用作RAF-1抑制剂的化合物、制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及医药化学技术领域，具体涉及用作RAF‑1抑制剂的化合物、制备方法和用途。本发明专利技术提供具有改进结构的吡唑啉酮‑吲哚啉酮衍生物或其药学上可接受的盐，通过试验验证，本发明专利技术化合物对Raf‑1具有显著的抑制作用，能够用于治疗和预防对抑制Raf‑1过量表达或活性紊乱具有响应的疾病，比如某些癌症和纤维化疾病。

【技术实现步骤摘要】
用作RAF-1抑制剂的化合物、制备方法和用途
本专利技术涉及医药化学
，具体涉及用作RAF-1抑制剂的化合物、制备方法和用途。
技术介绍
蛋白激酶参与非常复杂的信号级联，所述信号级联调节大部分细胞功能，包括细胞存活和增殖，已经对这些信号传导通路进行了大量研究，特别是在细胞功能失调导致的障碍例如癌症的情况中。例如，已经对促分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK)级联进行了深入地研究，该通路中的激酶，例如RAS、RAF、MEK和ERK，已经被开发利用为药物研究的靶点。Raf激酶家族有3个成员:Raf-1/C-Raf、B-Raf和A-Raf。三个家族成员都与肿瘤发生相关。Raf-1是首先被验证的亚型[BonnerTIetalMolCellBiol1985；5(6):1400-7],它在调控生长因子信号通路的细胞效应方面发挥关键作用[WasylykCetalMolCellBiol1989；9(5):2247-50；KolchWetalNature1991；349(6308):426-8；JamalSetalNature1990；344(6265):463-6]。Raf-1能介导肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡等多种生理过程,对肿瘤的发生和发展有重要促进作用[LiJetalPharmazie2012；67(8):718-24]。Raf-1的调控是以激活/去激活循环的方式进行的。在Raf-1处于非激活状态时,Raf-1以封闭环的形式存在。封闭环是N端调控区域折叠封闭了催化区域而形成(TranNHetalJBiolChem2003；278(13):11221-6)。当激素、生长因子等与细胞表面受体结合时,细胞中的Ras-GTP增加,进而激活Ras；Ras的激活会引发Ras-GTP与Raf-1直接结合,从而将细胞浆中的Raf-1二聚体募集到细胞膜上。募集到膜上的Raf-1发生磷酸化而激活。最终,激活的Raf-1与蛋白磷酸化酶PP5特异性结合从而使得Raf-1发生去磷酸化,导致Raf-1回到非激活状态。Raf-1通过参与细胞凋亡的调节、促进肿瘤细胞的运动、抑制肿瘤细胞的增殖与分化等作用，影响癌症的发生和发展进程。具体体现在一下几个方面：Raf-1可以通过线粒体途径来发挥抑制细胞凋亡的作用(LeichtDTetalBiochimBiophysActa2007；1773(8):1196-212；DhillonASetalOncogene2007；26(22):3279-90；KholodenkoBNetalNatRevMolCellBiol2010；11(6):414-26)。当凋亡抑制蛋白Bcl-2过表达时,Raf-1被Bcl-2激活并将抑制细胞凋亡信号传递至线粒体(WangHGetalCell1996；87(4):629-38.)。此外,部分生长因子和p21活化激酶(P21-activatedkinases,PAK)共同参与了Raf-1激酶的S338位点的磷酸化(WuXetalJCellBiochem2008；105(1):167-75；JinSetalJBiolChem2005；280(26):24698-705),进而促进Raf-1转位至线粒体。另外，Raf-1介导了Bcl-2家族成员促凋亡蛋白BAD的磷酸化失活(WangHGetalCell1996；87(4):629-38)。Raf-1作为支架蛋白来募集蛋白激酶C-θ(PKC-θ),进而诱导BAD磷酸化(HindleyAetalCellSignal2007；19(3):547-55)。Raf-1与线粒体的电压依赖性阴离子通道(voltagedependentanionchannels,VDACs)直接相互作用,可能抑制了细胞色素C从线粒体向胞浆的释放[LeMellayVetalBMCCellBiol2002；3:14]。且与Raf激酶抑制蛋白RKIP分离的Raf-1转位至线粒体,抑制了细胞凋亡,最终促进癌症发生(KimSYetalJMicrobiolBiotechnol2011；21(5):525-8；HsuYLetalJAgricFoodChem2012；60(3):852-61)。Fas是肿瘤坏死因子受体家族成员,广泛存在于组织细胞。研究显示,Rock2激酶活性增高可促进细胞骨架连接蛋白(ezrin)发生磷酸化而激活,进而促进Fas在Raf-1敲除的胚胎成纤维细胞的细胞膜上募集和表达,最终促进细胞凋亡[PiazzollaDetalJCellBiol2005；171(6):1013-22；EhrenreiterKetalJCellBiol2005；168(6):955-64]。Fas活化可促进Raf-1-Rock2络合物的形成,下调Rock2激酶的活性。因此,Raf-1通过与Rock2直接结合来降低Rock2的活性,从而反馈性地抑制Fas在细胞膜表面的表达,最终抑制细胞凋亡的发生。Raf-1在抑制细胞凋亡过程中其他的作用靶点是促凋亡激酶:细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosissignalregulating2(mammalianSterile20-likekinase2,MST2),Raf-1直接与之结合,并抑制该激酶的活性。这些抑制效应不需要Raf-1激酶的活性而是通过Raf-1与促凋亡激酶直接结合而介导的。ASK1位于JNKMPAK和p38MPAK上游,通过激活死亡受体(如TNF-α、Fas)途径来促进细胞凋亡(RubioloCetalBlood2006；108(1):152-9；TobiumeKetalEMBORep2001；2(3):222-8)。在人内皮细胞中，Raf-1通过结合并抑制线粒体中ASK1的激酶活性，抑制细胞凋亡的发生。在大鼠心脏中特异性的敲除raf-1基因,导致由心肌细胞凋亡增加而引起的心室扩大症和纤维症，同时，敲除ASK1能抑制上述症状的发生。以上研究阐明了Raf-1对ASK1的抑制效应的病理生理学意义(YamaguchiOetalJClinInvest2004；114(7)：937-43.)。Raf-1与MST2的SARAH结构域结合，进而干扰了MST2二聚化作用及募集。Raf-1激酶失活的突变体也可以抑制MST2激活。MST2活性在raf-1敲除的细胞中显著提高(O’NeillEetalScience2004；306(5705)：2267-70)。这些都表明了Raf-1可以直接与ASK1激酶和MST2激酶结合,进而抑制它们的活性,最终发挥抑制细胞凋亡的作用。Raf-1可通过下调Rho激酶-α(Rok-α)的活性来促进肿瘤细胞的运动(EhrenreiterKetalJCellBiol2005；168(6):955-64)。raf-1敲除的细胞中,使用Rok-α的化学抑制剂抑制Rok-α的活性或诱导Rok-α的负调控结构域发生突变,可以逆转因raf-1敲除而对细胞运动的抑制作用,该结果表明,在细胞运动过程中Rok-α是Raf-1的唯一作用靶点(EhrenreiterKetalJCellBiol2005；168(6):955-64)。对其机理的研本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种化合物，其特征在于，选自式(Ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐：/n

【技术特征摘要】
1.一种化合物，其特征在于，选自式(Ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐：



其中R1选自H、甲基、乙基、丙基、异丙基、苯甲基、烯丙基、溴代乙基、溴代丙基、辛基。


2.一种如权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，以式(Ⅱ)和式(Ⅲ)或式(Ⅳ)所示化合物为原料制备而成：





3.一种药物组合物，其特征在于，包含至少一种药用辅料和作为活性成分的治疗有效量的权利要求1～2中任一项所述化合物；所述药用辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。


4.一种如权利要求1～2任...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪振宇，文卡塔·普拉塔·雷迪·伽拉帕里，拉亚·瑟哈拉·雷迪·毕吉维穆拉，牛红蕊，苗站会，刘鼎，路平，
申请(专利权)人：新乡医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南;41