【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗癌症的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求于2018年5月11日提交的美国临时申请专利序列号62/670,417、2018年7月20日提交的美国临时申请专利序列号62/701,340、2018年11月7日提交的美国临时申请专利序列号62/756,643、2018年11月30日提交的美国临时申请专利序列号62/773,658、和2019年3月29日提交的美国临时申请专利序列号62/826,600的权益。上述引用的专利申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法使用经基因修饰的T细胞来更特异性和有效地靶向和杀伤癌细胞。从血液中收集T细胞后，对细胞进行工程改造，使其表面上包含CAR。可以使用CRISPR/Cas9基因编辑技术将CAR引入T细胞。将这些同种异体CART细胞注射入患者体内时，受体使T细胞能够杀伤癌细胞。
技术实现思路
在一些方面，本披露提供了经工程改造的免疫细胞(例如，T细胞)和产生已经使用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行编辑以破坏内源CD70表达(敲除CD70)...
【技术保护点】
1.一种经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞包含破坏的CD70基因和编码不结合CD70的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。/n
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
【国外来华专利技术】20180511 US 62/670,417;20180720 US 62/701,340;20181.一种经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞包含破坏的CD70基因和编码不结合CD70的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。
2.如权利要求1所述的经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞进一步包含破坏的T细胞受体α恒定区(TRAC)基因。
3.如权利要求1或2所述的经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞进一步包含破坏的β-2-微球蛋白(β2M)基因。
4.如权利要求2-3中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述破坏的TRAC基因包含编码所述CAR的核酸。
5.如权利要求1-4中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含结合抗B细胞成熟抗原(BCMA)的胞外结构域。
6.如权利要求5所述的经工程改造的T细胞，其中所述胞外结构域包含抗BCMA抗体。
7.如权利要求5所述的经工程改造的T细胞，其中所述胞外结构域包含抗BCMA单链可变片段(scFv)。
8.如权利要求7所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗BCMAscFv包含可变重(VH)链互补决定区(CDR)和与参考抗体相同的可变轻(VL)链CDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:60所示的VH和如SEQIDNO:61所示的VL。
9.如权利要求7所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗BCMAscFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:60和61所示的氨基酸序列。
10.如权利要求7所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗BCMAscFv包含SEQIDNO:59的氨基酸序列。
11.如权利要求1-4中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含结合CD33的胞外结构域。
12.如权利要求11所述的经工程改造的T细胞，其中所述胞外结构域包含抗CD33抗体。
13.如权利要求11所述的经工程改造的T细胞，其中所述胞外结构域包含抗CD33scFv。
14.如权利要求13所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD33scFv包含与参考抗体相同的VHCDR和相同的VL链CDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:140所示的VH和如SEQIDNO:141所示的VL。
15.如权利要求11所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD33scFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:140和141所示的氨基酸序列。
16.如权利要求11所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD33scFv包含SEQIDNO:137的氨基酸序列。
17.如权利要求1-4中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含结合CD19的胞外结构域。
18.如权利要求17所述的经工程改造的T细胞，其中所述胞外结构域包含抗CD19抗体。
19.如权利要求17所述的经工程改造的T细胞，其中所述胞外结构域包含抗CD19scFv。
20.如权利要求19所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD19scFv包含与参考抗体相同的VHCDR和相同的VL链CDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:152所示的VH和如SEQIDNO:153所示的VL。
21.如权利要求19所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD19scFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:152和153所示的氨基酸序列。
22.如权利要求19所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD19scFv包含SEQIDNO:151的氨基酸序列。
23.一种经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因；
(ii)破坏的β2M基因；
(iii)破坏的CD70基因；以及
(iv)编码结合CD70的CAR的核酸。
24.如权利要求23所述的经工程改造的T细胞，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸。
25.如权利要求23-24中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含含有抗CD70抗体的胞外结构域。
26.如权利要求23-24中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含含有抗CD70scFv的胞外结构域。
27.如权利要求26所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD70scFv包含与参考抗体相同的VHCDR和相同的VLCDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:51所示的VH和如SEQIDNO:52所示的VL。
28.如权利要求26所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD70scFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:51和52所示的氨基酸序列。
29.如权利要求26所述的经工程改造的T细胞，其中所示抗CD70scFv包含SEQIDNO:48或50的氨基酸序列。
30.如权利要求26所述的经工程改造的T细胞，其中所述抗CD70scFv包含SEQIDNO:50的氨基酸序列。
31.如权利要求1-30中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含CD28或41BB共刺激结构域。
32.如权利要求1-31中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含CD3ζ信号传导结构域。
33.如权利要求1-32中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述CAR包含CD8跨膜结构域。
34.如权利要求2-33中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中相对于未修饰的T细胞，所述TRAC基因中存在缺失。
35.如权利要求34所述的经工程改造的T细胞，其中所述缺失是15-30个碱基对。
36.如权利要求34所述的经工程改造的T细胞，其中所述缺失是20个碱基对。
37.如权利要求34所述的经工程改造的T细胞，其中所述缺失包含SEQIDNO:86。
38.一种经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸，所述CAR包含SEQIDNO:46所示的氨基酸序列；
(ii)破坏的β2M基因；和
(iii)破坏的CD70基因。
39.一种经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸，其中核酸序列与SEQIDNO:45至少90％相同；
(ii)破坏的β2M基因；和
(iii)破坏的CD70基因。
40.如权利要求39所述的经工程改造的T细胞，其中所述破坏的TRAC基因包含SEQIDNO:45所示的核酸序列。
41.一种经工程改造的T细胞，所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因，其包含与SEQIDNO:44至少90％相同的核酸序列；
(ii)破坏的β2M基因；和
(iii)破坏的CD70基因。
42.如权利要求41所述的经工程改造的T细胞，其中所述破坏的TRAC基因包含SEQIDNO:44所示的核酸序列。
43.如权利要求1-42中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述经工程改造的T细胞包含破坏的程序性细胞死亡1(PD-1)基因。
44.如权利要求1-43中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述经工程改造的T细胞在用靶细胞5次再激发后维持细胞毒性，其中所述靶细胞表达对所述CAR具有特异性的抗原。
45.如权利要求44所述的经工程改造的T细胞，其中所述经工程改造的T细胞在用靶细胞10次再激发后维持细胞毒性。
46.如权利要求40-41中任一项所述的经工程改造的T细胞，其中所述靶细胞是癌细胞。
47.一种包含经工程改造的T细胞的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞包含破坏的CD70基因和编码不结合CD70的CAR的核酸。
48.如权利要求47所述的细胞群，所述细胞群进一步包含破坏的TRAC基因。
49.如权利要求47或48所述的细胞群，所述细胞群进一步包含破坏的β2M基因。
50.如权利要求47-49中任一项所述的细胞群，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸。
51.如权利要求47-50中任一项所述的细胞群，其中所述CAR包含结合抗B细胞成熟抗原(BCMA)的胞外结构域。
52.如权利要求51所述的细胞群，其中所述胞外结构域包含抗BCMA抗体。
53.如权利要求51所述的细胞群，其中所述胞外结构域包含抗BCMA单链可变片段(scFv)。
54.如权利要求53所述的细胞群，其中所述抗BCMAscFv包含可变重(VH)链互补决定区(CDR)和与参考抗体相同的可变轻(VL)链CDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:60所示的VH和如SEQIDNO:61所示的VL。
55.如权利要求53所述的细胞群，其中所述抗BCMAscFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:60和61所示的氨基酸序列。
56.如权利要求53所述的细胞群，其中所述抗BCMAscFv包含SEQIDNO:59的氨基酸序列。
57.如权利要求47-50中任一项所述的细胞群，其中所述CAR包含结合CD33的胞外结构域。
58.如权利要求57所述的细胞群，其中所述胞外结构域包含抗CD33抗体。
59.如权利要求57所述的细胞群，其中所述胞外结构域包含抗CD33scFv。
60.如权利要求59所述的细胞群，其中所述抗CD33scFv包含与参考抗体相同的VHCDR和相同的VL链CDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:140所示的VH和如SEQIDNO:141所示的VL。
61.如权利要求59所述的细胞群，其中所述抗CD33scFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:140和141所示的氨基酸序列。
62.如权利要求59所述的细胞群，其中所述抗CD33scFv包含SEQIDNO:137的氨基酸序列。
63.如权利要求47-50中任一项所述的细胞群，其中所述CAR包含结合CD19的胞外结构域。
64.如权利要求63所述的细胞群，其中所述胞外结构域包含抗CD19抗体。
65.如权利要求63所述的细胞群，其中所述胞外结构域包含抗CD19scFv。
66.如权利要求65所述的细胞群，其中所述抗CD19scFv包含与参考抗体相同的VHCDR和相同的VL链CDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:152所示的VH和如SEQIDNO:153所示的VL。
67.如权利要求65所述的细胞群，其中所述抗CD19scFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:152和153所示的氨基酸序列。
68.如权利要求65所述的细胞群，其中所述抗CD19scFv包含SEQIDNO:151的氨基酸序列。
69.一种包含经工程改造的T细胞的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因；
(ii)破坏的β2M基因；
(iii)破坏的CD70基因；和
(iv)编码结合CD70的CAR的核酸。
70.如权利要求69所述的细胞群，其中所述CAR包含含有抗CD70抗体的胞外结构域。
71.如权利要求69所述的细胞群，其中所述CAR包含含有抗CD70scFv的胞外结构域。
72.如权利要求47-71中任一项所述的细胞群，其中所述CAR包含CD28或41BB共刺激结构域。
73.如权利要求47-72中任一项所述的细胞群，其中所述CAR包含CD3ζ信号传导结构域。
74.如权利要求47-73中任一项所述的细胞群，其中所述CAR包含CD8跨膜结构域。
75.一种包含经工程改造的T细胞的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因；
(ii)破坏的β2M基因；
(iii)破坏的CD70基因
(iv)编码CAR的核酸，所述CAR包含(a)包含抗CD70scFv的胞外结构域，(b)CD8跨膜结构域，和(c)包含41BB共刺激结构域和CD3z信号传导结构域的胞内结构域。
76.如权利要求69-75中任一项所述的细胞群，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸。
77.如权利要求71-76中任一项所述的细胞群，其中所述抗CD70scFv包含与参考抗体相同的VHCDR和相同的VLCDR，其中所述参考抗体包含如SEQIDNO:51所示的VH和如SEQIDNO:52所示的VL。
78.如权利要求77所述的细胞群，其中所述抗CD70scFv包含VH和VL链，所述VH和VL链分别包含SEQIDNO:51和52所示的氨基酸序列。
79.如权利要求77所述的细胞群，其中所示抗CD70scFv包含SEQIDNO:48或50的氨基酸序列。
80.如权利要求77所述的细胞群，其中所述抗CD70scFv包含SEQIDNO:50的氨基酸序列。
81.如权利要求48-80中任一项所述的细胞群，其中相对于未修饰的T细胞，所述TRAC基因中存在缺失。
82.如权利要求81所述的经工程改造的T细胞，其中所述缺失是15-30个碱基对。
83.如权利要求81所述的经工程改造的T细胞，其中所述缺失是20个碱基对。
84.如权利要求81所述的经工程改造的T细胞，其中所述缺失包含SEQIDNO:86。
85.一种包含经工程改造的T细胞的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸，所述CAR包含SEQIDNO:46所示的氨基酸序列；
(ii)破坏的β2M基因；和
(iii)破坏的CD70基因。
86.一种包含经工程改造的T细胞的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因，其中所述破坏的TRAC基因包含编码CAR的核酸，其中核酸序列与SEQIDNO:45至少90％相同；
(ii)破坏的β2M基因；和
(iii)破坏的CD70基因。
87.如权利要求86所述的细胞群，其中所述破坏的TRAC基因包含SEQIDNO:45所示的核酸序列。
88.一种包含经工程改造的T细胞的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞包含：
(i)破坏的TRAC基因，其包含与SEQIDNO:44至少90％相同的核酸序列；
(ii)破坏的β2M基因；和
(iii)破坏的CD70基因。
89.如权利要求88所述的细胞群，其中所述破坏的TRAC基因包含SEQIDNO:44所示的核酸序列。
90.如权利要求47-89中任一项所述的细胞群，其中所述经工程改造的T细胞在用靶细胞5次再激发后维持细胞毒性，其中所述靶细胞表达对所述CAR具有特异性的抗原。
技术研发人员：JA特雷特，D卡莱茨迪斯，ML德匡特，ZS帕达利亚，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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