一种间充质干细胞培养基制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了一种间充质干细胞培养基。本发明专利技术间充质干细胞培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括非必需氨基酸、pH调节剂、抗生素、促进细胞膜合成的有机物质成分、细胞基质成分、细胞生长因子、维生素、微量元素、抗氧化剂。本发明专利技术间充质干细胞培养基能够为干细胞生长提供细胞生长所需的营养物质，维持细胞生长环境，维持细胞活性，促进干细胞分裂增殖，提高干细胞扩增速度，缩短干细胞培养时间；同时，还能抑制干细胞分化但不影响干细胞的分化潜能；采用本发明专利技术的培养基对干细胞进行多次传代次后，干细胞依然能够保持其原有的生物学特性和多向分化潜能。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞培养基
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种间充质干细胞培养基。
技术介绍
间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSC）是一种源于中胚层的多能干细胞，能够无限制自我更新，多向分化。在合适的条件下，能在体外或者体内定向分化为脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等等，作为组织修复的种子细胞。在器官移植时使用，可以降低免疫排斥，提高移植的成功率，同时加快手术创口的恢复。间充质干细胞可以在体内或者体外培养扩增，并能够分泌大量的细胞因子，具有免疫调节、炎症抑制等功能，用于治疗免疫相关疾病。而且间充质干细胞基本不具备免疫原性，能够异体移植。总的来说，间充质干细胞具有不菲的临床医用价值。间充质干细胞广泛存在于骨髓、脐带、胎盘、脂肪等组织和血液中，但是细胞数量极其有限，比如外周血中只有0.1%-0.01%的粒细胞为干细胞，1克脂肪组织仅含有约5×104个脂肪干细胞。为了满足科研和临床治疗的需要，初步分离的干细胞需要经过体外培养增殖，这是干细胞从研究到应用的一个重要阶段。目前大多数采用的是传统方法培养，这种情况下，培养基的组分通常为基础培养基，加上10%-20%的胎牛血清和一定量的抗生素，其中的血清主要功能是提供各种生长因子。然而血清的具体成分至今仍不是十分清楚，且由于其来源和批次的区别，质量和功效也存在差别，为标准化培养带来了困难。使用动物血清时，更无法完全避免来自于动物本身的感染源的污染，血清中包含的动物来源的成分因子也可能引起不良反应，给临床使用带来了风险。曾经有研究尝试使用自体人源血清或者血小板裂解物来作为生长补充剂，虽然能够满足间充质干细胞生长所需、避免交叉污染，但是因为来源有限而无法推广。随着间充质干细胞需求增大，非常有必要开发一种新的培养基，排除动物血清的使用、减少潜在的风险，同时能够提供间充质干细胞生长所需要营养物质、最大限度的促进间充质干细胞的生长增殖。自上世纪70年代开始，科学家就开始了无血清培养基的研究。最初，研究人员希望从血清中直接纯化各种营养物质和生长因子，但是因为血清的复杂性和技术手段的限制，这种方法无法满足实际需求。随着技术水平的发展，研究人员能够逐步了解了血清中的各种成分的功能，主要包括：营养物质、生长激素、细胞基质成分和转运蛋白等等，而且能够通过基因工程的手段大量生产这些成分，至此无血清培养基的研究开发开始取得了坚实的发展。目前市场上的比较成熟的产品分别来源于SIGMA，STEMCELL和Thermofisher等公司，但其针对不同来源的间充质干细胞，比如脂肪或者血液，都有不同的成分配方和添加剂。在此本专利技术充分考虑了间充质干细胞的特殊性后，并结合市场需求，开发了一种能够快速促进不同来源间充质干细胞生长的，替代传统培养基的无血清间充质干细胞培养基。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的旨在提供一种间充质干细胞培养基。为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术第一方面提供了一种间充质干细胞培养基。所述间充质干细胞培养基由基础培养基和添加剂组成，所述添加剂包括非必需氨基酸、pH调节剂、抗生素、促进细胞膜合成的有机物质成分、细胞基质成分、细胞生长因子、维生素、微量元素、抗氧化剂；所述基础培养基为DMEM或DMEM/F12。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述促进细胞膜合成的有机物质成分组成及含量如下：胆固醇10～15mg/L、卵磷脂8～16mg/L、鞘磷脂80～100mg/L、人低密度脂蛋白5～15mg/L、油酸20～25mg/L、乙醇胺5～10mg/L和腐胺1～5mg/L；所述细胞基质成分的组成及含量如下：血清白蛋白100～500mg/L、纤连蛋白2～5mg/L和层粘连蛋白1～5mg/L。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述细胞生长因子的成分组成及含量如下：类胰岛素生长因子IGF-15～10μg/L、表皮生长因子EGF5～10μg/L、肝细胞生长因子HGF5～15μg/L、肝素结合性表皮生长因子HB-EGF10～15μg/L、成纤维细胞生长因子FGF240～50μg/L、成纤维细胞生长因子FGF41～5μg/L、成纤维细胞生长因子FGF195～10μg/L、血管内皮生长因子VEGF1～10μg/L、转化生长因子TGF-β5～10μg/L、白血病抑制因子LIF1～5μg/L、干细胞因子SCF1～5μg/L、干细胞生长因子SCGF-α5～10μg/L、胰岛素25～30μg/L、血小板衍生生长因子PDGFAB40～50μg/L、血小板衍生生长因子PDGFBB100～150μg/L、凝血酶10～15U/L、转铁蛋白0.2%、红细胞生长素EPO5～10μg/L、单核细胞趋化蛋白MCP-15～10μg/L、白介素-25～10μg/L、白介素-85～10μg/L、粒细胞集落刺激因子G-CSF5～10μg/L、巨噬细胞集落刺激因子M-CSF5～10μg/L、脂质运载蛋白5～10μg/L。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述抗氧化剂的成分组成及含量为：还原型谷胱甘肽1～1.5mg/L、β-巯基乙醇0.1mM；所述维生素的成分组成及含量为：维生素A1～10mg/L、维生素C5～10mg/L、维生素E10～15mg/L；所述微量元素的成分组成及含量为：硫酸铜20～25mg/L、氯化镁15～20mg/L、硫酸锌15～20mg/L、亚硒酸钠1～5μg/L。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述添加剂还包括含有干细胞外分泌物的溶液，所述含有干细胞外分泌物的溶液的制备方法为：采用权利要求1所述的间充质干细胞培养基对干细胞进行培养，培养48～72h后，离心，取上清液，所述上清液为含有干细胞外分泌物的溶液。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述含有干细胞外分泌物的溶液与基础培养基的体积比为5%～15%。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述pH调节剂为HEPES，所述HEPES与基础培养基的体积比为1%。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述抗生素与基础培养基的体积比为1%～2%。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述基础培养基为DMEM/F12。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述细胞基质成分、细胞生长因子中的蛋白均为人源化的蛋白，通过DNA重组技术表达获得。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述添加成分中的各物质可以是冻干粉或是以基础培养基为溶剂的溶液。根据上述的间充质干细胞培养基，优选地，所述非必需氨基酸与基础培养基的体积比为1%～2%，所述非必需氨基酸为MEMNEAA非必需氨基酸溶液。本专利技术第二方面提供了上述第一方面所述间充质干细胞培养基在体外培养干细胞中的应用。根据上述的应用，优选地，所述干细胞为间充质干细胞。根据上述的应用，优选地，所述干细胞包括但不限于脐带间充质干细胞、脂肪干细胞或骨髓干细胞。本专利技术第三方面提供了一种利用上述第一方面所述间充质干细胞培养基进行干细胞分离培养方法，包括以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞培养基，其特征在于，由基础培养基和添加剂组成，所述添加剂包括非必需氨基酸、pH调节剂、抗生素、促进细胞膜合成的有机物质成分、细胞基质成分、细胞生长因子、维生素、微量元素、抗氧化剂；所述基础培养基为DMEM或DMEM/F12。/n

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞培养基，其特征在于，由基础培养基和添加剂组成，所述添加剂包括非必需氨基酸、pH调节剂、抗生素、促进细胞膜合成的有机物质成分、细胞基质成分、细胞生长因子、维生素、微量元素、抗氧化剂；所述基础培养基为DMEM或DMEM/F12。


2.根据权利要求1所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述促进细胞膜合成的有机物质成分组成及含量如下：胆固醇10～15mg/L、卵磷脂8～16mg/L、鞘磷脂80～100mg/L、人低密度脂蛋白5～15mg/L、油酸20～25mg/L、乙醇胺5～10mg/L和腐胺1～5mg/L；所述细胞基质成分的组成及含量如下：血清白蛋白100～500mg/L、纤连蛋白2～5mg/L和层粘连蛋白1～5mg/L。


3.根据权利要求2所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述细胞生长因子的成分组成及含量如下：类胰岛素生长因子IGF-15～10μg/L、表皮生长因子EGF5～10μg/L、肝细胞生长因子HGF5～15μg/L、肝素结合性表皮生长因子HB-EGF10～15μg/L、成纤维细胞生长因子FGF240～50μg/L、成纤维细胞生长因子FGF41～5μg/L、成纤维细胞生长因子FGF195～10μg/L、血管内皮生长因子VEGF1～10μg/L、转化生长因子TGF-β5～10μg/L、白血病抑制因子LIF1～5μg/L、干细胞因子SCF1～5μg/L、干细胞生长因子SCGF-α5～10μg/L、胰岛素25～30μg/L、血小板衍生生长因子PDGFAB40～50μg/L、血小板衍生生长因子PDGFBB100～150μg/L、凝血酶10～15U/L、转铁蛋白0.2%、红细胞生长素EPO5～10μg/L、单核细胞趋化蛋白MCP-15～10μg/L、白介素-25～10μg/L、白介素-85～10μg/L、粒细胞集落刺激因子G-CSF5～10μg/L、巨噬细胞集落刺激因子M-CSF5～10μg/L、脂质运载蛋白5～10μg/L。


4.根据权利要求3所述的间充质干细胞培养基，其特征在于，所述抗氧化剂的成分组成及含量为：还原型谷胱甘肽1～1.5mg/L、β-巯基乙醇0.1mM；...

【专利技术属性】
技术研发人员：任建华，熊义，
申请(专利权)人：任建华，
类型：发明
国别省市：河南;41