检测每个细胞的PD-L1表达的方法及其用途技术

提供了用于检测赘瘤细胞的每个细胞的程序性死亡配体1(PD‑L1)表达的方法。所述方法的方面包括以细胞计数方式测定标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的PD‑L1表达，以检测赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的PD‑L1的赘生性细胞。另外，还提供了可用于实施主题方法的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测每个细胞的PD-L1表达的方法及其用途相关申请的交叉引用依照35U.S.C.§119(e)，本申请要求2016年9月6日提交的美国临时专利申请序列号62/384,037的自提交日期的优先权，所述专利申请的公开内容以引用的方式并入本文中。专利技术背景癌症仍然是全球死亡的主要原因之一，据估计全世界每年有1270万例病例使两性同等地受到影响。到2030年，预计这一数字将增至2100万。免疫系统与肿瘤发展密切相关，在疾病进展至转移期间尤其起到决定性作用。免疫系统对癌症的影响并无严格抑制性，因为免疫性与癌细胞之间的复杂串扰也增强了肿瘤生长。免疫系统涉及到癌症进展中现在一般被视为癌症的标志。因此，免疫系统如何对癌症作出反应决定了最终的结果。即使在受试者的免疫系统确实对癌症产生显著的初始反应的情况下，癌症仍然可能通过各种机制逃避免疫反应的破坏性因素，这些机制包括免疫检查点蛋白的表达以触发免疫抑制。导致逃避免疫攻击的其它机制包括选择对免疫效应物具抗性的肿瘤变体(即，“免疫编辑”)和在肿瘤内逐渐形成免疫抑制环境。免疫疗法寻求合理地重定向受试者的免疫系统以有效地靶向癌症和/或防止免疫逃避。
技术实现思路
提供了用于检测赘瘤细胞的每个细胞的程序性死亡配体1(PD-L1)表达的方法。所述方法的方面包括以细胞计数方式测定标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的PD-L1表达，以检测赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的PD-L1的赘生性细胞。另外，还提供了可用于实施主题方法的试剂盒。附图说明当结合附图阅读以下详细描述时可最透彻地理解本专利技术。要强调的是，按照惯例，附图的各种特征不成比例。相反，为清楚起见，各种特征的尺寸任意地放大或缩小。附图中包括以下图式。图1描绘了使用如本文所描述的PD-L1标记和流式细胞计数分析的PD-L1阳性对照和阴性对照细胞的清晰细胞计数分离。图2描绘了用掺入阴性对照样品中的各种百分比的PD-L1阳性细胞制备的混合样品中PD-L1阳性细胞检测的线性。图3描绘了用于如本文所描述的实施方案中使用的每个细胞的PD-L1定量的PD-L1荧光的基于MESF珠粒的标准化。图4描绘了肿瘤和免疫细胞子组的定量PD-L1表达分析以及源自患者的样品中PD-L1表达细胞的特异性检测的验证。图5提供了表2。图6描绘了根据本文所描述的实施方案测定的肺肿瘤组织免疫细胞浸润物的增殖。图7描绘了根据本文所描述的实施方案测定的肿瘤组织中巨噬细胞的损失和非T细胞的增加。图8描绘了根据本文所描述的实施方案测定的肿瘤组织中存在的淋巴细胞与二倍体相比非整倍性的增加。具体实施方式提供了用于检测赘瘤细胞的每个细胞的程序性死亡配体1(PD-L1)表达的方法。所述方法的方面包括以细胞计数方式测定标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的PD-L1表达，以检测赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的PD-L1的赘生性细胞。另外，还提供了用于实施主题方法的试剂盒。在描述本专利技术方法和试剂盒之前，应理解，本专利技术不限于所描述的特定方法或试剂盒，因此当然可以变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且不意图具有限制性，因为本专利技术的范围将仅受所附权利要求书限制。在提供值的范围的情况下，应理解，还明确公开了在那个范围的上限与下限之间的每个居中值，除非上下文另外明确指示，否则精确到下限单位的十分之一。在规定范围内的任何规定值或居中值与在那个规定范围内的任何其它规定值或居中值之间的每个较小范围涵盖于本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在所述范围内或排除在所述范围外，并且在两个限值之一、都不或全都包括在较小范围内的情况下每个范围也涵盖于本专利技术内，除非是规定范围内的任何明确排除的限值。在规定范围包括限值中的一者或两者的情况下，排除那些所包括的限值中的任一者或两者的范围也包括于本专利技术中。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。尽管在本专利技术的实施或测试中可以使用与本文所描述的那些类似或等效的任何方法和材料，但现在描述一些潜在和优选的方法和材料。本文所提到的所有公布都以引用的方式并入本文中，以公开和描述在引用所述公布时相关联的方法和/或材料。应理解，在相矛盾的程度上，本公开取代所并入的公布的任何公开内容。本领域技术人员在阅读本公开后将显而易见的是，本文所描述和说明的个别实施方案中的每一者具有离散的组分和特征，在不偏离本专利技术的范围或精神的情况下这些组分和特征可以容易地与其它若干实施方案中的任一者的特征分离或组合。任何所陈述的方法可以按所陈述事件的顺序或按逻辑上可能的任何其它顺序进行。必须注意的是，除非上下文另外明确指示，否则如本文和所附权利要求书中所用的单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数指示物。因此，举例来说，提及“一个细胞”包括多个这类细胞并且提及“所述标记的结合成员”包括提及一个或多个标记的结合成员和本领域技术人员所知的其等效物，例如抗体，等等。本文所论述的公布仅仅针对其在本公开的提交日期前的公开内容而提供。本文中的任何内容都不应解释为承认本专利技术无权借助在先专利技术而先于此类公布。此外，所提供的公布日期可能不同于可能需要独立确认的实际公布日期。方法如上文所概述，本专利技术的实施方案针对检测表达高于预定阈值的程序性死亡配体1(PD-L1)的细胞的方法。可以在主题方法中检测PD-L1表达的细胞在各种情况下包括赘生性细胞和免疫细胞。因此，在一些情况下，在主题方法中检测的细胞(例如，赘生性细胞)将具有超过预定阈值的每个细胞的PD-L1蛋白表达水平。如本文所用的“每个细胞的PD-L1表达水平”或“每个细胞的PD-L1表达”意指细胞表面上存在的PD-L1分子的量。本公开的方法包括以细胞计数方式测定细胞样品以定量每个细胞的PD-L1表达，随后检测样品中具有超过预定阈值的每个细胞的PD-L1蛋白表达水平的一个或多个细胞。下文更详细描述的以细胞计数方式测定细胞样品的各种手段可以用于主题方法中。PD-L1表达细胞如上文所概述，本公开提供了检测表达高于预定阈值的PD-L1的细胞的方法。可以基于PD-L1蛋白表达的水平或PD-L1编码转录物(即，mRNA)表达的水平，在每个细胞的基础上定量PD-L1表达。在一些情况下，主题方法仅定量每个细胞的PD-L1蛋白表达并且不定量每个细胞的PD-L1转录物表达。在一些情况下，可以采用定量PD-L1蛋白水平与PD-L1转录水平的组合方法。如下文更详细描述，本专利技术方法的实施方案可以包括以细胞计数方式测定细胞悬浮液以检测表达高于预定阈值的PD-L1的细胞。如本文所用的术语“以细胞计数方式测定”描述了在逐个细胞的基础上测量细胞参数，其中这种测量允许检测具有某个细胞参数或一组参数的个别细胞，或对共享某个细胞参数或一组参数的细胞群体进行计数。在主题方法中细胞学上测定的一个这样的参数是每个细胞的PD-L1表达。PD-L1(也称为CD274)结合程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)，一种由PDCD1基因编码的蛋白质，所述基因是在T细胞上表达的细胞表面受体。PD-1通过阻止T细胞的活化而起到免疫检查点的作用，这降低了自身免疫性并促进了自身耐受性。已经发现PD-L1在许多不同的癌细胞类型上表达。癌细胞上PD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的程序性死亡配体1(PD‑L1)的赘生性细胞的方法，所述方法包括：使所述赘瘤样品与对PD‑L1具有特异性的标记的结合成员接触以产生标记的细胞悬浮液；以细胞计数方式测定所述标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的PD‑L1表达，以检测所述赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的PD‑L1的赘生性细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.06 US 62/384,0371.一种检测赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的程序性死亡配体1(PD-L1)的赘生性细胞的方法，所述方法包括：使所述赘瘤样品与对PD-L1具有特异性的标记的结合成员接触以产生标记的细胞悬浮液；以细胞计数方式测定所述标记的细胞悬浮液来定量每个细胞的PD-L1表达，以检测所述赘瘤样品中是否存在表达高于预定阈值的PD-L1的赘生性细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述以细胞计数方式测定还包括测定细胞周期。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述以细胞计数方式测定还包括测定非整倍性。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述检测的细胞是增殖性的。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述标记还包括使所述赘瘤样品与至少一个对免疫细胞具有特异性的标记的结合成员接触。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述检测的细胞是循环肿瘤细胞、造血癌细胞或实体肿瘤细胞。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预定阈值是每个细胞100个或更多个PD-L1分子。8.一种鉴别受试者中的赘瘤是否为抗程序性死亡配体1(PD-L1)免疫疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：布鲁斯·K·帕特森，阿曼达·诺尔·查尔金，基思·沙尔茨，
申请(专利权)人：茵赛德斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US