抗人CD73抗体制造技术

本发明专利技术提供了抗人CD73抗体。具体地，本发明专利技术提供了一种新的抗人CD73的人源化抗体。本发明专利技术的抗体能够特异性地结合CD73抗原，具有较高的亲和力和生物活性。的亲和力和生物活性。的亲和力和生物活性。

【技术实现步骤摘要】
抗人CD73抗体


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及一种抗CD73人源化单克隆抗体及其制剂。

技术介绍

[0002]CD73，分化簇73，也叫5'
‑
核苷酸酶，通过GPI(糖基磷脂酰肌醇)锚定在细胞膜上，结构为二聚体。CD73在肿瘤微环境中发挥重要作用，可以将AMP转化成腺苷，腺苷通过与特异的G蛋白偶联受体结合，导致免疫细胞在肿瘤部位浸润异常，调控多种癌症的增殖和迁移，主要抑制T细胞相关的免疫系统的功能，是肿瘤预后不良的标志。
[0003]在过去的大量研究中表明，抑制CD73可以阻止肿瘤的发生和转移。不管是CD73的小分子酶抑制剂还是大分子抗体，都表现出了抗肿瘤效果。CD73表达在多种肿瘤细胞表面，包括肺癌、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞。除此之外，多种免疫细胞也受到CD73影响，CD73表达在Treg表面，参与Treg对免疫活化的抑制性调节；分泌的腺苷可以与DC细胞上腺苷受体结合，从而抑制DC的功能；CD73在M2型巨噬细胞上高表达，增强了肿瘤的转移。
[0004]CD73靶点在肿瘤治疗中的潜力巨大，CD73的抗体还可以增强PD1抗体和CTLA4抗体的作用。但是目前还没有CD73的特异性靶向抗体上市。此外，由于鼠单抗在临床治疗时会引起人抗鼠抗体反应(human anti
‑
mouse antibody，HAMA)，因此在临床治疗上受到限制。抗体人源化技术可以很大程度的降低鼠单抗的免疫原性。
[0005]因此，鉴于CD73在各类相关疾病中作用和功能，本领域需要开发适于治疗患者的抗CD73人源化抗体。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种高亲和力高生物活性的抗CD73人源化抗体。
[0007]在本专利技术的第一方面，提供了一种抗CD73的抗体，所述抗体包括轻链和重链，并且，所述的轻链的轻链可变区包括以下三个轻链CDR：SEQ ID NO.:18所示的VL
‑
CDR1，SEQ ID NO.:19所示的VL
‑
CDR2，和SEQ ID NO.:20所示的VL
‑
CDR3；其中，所述的重链的重链可变区包括以下三个重链CDR：SEQ ID NO.:39所示的VH
‑
CDR1，SEQ ID NO.:16所示的VH
‑
CDR2，和SEQ ID NO.:17所示的VH
‑
CDR3。
[0008]在另一优选例中，所述VH
‑
CDR1的SEQ ID NO.:39为GYXFTGYY, 式中X为Ser或Thr。
[0009]在另一优选例中，所述的抗体的轻链包括所述的三个轻链CDR以及用于连接轻链CDR的轻链框架区；和所述的抗体的重链包括所述的三个重链CDR以及用于连接重链CDR的重链框架区。
[0010]在另一优选例中，所述轻链可变区选自下组：序列如SEQ ID NO.: 1、SEQ ID No.:6、SEQ ID No.:8、或SEQ ID No.:10所示的轻链可变区。
[0011]在另一优选例中，所述抗体的轻链还包括轻链恒定区。
[0012]在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。
[0013]在另一优选例中，所述重链可变区选自下组：序列如SEQ ID NO.: 2、SEQ ID No.:5、SEQ ID No.:7、或SEQ ID No.:9所示的重链可变区。
[0014]在另一优选例中，所述抗体的重链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQ ID NO.:15或SEQ ID No.:21所示的VH
‑
CDR1，SEQ ID NO.:16所示的VH
‑
CDR2，和SEQ ID NO.:17所示的VH
‑
CDR3。
[0015]在另一优选例中，所述的抗体的重链还包括重链恒定区。
[0016]在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。
[0017]在另一优选例中，所述抗体为人源化抗体。
[0018]在另一优选例中，所述抗体特异性结合CD73。
[0019]在另一优选例中，所述抗体对人CD73的亲和力的KD值(M)为1.0E
‑
10～2.0E
‑
12。
[0020]在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。
[0021]在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。
[0022]在另一优选例中，所述的抗体包括单特异性、双特异性、或三特异性抗体。
[0023]在本专利技术的第二方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i) 轻链和/或重链，或者所述轻链和所述重链形成的抗CD73的抗体，其中，所述轻链的轻链可变区包括SEQ ID No.: 18、SEQ ID No.:19和SEQ ID No.:20所示的3个轻链CDR，而所述重链的重链可变区包括SEQ ID No.: 39、SEQ ID No.:16和SEQ ID No.:17所示的3个重链CDR；以及(ii) 任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
[0024]在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签。
[0025]在另一优选例中，所述的重组蛋白(或多肽)包括融合蛋白。
[0026]在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。
[0027]在另一优选例中，所述的重组蛋白还包括与所述元件(i)融合在一起的额外的融合元件(或融合多肽片段)。
[0028]在本专利技术的第三方面，提供了一种抗体制剂，所述的抗体制剂包括：(a) 如本专利技术第一方面所述的抗体；以及(b) 载体，所述的载体包括：缓冲剂、无菌水，任选的表面活性剂。
[0029]在本专利技术的第四方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有本专利技术第三方面所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。
[0030]在本专利技术的第五方面，提供了一种CAR构建物，所述的CAR构建物的抗原结合区域的scFv区段为特异性结合于CD73的结合区，并且所述scFv区段具有轻链可变区和重链可变区，其中，轻链可变区包括SEQ ID No.: 18、SEQ ID No.: 19和SEQ ID No.: 20所示的3个轻链CDR，而重链可变区包括SEQ ID No.: 39、SEQ ID No.: 16和SEQ ID No.: 17所示的3个重链CDR。
[0031]在本专利技术的第六方面，提供了一种重组的免疫细胞，所述的免疫细胞表达外源的如本专利技术的第五方面所述的CAR构建物。
[0032]在另一优选例中，所述的免疫细胞选自下组：NK细胞、T细胞。
[0033]在另一优选例中，所述的免疫细胞来自人或非人哺乳动物(如鼠)。
[0034]在本专利技术的第七方面，提供了一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD73抗体，其特征在于，所述抗体包括轻链和重链，并且，所述的轻链的轻链可变区包括以下三个轻链CDR：SEQ ID NO.:18所示的VL
‑
CDR1，SEQ ID NO.:19所示的VL
‑
CDR2，和SEQ ID NO.:20所示的VL
‑
CDR3；其中，所述的重链的重链可变区包括以下三个重链CDR：SEQ ID NO.:39所示的VH
‑
CDR1，SEQ ID NO.:16所示的VH
‑
CDR2，和SEQ ID NO.:17所示的VH
‑
CDR3。2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的轻链包括所述的三个轻链CDR以及用于连接轻链CDR的轻链框架区；和所述的抗体的重链包括所述的三个重链CDR以及用于连接重链CDR的重链框架区。3.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：(i) 轻链和/或重链，或者所述轻链和所述重链形成的抗CD73的抗体，其中，所述轻链的轻链可变区包括SEQ ID No.: 18、SEQ ID No.: 19和SEQ ID No.: 20所示的3个轻链CDR，而所述重链的重链可变区包括SEQ ID No.: 39、SEQ ID No.: 16和SEQ ID No.: 17所示的3个重链CDR；以及(ii) 任选的协助表达和/或纯化的标签序列。4.一种抗体制剂，其特征在于，所述的抗体制剂包括：(a) 如权利要求1所述的抗体；以及(b) 载体，所述的载体包括：缓冲剂、无菌水，任选的表面活性剂。5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求4所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。6.一种CAR构建物，其特征在于，所述的CAR构建物的抗原结合区域的scFv区段为特异性结合于CD73的结合区，并且所述scFv区段具有轻链可变区和重链可变区，其中，轻链可变区包括SEQ ID No.: 18、SEQ ID No.: 19和SEQ ID No.: 20所示的3个轻链CDR，而重链...

【专利技术属性】
技术研发人员：李德彬，宋作伟，路娜，于福涛，王小燕，薛玉婷，林超，许波琳，曲平，
申请(专利权)人：吴江近岸蛋白质科技有限公司，
类型：发明
国别省市：