，如果权利要求是根据35U.S.C.§112明确提出的，则应根据35U.S.C.§112给予完全的法定等同。方法如上所述，提供了检测赘生性细胞和/或赘瘤相关细胞的方法。赘生性细胞包括赘瘤细胞或来源本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测赘瘤样品中是否存在具有高于预定阈值的异质性指标的赘生性细胞的方法，所述方法包括：/n使所述赘瘤样品与对程序性死亡配体(PD-L1)具有特异性的标记的结合成员接触以产生标记的细胞悬浮液；/n以细胞计数方式测定所述标记的细胞悬浮液来获得包括每个细胞的PD-L1表达的定量的每个细胞的异质性指标，以检测所述赘瘤样品中是否存在具有高于预定阈值的异质性指标的赘生性细胞。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180103 US 15/861,3521.一种检测赘瘤样品中是否存在具有高于预定阈值的异质性指标的赘生性细胞的方法，所述方法包括：
使所述赘瘤样品与对程序性死亡配体(PD-L1)具有特异性的标记的结合成员接触以产生标记的细胞悬浮液；
以细胞计数方式测定所述标记的细胞悬浮液来获得包括每个细胞的PD-L1表达的定量的每个细胞的异质性指标，以检测所述赘瘤样品中是否存在具有高于预定阈值的异质性指标的赘生性细胞。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述异质性指标包括以细胞计数方式测量的细胞复杂性。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述异质性指标包括测定的DNA含量。


4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中检测的细胞是增殖性的。


5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述标记还包括使所述赘瘤样品与至少一种对免疫细胞具有特异性的标记的结合成员接触。


6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中检测的细胞是循环肿瘤细胞、造血癌细胞或实体肿瘤细胞。


7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预定阈值包括细胞复杂性阈值、DNA含量阈值和每个细胞100个或多于100个PD-L1分子的PD-L1阈值。


8.一种间接检测具有赘瘤的对象中是否存在循环肿瘤细胞(CTC)的方法，所述方法包括：
使从所述赘瘤制备的细胞悬浮液...

【专利技术属性】
技术研发人员：布鲁斯·K·帕特森，阿曼达·诺尔·查尔金，基思·沙尔茨，
申请(专利权)人：茵赛德斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US