抗CD73抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了抗CD73抗体及其用途。具体地，本发明专利技术提供了一种高亲和力高生物活性的CD73抗体，所述抗体能够和CD73高亲和力结合，并能显著抑制CD73蛋白酶活，诱导CD73的肿瘤细胞内化，从而治疗和/或预防癌症相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
抗CD73抗体及其用途
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及一种抗CD73抗体及其用途。
技术介绍
CD73，分化簇73，也叫5'-核苷酸酶，通过GPI(糖基磷脂酰肌醇)锚定在细胞膜上，结构为二聚体。CD73在肿瘤微环境中发挥重要作用，可以将AMP转化成腺苷，腺苷通过与特异的G蛋白偶联受体结合，导致免疫细胞在肿瘤部位浸润异常，调控多种癌症的增殖和迁移，主要抑制T细胞相关的免疫系统的功能，是肿瘤预后不良的标志。在过去的大量研究中表明，抑制CD73可以阻止肿瘤的发生和转移。不管是CD73的小分子酶抑制剂还是大分子抗体，都表现出了抗肿瘤效果。CD73表达在多种肿瘤细胞表面，包括肺癌、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞。除此之外，多种免疫细胞也受到CD73影响，CD73表达在Treg表面，参与Treg对免疫活化的抑制性调节；分泌的腺苷可以与DC细胞上腺苷受体结合，从而抑制DC的功能；CD73在M2型巨噬细胞上高表达，增强了肿瘤的转移。CD73靶点在肿瘤治疗中的潜力巨大，CD73的抗体还可以增强PD1抗体和CTLA4抗体的作用。但是目前还没有CD73的特异性靶向抗体上市。此外，由于鼠单抗在临床治疗时会引起人抗鼠抗体反应(humananti-mouseantibody，HAMA)，因此在临床治疗上受到限制。抗体人源化技术可以很大程度的降低鼠单抗的免疫原性。因此，鉴于CD73在各类相关疾病中作用和功能，本领域需要开发一种适于治疗患者的抗CD73人源化抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高亲和力高生物活性的抗CD73人源化抗体。在本专利技术的第一方面，提供了一种抗CD73的抗体，所述抗体包括轻链和重链，并且，所述的轻链的轻链可变区包括以下三个轻链CDR：SEQIDNO.:8所示的VL-CDR1，SEQIDNO.:9所示的VL-CDR2，和SEQIDNO.:10所示的VL-CDR3；其中，所述的重链的重链可变区包括以下三个重链CDR：SEQIDNO.:3所示的VH-CDR1，SEQIDNO.:4所示的VH-CDR2，和SEQIDNO.:5所示的VH-CDR3。在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能够保留CD73结合亲和力的衍生序列。在另一优选例中，所述的抗体的轻链包括所述的三个轻链CDR以及用于连接轻链CDR的轻链框架区；和所述的抗体的重链包括所述的三个重链CDR以及用于连接重链CDR的重链框架区。在另一优选例中，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。在另一优选例中，所述轻链可变区选自下组：序列如SEQIDNO.:6或SEQIDNO.:16所示的轻链可变区。在另一优选例中，所述抗体的轻链还包括轻链恒定区。在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。在另一优选例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。在另一优选例中，所述重链可变区选自下组：序列如SEQIDNO.:1或SEQIDNO.:15所示的重链可变区。在另一优选例中，所述的抗体的重链还包括重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。在另一优选例中，所述抗体为人源化抗体。在另一优选例中，所述抗体对人CD73蛋白结合的亲和力常数KD(M)为（0.5-10）×10-9，较佳地为（1-9）×10-9，更佳地为（5-6）×10-9。在另一优选例中，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或其组合。在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。在另一优选例中，所述的抗体包括单特异性、双特异性、或三特异性抗体。在本专利技术的第二方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i)轻链和/或重链，或者所述轻链和所述重链形成的抗CD73的抗体，其中，所述轻链的轻链可变区包括SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:9和SEQIDNO.:10所示的3个轻链CDR，而所述重链的重链可变区包括SEQIDNO.:3、SEQIDNO.:4和SEQIDNO.:5所示的3个重链CDR；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签。在另一优选例中，所述的重组蛋白(或多肽)包括融合蛋白。在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。在另一优选例中，所述的重组蛋白还包括与所述元件(i)融合在一起的额外的融合元件(或融合多肽片段)。在本专利技术的第三方面，提供了一种抗体制剂，所述的抗体制剂包括：(a)如本专利技术第一方面所述的抗体；以及(b)载体，所述的载体包括：缓冲剂、无菌水，任选的表面活性剂。在本专利技术的第四方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有本专利技术第三方面所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。在本专利技术的第五方面，提供了一种CAR构建物，所述的CAR构建物的抗原结合区域的scFv区段为特异性结合于CD73的结合区，并且所述scFv区段具有轻链可变区和重链可变区，其中，轻链可变区包括SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:9和SEQIDNO.:10所示的3个轻链CDR，而重链可变区包括SEQIDNO.:3、SEQIDNO.:4和SEQIDNO.:5所示的3个重链CDR。在本专利技术的第六方面，提供了一种重组的免疫细胞，所述的免疫细胞表达外源的本专利技术的第五方面所述的CAR构建物。在另一优选例中，所述的免疫细胞选自下组：NK细胞、T细胞。在另一优选例中，所述的免疫细胞来自人或非人哺乳动物(如鼠)。在本专利技术的第七方面，提供了一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物含有：(a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：如本专利技术第一方面所述的抗体、或本专利技术第二方面所述的重组蛋白、或其组合；和(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、或其组合。在本专利技术的第八方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如本专利技术第一方面所述的抗体、或本专利技术第二方面所述的重组蛋白、如本专利技术第五方面所述的CAR构建物、如本专利技术第六方面所述的免疫细胞、如本专利技术第七方面所述的抗体药物偶联物、或其组合，所述活性成分用于：(a)制备检测试剂或试剂盒；(b)制备预防和/或治疗CD73相关疾病的药物或制剂；和/或(c)制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。在另一优选例中，所述癌症或肿瘤选自下组：肺癌、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃肠癌、肝癌、淋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗CD73的抗体，其特征在于，所述抗体包括轻链和重链，/n并且，所述的轻链的轻链可变区包括以下三个轻链CDR：/nSEQ ID NO.:8所示的VL-CDR1，/nSEQ ID NO.:9所示的VL-CDR2，和/nSEQ ID NO.:10所示的VL-CDR3；/n其中，所述的重链的重链可变区包括以下三个重链CDR：/nSEQ ID NO.:3所示的VH-CDR1，/nSEQ ID NO.:4所示的VH-CDR2，和/nSEQ ID NO.:5所示的VH-CDR3。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗CD73的抗体，其特征在于，所述抗体包括轻链和重链，
并且，所述的轻链的轻链可变区包括以下三个轻链CDR：
SEQIDNO.:8所示的VL-CDR1，
SEQIDNO.:9所示的VL-CDR2，和
SEQIDNO.:10所示的VL-CDR3；
其中，所述的重链的重链可变区包括以下三个重链CDR：
SEQIDNO.:3所示的VH-CDR1，
SEQIDNO.:4所示的VH-CDR2，和
SEQIDNO.:5所示的VH-CDR3。


2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的轻链包括所述的三个轻链CDR以及用于连接轻链CDR的轻链框架区；和所述的抗体的重链包括所述的三个重链CDR以及用于连接重链CDR的重链框架区。


3.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：
(i)轻链和/或重链，或者所述轻链和所述重链形成的抗CD73的抗体，
其中，所述轻链的轻链可变区包括SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:9和SEQIDNO.:10所示的3个轻链CDR，而所述重链的重链可变区包括SEQIDNO.:3、SEQIDNO.:4和SEQIDNO.:5所示的3个重链CDR；
以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。


4.一种抗体制剂，其特征在于，所述的抗体制剂包括：
(a)如权利要求1所述的抗体；以及
(b)载体，所述的载体包括：缓冲剂、无菌水，任选的表面活性剂。


5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求4所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。


6.一种CAR构建物，其特征在于，所述的CAR构建物的抗原结合区域的scFv区段为特异性结合于CD73的结合区，并且所述scFv区段具有轻链可变区和重链可变区，其中，轻链可变区包括SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:9和SEQIDNO.:10所示的3个轻链CDR，而重链可变区包括SEQIDNO.:3、SEQIDNO.:4和SEQIDNO.:5所示的3个重链CDR。


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【专利技术属性】
技术研发人员：李德彬，宋作伟，路娜，于福涛，王小燕，薛玉婷，林超，许波琳，曲平，
申请(专利权)人：吴江近岸蛋白质科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32