抗B7H3抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途制造技术

本发明专利技术披露了抗B7H3抗体‑依喜替康类似物偶联物、其制备方法，以及其抗肿瘤的医药用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗B7H3抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
本公开涉及抗B7H3抗体-依喜替康类似物偶联物，其制备方法，包含其的药物组合物，以及其用于制备治疗B7H3介导的疾病或病症的药物中的用途；尤其在用于制备抗癌药物中的用途。
技术介绍
T细胞介导的免疫反应在机体抗肿瘤过程中发挥着极其重要的作用，而T细胞的活化和增殖不仅需要TCR识别抗原信号，还需要共刺激分子提供的第二信号。B7家族分子属于共刺激分子免疫球蛋白超家族，越来越多的研究表明，该家族分子在机体正常免疫功能和病理状态下均发挥了重要的调节作用。B7H3是B7家族的成员之一，属于I型跨膜蛋白，包含氨基端的一个信号肽，一个细胞外的免疫球蛋白样可变区(IgV)和恒定区(IgC)，一个跨膜区和一个含有45个氨基酸的胞质尾区(TissueAntigens.2007Aug；70(2):96-104)。目前，B7H3主要存在2种剪切体，B7H3a和B7H3b。B7H3a胞外段由IgV-IgC2个免疫球蛋白结构域组成，又称为2IgB7H3，而B7H3b胞外段由IgV-IgC-IgV-IgC4个免疫球蛋白结构域组成，又称为4IgB7H3。B7H3蛋白在正常组织、细胞中不表达或极低表达，却高表达于多种肿瘤组织，并与肿瘤的进展、患者的生存及预后密切相关。临床上已经报道，B7H3在许多癌症中，特别是在非小细胞肺癌、肾癌、泌尿道上皮癌、结直肠癌、前列腺癌、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌和胰腺癌中过表达(LungCancer.2009Nov；66(2):245-249；ClinCancerRes.2008Aug15；14(16):5150-5157)。此外，也有文献报道，在前列腺癌中，B7H3的表达强度与临床病理学恶性(诸如肿瘤体积、前列腺外侵袭或Gleason评分)正相关，且也与癌症进展相关(CancerRes.2007Aug15；67(16):7893-7900)。类似地，在多形性胶质母细胞瘤中，B7H3的表达与无事件存活负相关，且在胰腺癌中，B7H3的表达与淋巴结转移和病理学进展相关。因此，B7H3被认为是一种新的肿瘤标志物和潜在的治疗靶点。目前，已有针对B7H3靶点的治疗策略用于临床前研究，如靶向小鼠B7H3的抗体会增强瘤内的浸润性的CD8-阳性的T细胞和抑制肿瘤生长(ModPathol.2010Aug；23(8):1104-1112)。此外，WO2008/066691显示，识别B7H3变体B7H3a的抗体会对腺癌表现出体内抗肿瘤作用。在临床研究中，一种鼠源的B7H3抗体与放射性I131的偶联药物可显著抑制患者成神经母细胞瘤的生长[JNeufooocol97(3):409-l8(2010)]。但目前在研的项目都是鼠源抗体经人源化改造的人源化抗体，而人源化抗体在免疫时存在免疫原性相对较高的问题，在人体应用时是一个不利的因素。噬菌体展示技术(phagedisplaytechnology)是将外源蛋白质或多肽与噬菌体外壳蛋白融合表达，从而将外源蛋白表达在噬菌体的表面。噬菌体抗体库是将噬菌体展示技术、PCR扩增技术、蛋白表达技术相结合的一项运用综合技术手段所建立起来的抗体库。噬菌体抗体库最大的优点是不经体内免疫，模拟体内抗体生成的三个过程而制备出全人源的抗体。除此之外，噬菌体抗体库还具有以下优势：①实现了基因型与表型的统一；此外，实验方法简单、快速，传统的通过杂交瘤技术抗体产生方法需历经数月，而抗体库技术只需短短几周的时间；②表达的是完全人抗体，且分子量小，主要以活性片段Fab、scFv的形式表达，与完整抗体相比在组织穿透力方面都有明显优势；③筛选容量大，杂交瘤技术是在上千个克隆内筛选，抗体库技术可以在百万甚至亿万个分子中进行选择，筛选到的抗体种类多；④用途广泛，采用了原核表达系统，当大规模生产时优势更加明显(CurrOpinBiotechnol.2002Dec；13(6):598-602；Immunotechnology,2013,48(13)48(13):63-73)。抗体-药物偶联物(antibodydrugconjugate,ADC)将单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的细胞毒素相连，充分利用了抗体对正常细胞和肿瘤细胞表面抗原结合的特异性和细胞毒性物质的高效性，同时又避免了前者疗效偏低和后者毒副作用过大等缺陷。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体-药物偶联物能更精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响。目前已有多种ADC药物被用于临床或临床研究，如Kadcyla，是靶向Her2的曲妥珠单抗与DM1形成的ADC药物。同时，也有靶向B7H3的抗体及ADC药物的专利报道，如WO2008100934、WO2012147713、WO2014061277、WO2015184203、WO2016044383。用于抗体药物偶联物的具有细胞毒性的小分子有几类；其中有一类是喜树碱衍生物，它们通过抑制拓卜异构酶I而具有抗肿瘤作用的。报道喜树碱衍生物依沙替康(化学名：(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]咪唑并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮)应用于抗体偶联药物(ADC)的文献有WO2014057687；ClinicalCancerResearch(2016)22(20)：5097-5108；CancerSci(2016)107:1039-1046。但仍需进一步开发疗效更好的ADC药物。
技术实现思路
本公开涉及抗B7H3抗体的ADC及其用途，其中提供与B7H3的胞外区的氨基酸序列或三维结构结合的单克隆抗体或抗原结合片段与细胞毒性物质依喜替康类似物偶联的ADC药物。因此，本公开的目的为提供一种通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：其中：Y选自-O-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-、-O-CR1R2-(CRaRb)m-、-O-CR1R2-、-NH-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-或-S-(CRaRb)m-CR1R2-C(O)-；Ra和Rb相同或不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、羟烷基、环烷基或杂环基；或者，Ra和Rb与其相连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基；R1选自卤素、卤代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基或杂芳基；R2选自氢原子、卤素、卤代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基或杂芳基；或者，R1和R2与其相连接的碳原子一起形成环烷基或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180930 CN 2018111566675一种通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：



其中：
Y选自-O-(CR
aR
b)
m-CR
1R
2-C(O)-、-O-CR
1R
2-(CR
aR
b)
m-、-O-CR
1R
2-、-NH-(CR
aR
b)
m-CR
1R
2-C(O)-或-S-(CR
aR
b)
m-CR
1R
2-C(O)-；

R
a和R
b相同或不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、羟烷基、环烷基或杂环基；

或者，R
a和R
b与其相连接的碳原子一起形成环烷基或杂环基；

R
1选自卤素、卤代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

R
2选自氢原子、卤素、卤代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

或者，R
1和R
2与其相连的碳原子一起形成环烷基或杂环基；

或者，R
a和R
2与其相连的碳原子一起形成环烷基或杂环基；

m为0至4的整数；
n为1至10，n是小数或整数；
L为接头单元；
Pc为抗B7H3抗体或其抗原结合片段。


根据权利要求1所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：
分别如SEQIDNO：8、9和10氨基酸序列所示的重链HCDR1、HCDR2、HCDR3，或与SEQIDNO：8、9和10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的HCDR变体；和
分别如SEQIDNO：11、12和13氨基酸序列所示的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，或与SEQIDNO：11、12和13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的LCDR变体。


根据权利要求1或2所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段的轻链可变区上的轻链FR区来源于人种系轻链序列或其突变序列，和/或重链可变区上的重链FR区来源于人种系重链序列或其突变序列。


根据权利要求1至3中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含选自如下所示的重链可变区和/或轻链可变区：
其中所述重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO：6所示或与其具有至少95％序列同一性，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO：7所示或与其具有至少95％序列同一性。


根据权利要求1至4中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含抗体恒定区；所述抗体恒定区的重链恒定区来源于人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或与其具有至少95％序列同一性，所述抗体恒定区的轻链恒定区来源于人抗体κ、λ链或与其具有至少95％序列同一性；优选地，所述重链恒定区的氨基酸序列源于人IgG1或与其具有至少95％序列同一性。


根据权利要求1至5中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述Pc为全长抗体，其中所述的全长抗体选自：
由SEQIDNO:14所示的重链序列和SEQIDNO:15所示的轻链序列组成的h1702抗体，和
由SEQIDNO:14所示的重链序列和SEQIDNO:16所示的轻链序列组成的h1702DS抗体。


根据权利要求1至5中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗原结合片段。


根据权利要求1至7中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中n为2至8，优选为5至9，n是小数或整数。


根据权利要求1至8中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中：
Y为-O-(CR
aR
b)
m-CR
1R
2-C(O)-；

R
a和R
b相同或不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素或烷基；

R
1为卤代烷基或C
3-6环烷基；

R
2选自氢原子、卤代烷基或C
3-6环烷基；

或者，R
1和R
2与其相连接的碳原子一起形成C
3-6环烷基；

m为0或1。


根据权利要求1至9中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y选自：





根据权利要求1至10中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y的O端与接头单元L相连。


根据权利要求1至11中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中接头单元-L-为-L
1-L
2-L
3-L
4-，

L
1为
s
1为2至8的整数；

L
2为化学键；

L
3为四肽残基；

L
4为-NR
5(CR
6R
7)t-，R
5、R
6或R
7相同或不同，且各自独立地为氢原子或烷基，t为1或2。



根据权利要求1至12中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述的接头单元-L-，其L
1端与Pc相连，L
4端与Y相连。



根据权利要求1至13中任一项所述的通式(Pc-L-Y-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述的L<...

【专利技术属性】
技术研发人员：应华，张玲，张婷，张蕾，许建烟，陶维康，
申请(专利权)人：江苏恒瑞医药股份有限公司，上海恒瑞医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32