本文提供了用于激活患有肿瘤的患者的免疫应答的方法和组合物。在一些情况下，本文所述的方法包括施用给患者非糖基化的PD‑1抑制剂和任选地糖基化的PD‑1抑制剂，其中非糖基化的PD‑1抑制剂和任选地与糖基化的PD‑1抑制剂组合导致免疫应答的激活。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于阻断非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用的方法和组合物交叉引用本申请要求2018年4月4日提交的美国临时专利申请号62/652,857的权益，其通过引用以其整体并入本文。本公开内容的概述在某些实施方式中，本文公开了损害或阻断位于不同免疫细胞的细胞表面上的非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用的组合物和方法。在一些情况下，本文还公开了通过损害或阻断两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用抑制T细胞激活的方法。在某些实施方式中，本文公开了损害两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用的抗体，其中抗体包括三个可变重链互补-决定区(CDR)和三个可变轻链CDR，其中抗体特异性结合至包含SEQIDNO:9的非糖基化的PD-1多肽的区域。在某些实施方式中，本文公开了药物组合，其包括：损害两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用的非糖基化的PD-1抑制剂；损害糖基化的PD-1多肽和程序性细胞死亡配体之间的相互作用的糖基化的PD-1抑制剂；和药学上可接受的媒介物或赋形剂。在某些实施方式中，本文公开了破坏两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用的方法，其包括：使非糖基化的PD-1抑制剂与包含两种各自表达非糖基化的PD-1多肽的细胞的多个细胞接触，其中非糖基化的PD-1抑制剂损害两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用。在某些实施方式中，本文公开了激活需要其的受试者的免疫应答的方法，其包括：施用给受试者非糖基化的PD-1抑制剂和糖基化的PD-1抑制剂以激活免疫应答，其中非糖基化的PD-1抑制剂损害两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用，且其中糖基化的PD-1抑制剂损害糖基化的PD-1多肽和程序性细胞死亡配体之间的相互作用。在某些实施方式中，本文公开了减少受试者的肿瘤微环境(TME)内的肿瘤细胞的方法，包括：使位于TME内的多个细胞与非糖基化的PD-1抑制剂和糖基化的PD-1抑制剂接触。附图说明在所附的权利要求中特别陈述了本专利技术的新颖的特征。本专利技术的特征和优势的更好理解将通过参考以下陈述其中利用本专利技术原理的示例说明性实施方式和其附图的详细描述获得：图1A-图1D显示共免疫沉淀测定的结果，通过其显示人PD-1特异性地拉下(pulleddown)hPD-1。图1A显示在用编码加HA-标签的PD-1质粒共转染的293T细胞(线1)，或用单独的加HA-标签的PD-1质粒转染的细胞(线2)中过表达的加Flag-标签的PD-1的存在。图1B显示过表达的加HA-标签的PD1的存在。图1C显示抗Flag抗体拉下加Flag-标签的PD-1。图1D显示加Flag-标签的PD-1拉下过表达的加HA-标签的PD-1。在没有加Flag-标签的PD-1的情况下，则没有加HA-标签的PD-1拉下，表明PD-1和PD-1结合是特异性的。图2显示使用包括与hIgG的Fc部分融合的hPD-1细胞外结构域(hPD-1Fc)的融合蛋白质的拉下测定的结果。结果显示PD-1结合PD-1是特异性的。如图所示，去糖基化的hPD-1Fc和阳性对照hPD-L1Fc，而不是hFc或hPD1Fc，拉下过表达的加HA标签的hPD-1。图3A-图3B显示共免疫沉淀测定的结果，通过其显示非糖基化的PD-1被PD-1特异性地拉下。图3A显示在用衣霉素处理(线2)或不用衣霉素处理(线1)的情况下，用编码加Flag-标签的PD-1的质粒和编码加HA-标签的PD1的质粒共转染的293T细胞中糖基化的和非糖基化的加Flag-标签的PD-1的存在。图3B显示加HA-标签的PD-1拉下非糖基化的加Flag-标签的PD-1，但是没有拉下糖基化的加Flag-标签的PD-1。图4A-图4B显示示出PD-1上PD-1的特异性结合的ELISA的结果。图4A显示PD-1的去糖基化的大大增强PD1和PD1相互作用，而PD-1的去糖基化剧烈减少其结合至PD-L1(图4B)。图5显示人/小鼠交叉反应性抗去糖基化的PD-1抗体IMT200的开发。ELISA用于测量IMT200结合至大肠杆菌中产生的人或小鼠PD-1的亲和力。图6A-图6B显示IMT200和其他已知的PD-1阻断剂在哺乳动物细胞中产生的糖基化的hPD-1上(图6A)和在大肠杆菌中产生的非糖基化的hPD-1上(图6B)的结合性质的结果。结果显示IMT200结合至糖基化的和非糖基化的hPD-1两者，而纳武单抗和派姆单抗，两个已知的抗PD-1抗体仅结合至糖基化的PD-1。图7显示IMT200在hPD-1上的表位定位的结果。ELISA用于显示hPD-1上的IMT200结合表位是TDKLAAFPED(SEQIDNO:9)。图8A-图8B显示示出抗PD-1mAbIMT200对PD-1与PD-1结合的阻断的ELISA的结果。图8A显示单克隆抗体IMT200阻断去糖基化的PD-1多肽之间的相互作用。图8B显示IMT200不能阻断PD-L1和PD-1之间的结合，但是mAbEH12能够阻断PD-L1和PD-1之间的结合。这表明对于PD-L1和PD-1在PD-1上的结合位点是不同的。图9A-图9C显示巨噬细胞上PD-1表达的结果。流式细胞术用于显示在RAW小鼠巨噬细胞(图9A)和人M2巨噬细胞(图9C)上PD-1表达良好，并且在人M1巨噬细胞(图9B)上PD-1表达更少的程度。图10A-图10B显示功能测定的结果，其中阻断性抗体IMT200与PD-1阻断性抗体组合逆转了PD-1对T细胞激活的抑制。图10A显示当小鼠RAW巨噬细胞与小鼠DO11.10T细胞混合并且用小鼠PD-1阻断性抗体29F和IMT200的组合处理时，相较于它们单独使用产生了更多IL-2。图10B显示类似的观察，其中当来自一个供体的人M1巨噬细胞与来自另一供体的人T细胞混合并且用人PD-1阻断性抗体EH12和IMT200的组合处理时，相较于它们单独使用产生了更多IFNγ。图11A-图11C显示示出PD-1抗体IMT200的抗肿瘤活性的实验性CT26结肠肿瘤模型的结果。与同种型或IMT200或PD1Ab单一试剂处理组相比，IMT200和29F的组合处理组显示肿瘤尺寸的减小。图11A描绘平均肿瘤体积。图11B描绘个体肿瘤体积。图11C描绘每个动物的肿瘤生长抑制(TGI)并且总结完全应答(CR)的频率。图12示例说明通过PD1-去糖结合抗体阻断PD1-PD1相互作用的ELISA评估。显示在不存在抗体的情况下PD1-PD1结合的百分比。图13A-图13E示例说明抗PD1抗体结合至PD1的肽片段的ELISA评估。图13A：mab3；图13B：mab5；图13C：mab9；图13D：mab10；和图13E：mab12。本公开内容的详细描述人类癌症具有大量的遗传和表观遗传的改变，生成被免疫系统可识别的新抗原。尽管在临床前模型中观察到对癌症的内源性免疫应答，但在患者中应答无效，并且已建立的癌症通常被视为“自身”且被免疫系统耐受。另外，肿瘤可利用几种不同的机制来主动抑制宿主的免疫应答。在这些机制之本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其损害两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用，其中所述抗体包括三个可变重链互补-决定区(CDR)和三个可变轻链CDR，和其中所述抗体特异性结合至包含SEQID NO:9的非糖基化的PD-1多肽的区域。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180404 US 62/652,8571.一种抗体，其损害两个非糖基化的PD-1多肽之间的相互作用，其中所述抗体包括三个可变重链互补-决定区(CDR)和三个可变轻链CDR，和其中所述抗体特异性结合至包含SEQIDNO:9的非糖基化的PD-1多肽的区域。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体不损害PD-1多肽和程序性细胞死亡配体之间的相互作用。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体损害两个非糖基化的PD-1多肽的相互作用的至少50％、60％、70％、80％、90％或更多。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体结合至人非糖基化的PD-1多肽、小鼠非糖基化的PD-1多肽或其组合。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括三个可变重链互补-决定区(CDR)和三个可变轻链CDR，其中所述三个重链CDR分别包含SEQIDNO:11、13和15，和其中所述三个轻链CDR分别包含SEQIDNO:18、20和22。
6.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括选自mab3、mab9和mab10的重链CDR的三个重链CDR，和选自mab3、mab9和mab10的轻链CDR的三个轻链CDR。
7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为人源化的抗体或其结合片段。
8.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括单克隆抗体或其结合片段。
9.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括单价Fab’、二价Fab2、单链可变片段(scFv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdAb)或骆驼抗体或其结合片段。
10.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括双特异性抗体或其结合片段。
11.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为全长抗体，其任选地包括选自IgG1、IgG2或IgG4的Fc区域。
12.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为IMT200、mab3、mab9或mab10。
13.根据权利要求2所述的抗体，其中所述程序性细胞死亡配体为PD-1配体1(PD-L1)或PD-1配体2(PD-L2)。
14.一种药物组合，其包括：
根据权利要求1的抗体；
损害糖基化的PD-1多肽和程序性细胞死亡配体之间的相互作用的糖基化的PD-1抑制剂；和
药学上可接受的媒介物或赋形剂。
【专利技术属性】
技术研发人员：孙东旭，王岩，C·戈登，S·A·威廉姆斯，
申请(专利权)人：真和制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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